微小分子RNA 与急性淋巴细胞白血病关系的研究进展

王淑娴，郁多男

（扬州大学医学院，江苏 扬州）

0 引言

急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）是儿童最常见的肿瘤，占儿童白血病的80%[1]。尽管有效的化疗药物明显改善了ALL 患者的生存率，但容易复发是其最大的问题[2]。因此，我们迫切需要找到可以改善ALL 预后的方法。微小分子RNA（microRNA，miRNA）是一组长度为19-25 nt 的内源性单链非编码RNA，可在转录后水平抑制靶基因的表达。miRNA 在生物学各个方面都起着关键的调节作用，包括生理和病理过程，尤其是在癌症中[3]。近年来各种研究表明，miRNA 在ALL 发生、发展、治疗以及预后中起到重要作用。本文就miRNA 与ALL 的发病机制、治疗以及预后关系最新研究进展作一综述。

1 miRNA 与ALL 发病机制的关系

1.1 miR-652-3p

Jiang 等[4]使用基于实时荧光定量PCR 的TaqMan 低密度miRNA 阵列，从患有ALL 和健康对照的儿科患者的血浆样品中筛选miRNA 表达谱。与健康对照组相比，新诊断（new diagnosis，ND）患者的miR-652-3p（循环中的miRNA）被下调。在完全缓解（complete remission，CR）中恢复了miR652-3p 的水平，但在疾病复发（relapse，RE）中再次下调了miR652-3p 的水平。在其他儿科ALL 患者的骨髓（bone marrow，BM）样品中验证了miR-652-3p 的表达模式。与匹配的ND 样本相比，当患者获得CR 时，BM 中的miR-652-3p 显着上调（P＜0.001）。此外，RE 的两名患者的BM 中miR-652-3p 水平再次降低。此外，发现淋巴细胞性白血病Reh 和RS4：11 细胞系的miR-625-3p 水平低于正常B 细胞 系。使用agomir 过量表达miR-652-3p 会增加Reh 和RS4：11细胞对长春新碱和阿糖胞苷的敏感性（均P＜0.05）并促进细胞凋亡（均P＜0.05）。总之，结果提示低水平的miR-652-3p 可能与儿童ALL 的发病有关。miR-652-3p 的过度表达可能会抑制淋巴细胞白血病细胞，促进细胞凋亡并增加对化疗药物的敏感性。

1.2 miR-125b

Renou 等[5]检查了738 个miRNA 物种在41 个新诊断的儿科T-ALL 和人类胸腺来源的细胞中的表达，发现2 簇miRNA，miR-125b/99a 的表达在原始T 细胞中达到峰值，并在T-ALL 的T 白血病同源盒3（TLX3）阳性亚型中上调。使用功能丧失和功能获得方法，在TLX3 和miR-125b 之间建立了功能关系。 TLX3和miR-125b 均支持T-ALL 的体外细胞生长和体内侵袭性。此外，在人类造血祖细胞中异位表达TLX3 或miR-125b 可以提高T 细胞祖细胞的产量，并有助于它们在T 细胞发育的不成熟阶段积累，类似于在TLX3 T-ALL 中观察到的分化停滞。异位miR-125b 在异种移植模型中也显着加速了白血病，这表明miR125b 是TLX3 介导的转化程序的重要介体，该程序发生在未成熟的T 细胞祖细胞中。从机理上讲，TLX3 介导的miR-125b 激活可能部分地通过抑制T 谱系的2 个调节子和基因来影响T 细胞分化。最终，该研究确定TLX3 通过长非编码RNA 基因（miR-99a/Let-7c/miR-125b 的宿主）的结合和反式激活直接调节miR-125b 的产生。总而言之，该研究结果揭示了T-ALL 发育过程中TLX3 与致癌miR-125b 之间的原始功能联系。

2 miRNA 与ALL 治疗的关系

2.1 miR-141-3p

大量证据表明，miRNA 在调节许多类型癌症的进展中起着至关重要的作用，包括T-ALL[6]。

Zhou 等[7]发现与健康对照组相比，T-ALL 患者组织中miR-141-3p 的表达水平明显下调，而肿瘤坏死因子受体相关因子5（TNF receptor-associated factor 5，TRAF5）的表达水平却上调。进一步研究发现，miR-141-3p 的上调显著抑制了T-ALL 细胞的增殖并促进了细胞凋亡。另一方面，miR-141-3p 的下调显着抑制细胞凋亡并增强T-ALL 细胞增殖。该研究还验证了TRAF5 是T-ALL 细胞中miR-141-3p 的直接靶标。此外，TRAF5 的过表达显着抑制细胞凋亡并增加T-ALL 细胞增殖。总之，miR-141-3p通过直接靶向TRAF5 调节T-ALL 细胞的进程，并可能成为T-ALL的潜在治疗靶标。

