鸡肠道乳酸菌的分离与鉴定

韩旭 叶飞

【摘   要】 本试验通过选取鸡肠道中的菌种并对其进行筛选，培养和鉴定，利用乳酸菌产酸有“溶钙圈”特性利用MRS+CaCO3选择培养基进行培养挑选，初步认为菌株可能为乳酸菌属。

【关键词】 肠道;乳酸菌;筛选

中图分类号：S859.1              文献识别码：A               文章编号：2096-1073（2020）11-0052-53

[Abstract] In this experiment， bacterial strains in the chicken intestinal tract were selected and screened for culture and identification. The culture and selection of culture medium by MRS+CaCO3 were conducted based on the acid production of lactobacillus with the "callysocytic" property. It was preliminarily believed that the bacterial strains might be lactobacillus.

[Key words] intestinal tract; Lactic acid bacteria; screening

乳酸菌是一种无芽孢的革兰氏阳性细菌，这些细菌在自然界中极其广泛，其中大多数是人与动物一种重要的微生物群，具有必要的生理功能，主要存在于人与动物的肠道内在道中，它有助于消化和吸收各种肠道内的营养物质，并调节肠道内的pH值。鸡肠粘膜上皮细胞表面及周围黏附较大乳酸菌的数量。本试验主要通过选取鸡肠道中的菌种并对其进行筛选、培养和鉴定，以进一步确定其归属，对于研究鸡肠道乳酸菌的功能有重要意义。

1  材料与方法

1.1  试验材料

10-15日龄的鸡五只购自吉林市九站街;酵母膏、牛肉膏、胰蛋白胨由北京奥博星生物技术有限公司提供;其他试验仪器设备及试剂均由吉林农业科技学院生物技术实验室提供。

1.2  试验方法

1.2.1  乳酸菌的分离    在超净工作台中，解刨分离鸡盲肠内黏膜表面附着的内容物，将其融于无菌水中，保持试管中肠道内容物稀释度为10-1，取此试管中的1mL加入到装有9mL生理盐水的试管中，依次进行梯度稀释为10-1～10-6。然后取出稀释度为10-4、10-5、10-6稀释浓度的200ul内容物悬液加于MRS-CaCO3选择固体培养基上，涂布器将其均匀平布。带培养基充分吸收菌悬液后，编号为S-1、S-2放入CO2培养箱中5%CO2浓度下，37℃倒置培养至平皿上有乳白色菌落。

1.2.2  菌株革兰氏染色鉴定    结晶紫进行初染1min，用蒸馏水进行冲洗→碘液再媒染1min，用蒸馏水进行冲洗→乙醇再脱色30s，用蒸馏水进行冲洗并用吸水纸吸取水分→番红复染1min，用蒸馏水进行冲洗，用吸水纸干燥后，观察菌体形态与菌体染色情况。若为蓝紫色则为G+菌，若为红色则为G-菌。由于乳酸杆菌为G+菌，则可以判断可能为乳酸杆菌。

1.2.3  菌种各项能力指标测定    产酸能力：将纯化的菌株划线接种于MRC-CaCO3培养基上，放入CO2培养箱中培养，每日测定MRC-CaCO3培養基上透明圈的直径，记录相应培养天数，乳酸菌产酸能力=透明圈直径/天数，以比值的数值大小来判断菌株产酸的能力。

生化指标：挑取革兰氏染色后鉴定为阳性的菌株，对其进行过氧化氢酶、硝酸盐还原试验、明胶液化试验。

耐胆盐能力：取12灭菌装有7ml液体MRS培养基的试管，加入胆盐后分别达到0.1%、0.3%和0.5%的浓度，然后将培养并计数的菌液加入MRS培养基中，使培养基中的乳酸菌数达到106CFU/ml，放二氧化碳培养箱培养48h，用平板涂布法计算乳酸菌在该条件下的存活数。

2  结果与分析

2.1  菌种形态及革兰氏染色反应

观察菌株的菌落形态，并对菌株进行革兰氏染色鉴定，结果见表1。表1显示，其中有2株为G+杆菌，分别为L-1和L-3。

2.2  菌株各项能力指标测定结果

菌株产酸能力测定、生化鉴定、耐胆盐测定结果分别见表2、表3、表4。表2表明此两菌株具有产酸能力;表3表明两菌株均不能在接触酶试验中产生气泡，均不能还原硝酸盐，不能液化明胶，试验结果为阴性，可初步认为是乳酸杆菌属;表4表明两菌株能适应0.1%～0.5%的胆盐浓度。

3  结论

本试验从鸡肠道中成功分离出俩株菌株，经过外表形态观察为边缘光滑且突出的乳白色菌落，经过革兰氏染色后结果显示为阳性菌，以及接触酶、明胶液化、硝酸盐等试验结果为阴性，初步认定可能为乳酸菌属。此菌种具体的信息，是否还有更大的发现和价值，还有待于进一步研究。

参考文献：

[1] 张为巍. 产L乳酸菌的选育及发酵工艺研究[D]. 武汉：湖北工业大学， 2012.

[2] 李军训. 微生物固态发酵植物饼粕的研究[D]. 泰安：山东农业大学， 2013.

（编辑：李丹）