新城疫病毒F 蛋白B 细胞抗原表位鉴定

赵月兵 王东 王铁菊 马学忠

（河南省南阳市动物疫病预防控制中心 473000）

1 新城疫（ND）

新城疫是由新城疫病毒（Newcastle Disease Virus，NDV）引起的一种急性、高度致死性的禽类传染病，被国际兽疫局（Office International des Epizooties，OlE） 列为对畜禽危害最大的A 类传染病之一。自1926 年从印度尼西亚爪哇分离到NDV以来，在世界上已发生了4 次ND 大流行，造成了巨大的经济损失。ND 也是一直严重危害我国养禽业的疫病之一，但由于疫苗的广泛使用，此病己基本得到较好控制，近年来ND 的流行出现了以下新特点。

（1） 免疫鸡群发生鸡新城疫流行。经过多次免疫的鸡群仍然发生本病，多发生在二免与三免之间。造成免疫失败的主要原因是现行疫苗越来越不足以抵挡野毒的侵袭。

（2） 病鸡群出现亚临床症状或非典型症状，主要表现为呼吸道症状和神经症状，产蛋鸡主要表现为产蛋量下降。由于病鸡常出现呼吸困难、甩头、张口呼吸等症状，与其他一些呼吸道疾病如传染性喉气管炎、传染性支气管炎、慢性呼吸道病等病的症状十分相似，给本病诊断增加了难度。

（3） 低发病率和低死亡率。目前出现的鸡新城疫发病率一般在10%～25%，死亡率在15%～35%，产蛋鸡产蛋率下降30%左右。

（4） 剖检病变不明显。典型鸡新城疫病变明显部分表现在腺胃黏膜、肌胃角质膜下出血，肠黏膜出血，盲肠扁桃体肿大、坏死、出血。目前经过免疫的鸡群发生鸡新城疫时多数无上述明显病变，有的只有十二指肠、直肠泄殖腔黏膜有出血点，腺胃、肌胃基本无病变。

（5） 鸡群发生鸡新城疫时多继发大肠杆菌病。

本项鉴定应用生物信息学技术系统分析NDVF 蛋白生物学特性、一级结构和二级结构特性，应用多肽合成技术、基因工程技术和单克隆抗体技术，通过合成全部覆盖F 蛋白一级结构序列的重叠多肽，结合F 蛋白的三维空间结构分析、鉴定F 蛋白的B 细胞抗原表位谱。为全面认识机体免疫系统对NDV 的识别规律，探讨体液免疫系统抵抗NDV 感染的本质提供重要的理论依据。同时，通过全面认识和定位NDV 的B 细胞抗原表位谱为新型、高效、安全、营养的新型疫苗设计和病毒抗体检测提供特异性的参考靶点。传统疫苗由于成分复杂，在引起保护性免疫反应的同时，还刺激机体产生针对非特异性蛋白的大量无关抗体，大大消耗了机体免疫系统的资源，致使免疫系统不能最大化的充分发挥有效作用。传统检测NDV 病毒抗体的方法为HI 实验，该方法不仅操作烦琐，还不能准确反映血清抗体中和性，本项研究通过NDV 中和性抗原表位的鉴定，为筛选检测血清中和性抗体的候选表位抗原，设计NDV 血清抗体检测的多肽-ELISA 检测方法奠定基础，为疫苗免疫效果评价和最佳免疫时间确定提供技术依据。另外，通过全面认识和定位NDVB 细胞抗原表位可以了解该病毒抗原变异规律。揭示其免疫保护和免疫逃逸的规律。最后，NDVB 细胞抗原表位的鉴定对进一步研究动物机体体液免疫的启动规律具有重要的指导意义。

2 本鉴定的创新点有

（1） 详细地绘制NDV F 蛋白的B 细胞抗原表位图谱。证明F 蛋白中含有4 个中和性单克隆抗体识别的线性表位： EP1：36TLRSETSTYNLTV48；EP2： 66SNGNYKF72；EP3： 210DRPRVYTITAADDYQFS226；EP4： 316SWSARGSLAVTI327 和5个多抗反应位点： ES1： 81NLPASYNYCRLVSRSLTV98；ES2：311GSLAVTIHGGNYPGALRPVTLV332；ES3： 341FELIPNPELA KNLVTEYG358；ES4： 403NSPLKIAGAFGFK415；ES5： 409RA IRRIAVPVVS420。

（2） 应用单克隆抗体识别的表位多肽187CDSSDRPRVYTIT199 和337WSARGSLAVTIHG349 与载体蛋白KLH 偶联后，免疫小鼠能产生针对其多肽本身的抗体，该抗体能在鸡胚成纤维细胞上中和鸡NDV 血清I 型病毒的增殖。

（3） 对揭示NDV 体液免疫发生的本质具有重要意义，同时为设计ND 新型表位疫苗奠定基础。

综上所述，本鉴定结合现实生产，技术路线正确，鉴定方法先进，设计合理，资料完整详实，数据可靠，已达到同类鉴定的国内领先水平，具有较大的学术理论价值和应用前景。