2.2 miR-153-3p

Jiang 等[8]通 过 实 时 定 量PCR 测 量miR-153-3p 在ALL 细胞系中的表达，发现其明显低于人原代外周血单核细胞系。miR-153-3p 表达对ALL 细胞增殖，迁移和侵袭的影响分别通过Cell Counting Kit-8 分析，伤口愈合分析和Transwell 入侵分析进行了检查。然后，Jiang 等通过生物信息学分析、荧光素酶活性报告基因分析和Western blot 分析验证了生长蛋白2 抑制剂作为miR-153-3p 的直接靶标。在ALL 细胞系中，miR-153-3p 表达降低。miR-153-3p 过表达明显降低了ALL 的细胞增殖，迁移和侵袭。此外，生长蛋白2 抑制剂被证实是miR-153-3p 的直接靶标，生长蛋白2 抑制剂的过表达逆转了miR-153-3p 对急性淋巴细胞白血病细胞行为的抑制作用。基于以上结果，miR-153-3p 可能是治疗ALL 的靶标。

2.3 miR-200b

Ning 等[9]在研究中使用功能获得和丧失方法评估了miR-200b 对T-ALL 细胞增殖、存活和侵袭的影响。将人类Jurkat 细胞（一种广泛使用的T-ALL 细胞模型）转染了miR-200b 模拟物或miR-200b 抑制剂。与对照miRNA 处理的细胞相比，miR-200b 模拟物显著抑制Jurkat 细胞的增殖和侵袭，同时显著刺激细胞凋亡。相反，用抗miR200 处理的Jurkat 细胞表现出诱导细胞生长和侵袭，但抑制细胞凋亡。这种效应伴随着NOTCH1 表达的相应改变，表明NOTCH1 可能是Jurkat 细胞中miR-200b 功能的靶基因。总之，miR-200b 通过负调节NOTCH1 信号传导途径，可能成为T-ALL 的潜在治疗靶标。

3 miRNA 与ALL 预后的关系

3.1 miR-155a

El-Khazragy 等[2]发现，与正常控制组相比，45 名ALL 患者的BM 样本里miR-155a 表达水平显著上调（P＜0.01），并且高表达miR-155a 与差预后相关。该研究发现，miR-155a 的临界值在区分高危和低危ALL 患者以及ALL 患者与健康对照之间具有重要意义。并且，治疗后的miR-155a 的表达水平明显降低了10 倍。在最近的一项meta 分析中，Zhang 等[10]miR-155a 高表达和白血病患者的低生存率有关，并且得出miR-155a 可能作为白血病患者的预后标记物的结论。这与El-Khazragy 等的研究结果一致。以上研究提示，miR-155a 可能作为ALL 早期检测耐药和防止复发的生物标记物。

3.2 miR-335-3p

Pouyanrad 等[11]通过实时定量PCR 发现，和控制组相比，ALL患者BM 样本中miR-335-3p 低表达（P=0.018）。而在ALL 患者中，miR-335-3p 和ABCA3 mRNA 的表达水平负相关（r=0.5019，P=0.002）。另外，和药物敏感组相比，耐药组miR-335-3p 表达下调（P=0.0005）。ROC 曲线分析，AUC=0.801，表明miR-335-3p可能可作为区分ALL 药物敏感和耐药的分子标记物。另一方面，和药物敏感组对比，耐药组的miR-335-3p 和长链非编码RNA：NEAT1 和MALAT1 表达负相关。这种影响可能与ALL 耐药有关，因此miR-335-3p 可能为ALL 新疗法提供思路。

3.3 miR-141

高顺利等[12]将35 例B-ALL 儿童作为B-ALL 组，15 例非血液病患儿作为对照组，采集BM 标本，提取总RNA，通过实时定量荧光PCR 检测miR-141 表达，发现miR-141 在B-ALL 组中的表达低于对照组（P＜0.05）；miR-141 在治疗前的表达明显低于治疗第30 天及第12 周（P＜0.05），治疗第30 天的表达低于治疗第12周（P＜0.05）；≥10 岁组miR-141 的表达低于＜10 岁组（P＜0.05）；低危组治疗前miR-141 表达高于中、高危组（P＜0.05），而中危组高于高危组（P＜0.05）。因此，miR-141 在儿童B-ALL 中很可能存在抑癌作用，且可能作为预后预测的潜在靶点。

3.4 其它miRNA

据报道，miR-181a 和miR-181b 在ALL 患者中高表达，miR-181a 的敏感性和特异性分别为86.5%和93.3%[13]。另外，与健康人相比，cALL 患者中miR-92a、miR-100 和miR125a-5p 表达异常[14]。此外有研究报道，低miR-151-5p 水平与泼尼松反应不良和BFM 高风险分类之间存在显着相关性[15]。因此，可根据临床和实验模型经验，以及抑癌和致癌功能探索它们的诊断和预后价值。

4 结语

ALL 发病机制、耐药机制非常复杂，目前尚未得到有效阐明。根据最近相关研究表明， miRNA 是包括 ALL 在内的血液系统恶性肿瘤发生、发展以及产生耐药性的重要标志物之一[16]。希望将来miRNA 可以为改善ALL 预后以及难治性ALL 提供新思路。