HPLC法测定解郁合剂中补骨脂的含量

韩梅海，崔国涛，韩 娴

（滨州华海白癜风医院，山东 滨州 256600）

解郁合剂为我院制剂，由当归、丹参、柴胡、香附、郁金等12味中药组成，能疏肝行气，活血祛风，补益肝肾，用于肝郁气滞所致白癜风的治疗[1]。本品为复方制剂，如按《中国药典》方法[2]开展补骨脂的含量测定，会出现杂质峰干扰大，异补骨脂素峰形小，识别困难，导致测定结果不准确。因此研究人员对对补骨脂含量测定供试品制备方法和色谱条件[3]进行了修订。实验结果表明，该方法杂质峰干扰小、重复性好、回收率高，并且结果稳定，为制定解郁合剂质量标准提供了依据。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪（LC-15C型）、分析天平（AUW-120D型），日本岛津科技有限公司。

甲醇（批号20190617），天津市科密欧化学试剂有限公司；补骨脂素（批号110739-201115，含量99.3%），中国食品药品检定研究院；异补骨脂素（批号110738-201614，含量99.9%），中国食品药品检定研究院；其余试剂均为分析纯，实验用水为纯化水；解郁合剂（批号19101201），滨州华海白癜风医院。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为WondaSil C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相为甲醇-水（42:58）；检测波长为246 nm；柱温为30℃；流速为1.0 mL·min-1；理论塔板数以补骨脂素峰计n＞3000。

2.2 样品处理方法

2.2.1 供试品溶液的制备

精密量取解郁合剂5 mL，置于25 mL量瓶中，加入10mL甲醇，经10 min超声处理（功率150W，频率100 kHz），自然冷却，加甲醇定容至刻度后摇匀，离心10 min（转速为3000r·min-1），过滤取滤液作为供试品溶液。

2.2.2对照品溶液的制备

精密称取补骨脂素对照品0.0044 g、异补骨脂素对照品0.0046g，置50 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，得补骨脂素浓度为0.0874 mg/mL、异补骨脂素浓度为0.0920 mg/mL的对照品溶液。

2.3 阴性对照溶液

根据解郁合剂质量标准中不同处方比例，制成补骨脂的阴性对照样品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定。结果解郁合剂中其他成分对补骨脂含量测定无干扰。

2.4 线性关系的考察

取浓度为0.0874 mg/mL补骨脂素、0.0920 mg/mL异补骨脂素的对照品溶液各1、2、3、5、10 mL于25 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，得到5个浓度梯度，依次进样20μL，按照“2.1”项下条件测定，按照峰面积对对照品溶液浓度开展回归计算，补骨脂素Y=1.02642×108X+60915.7,r=0.99992、异补骨脂素Y=1.22031×108X+70479.9，r=0.99993，结果表明补骨脂素在0.00874～0.0874 0mg/mL、异补骨脂素在0.00920～0.09200 mg/mL线性关系良好。

2.5 精密度实验

精密称取同一批次解郁合剂适量，按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液并测定含量，结果补骨脂素平均含量0.1285 mg/mL，RSD=0.4%＜2.0%、异补骨脂素平均含量0.1010 mg/mL，RSD=0.4%＜2.0%，表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验

取同批次解郁合剂，按“2.2.1”项下的方法制备供试品溶液6份，按照“2.1”项下条件测定，每次进样20 μL，记录色谱图，结果补骨脂素平均含量0.1275mg/mL，RSD=0.8%＜2.0%、异补骨脂素平均含量0.1010 mg/mL，RSD=0.6%＜2.0%，表明本方法重复性较好。

2.7 稳定性试验

取同批次解郁合剂，按“2.2.1”项下制备方法获取供试品溶液，按照0 h、1 h、2 h、4 h、8 h、12 h进样，每次进样20 μL，记录色谱图，结果补骨脂素平均含量0.1285 mg/mL，RSD=0.5%＜2.0%、异补骨脂素平均含量0.1020mg/mL，RSD=0.5%＜2.0%，表明补骨脂素与异补骨脂素在12 h内稳定性良好。

2.8 回收率试验

精密量取已知含量样品1 mL各6份，各自加入等量对照品，按“2.2.1”项下制备方法取得供试品溶液，按“2.1”项下条件分别展开测定，记录下色谱图，计算平均回收率补骨脂素100.15%，RSD=1.4%＜2.0%、异补骨脂素99.06%，RSD=0.8%＜2.0%。

2.9 流动相比例调整影响实验

取“2.2.1”项下的供试品溶液，按“2.1”项下条件测定，调整流动相比例（有机相±5%内），其他色谱条件不变，基线稳定后，分别精密吸取供试品溶液20μl进样测定，记录色谱图，计算补骨脂素平均含量0.1285 mg/mL，RSD=0.5%＜2.0%，异补骨脂素平均含量0.1015 mg/mL，RSD=0.5%＜2.0%，流动相的有机相比例在±5%内调整，RSD＜2.0%，对测得结果无明显影响，RSD＜2.0%。

2.10 柱温影响试验

取“2.2.1”项下的供试品溶液，按“2.1”项下条件测定，调整柱温（±5℃内），其它色谱条件不变，基线稳定后，分别精密吸取供试品溶液20μl进样测定，记录色谱图，计算补骨脂素平均含量0.1285mg/ml，RSD=0.4%＜2.0%、异补骨脂素平均含量0.1010 mg/mL，RSD=0.5%＜2.0%，柱温在±5℃内调整，对测得结果无明显影响，RSD＜2.0%。

2.1.1 流动相流速影响试验

取“2.2.1”项下的供试品溶液，按“2.1”项下条件测定。调整流动相流速（±0.1 ml/min），其它色谱条件不变，基线稳定后，分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液各20 μL进样测定，记录色谱图，计算补骨脂素平均含量0.1285 mg/mL，RSD=0.6%＜2.0%、异补骨脂素平均含量0.1010 mg/mL，RSD=0.8%＜2.0%，流动相流速在±0.1ml/min内调整，对测得结果无明显影响，RSD＜2.0%。

2.1.2 供试品测定

精密量取6批供试品，按“2.2.1”项下制备方法得到供试品溶液，按“2.1”项下条件开展含量测定，结果RSD为0.33%。

3 讨 论

3.1 考察结果

通过以上考察，结果表明采用该方法进行含量测定线性关系、精密度、稳定性、重现性较好，回收率高，方法灵敏；考察流动相比例、流速、柱温影响试验耐用性好，干扰少。

3.2 供试品溶液制备方法的优化

本实验考察了超声与加热回流的制备方法，发现超声与加热回流提取15 min效果相当，考虑到操作的便捷性，选用超声提取的方法，进而对超声提取时间（5、10、15 min）进行研究，发现超声提取10 min与15 min含量基本一致，故选择超声提取10 min。

4 结 论

本实验建立了HPLC法测定解郁合剂中补骨脂的含量，具有简单快速，准确可靠、重复性与稳定性好等优点，可客观反映制剂质量，对提高该制剂的质量标准具有重要的意义。