传统口蹄疫灭活疫苗效力检测方法对动物替代方法应用效果研究

张常锁 张金凤 吕鲁杰 陈 君 聂培婷

（天康生物股份有限公司制药事业部，新疆乌鲁木齐 830032）

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的传染病，严重危害各国的畜牧业。防控口蹄疫疫病的方式，主要采取强制免疫口蹄疫灭活疫苗。我国在检测口蹄疫灭活疫苗效力中规定为疫苗50%动物保护剂量（PD50）。我国强制免疫口蹄疫疫病，保证防控的效果，需要大量的本动物进行效力检验。检验动物的获取比较困难，成本高，劳动强度大，周期长。国内外在口蹄疫灭活疫苗效力检验研究中，积极探索可替代本动物方法。

1 材料与方法

1.1 材料

实验动物：从试验动物厂获取400只普通级豚鼠，300-400 g。从定点动物基地，获取136只健康非免疫牛，6-12月龄。

病毒：从公司中获取FMDV Asia-1/JSL MF8BF2细胞毒，FMDV Asia-1/JSL MF8乳鼠毒。

疫苗：选取6批牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗。

建立豚鼠发病模型：随机选取8只豚鼠，平均分为两组。一组FMDV Asia-1/JSL MF8BF2细胞毒进行攻毒。一组用FMDV Asia-1/JSL MF8乳鼠毒进行攻毒。

豚鼠免疫剂量试验：选取四组豚鼠，每组15只。三组为免疫组，一组为空白对照组。分别选取0.5 ml、1 ml、1.5 ml的免疫剂量。四周后，四组豚鼠均接种FMDV Asia-1/JSL MF8BF2细胞毒。

1.2 试验口蹄疫灭活疫苗效力

60只豚鼠随机分为四组，每组15只。分别选取0.125 ml、0.25 ml、0.5 ml、1 ml的免疫剂量，检测牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗。免疫四周后。全部FMDV Asia-1／JSL MF8BF2细胞毒攻毒。观察10 d，计算疫苗的PD50。

选取健康非免疫牛18只，随机分为三组，每组6只。牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗分别免疫0.22 ml、0.67 ml、2 ml。三周后，全部进行FMDV Asia-1／JSL MF8BF2攻毒。观察10 d，计算疫苗的PD50。

1.3 血清学试验

在免疫第一周、第二周、第三周、第四周，分别在每组随机选取豚鼠，进行心脏采血，检测FMDV Asia-1型抗体效价。

2 结果与分析

细胞毒、乳鼠毒攻毒后，豚鼠均出现典型临床症状，并且更明显的是乳鼠毒，豚鼠四肢趾部有明显的水泡。根据豚鼠的发病情况，计算豚鼠的半数感染量105.67/0.2ml。通过细胞毒感染，对照组、108发病率为0。107、106的发病率为25%。105的发病率为75%。103、104的发病率为100%。

豚鼠免疫后四周，进行细胞毒攻毒。使用1.5 ml剂量组的豚鼠，保护率为100%。1 ml剂量组也为100%。0.25ml剂量组的为0。0.5ml剂量组的为70%。因此，最适免疫剂量为1 ml。

进行PD50效力试验，结果如下。N010与N007实验结果多次重复没有大的差距，具有良好的重复性和稳定性。

表1 牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗效力检验

对照组第四周后抗体阴性。在免疫第一周后，豚鼠出现抗体，在第二周后，0.25 ml剂量组、1 ml剂量组的抗体水平有所减少，随后增加，到第四周后，达到最高的抗体水平。抗体水平与攻毒后保护率呈现正向关系。攻毒保护与抗体效价无明显的临界值。豚鼠PD50与牛PD50有明显的线性关系。

图1 豚鼠PD50预测牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗效力

3 总结

本次研究的试验动物使用豚鼠，对口蹄疫灭活疫苗的效力进行评价，替代本动物牛，检测牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗的效力。结果显示牛PD50与豚鼠PD50检测结果明显相关，具有显著的线性关系。免疫剂量不同，抗体效价也有不同，呈现正相关的关系。但也有几乎检测不到抗体的动物，受到保护，有抗体效价高的，仍然发病，说明血清学方法检测稳定性较差，需要尽量增加试验动物的数量。