犊牛隐孢子虫病的诊断与防治

隐孢子虫是主要寄生在哺乳动物胃肠道上皮细胞刷状缘的一种寄生原虫，被感染后能够引起人和动物发生腹泻。隐孢子虫在全世界范围内都有报道，各个年龄阶段都动物都可感染，严重的可以造成死亡。

目前已知的隐孢子虫达20多种，包括安氏隐孢子虫、牛隐孢子虫、贝氏隐孢子虫、微小隐孢子虫等。犊牛感染的隐孢子虫种主要有微小隐孢子虫、安氏隐孢子虫、牛隐孢子虫和瑞氏隐孢子虫。有研究表明，1907年Tyzzer在小鼠肠道中首次发现了隐孢子虫,1971年在美国首次报道了牛隐孢子虫病。1986年在我国兰州地区首次发现了犊牛隐孢子虫病，随后我国其他地区也报道了牛隐孢子虫感染。

犊牛感染隐孢子虫后主要表现为精神沉郁、厌食和腹泻，被感染犊牛的粪便呈灰白色或黄褐色，含有大量纤维素、血液和粘液，之后呈透明水样粪便，严重的可引发死亡。奶牛隐孢子虫病的流行给我国奶牛养殖业带来了巨大的经济损失,影响奶牛养殖业的健康发展，同时造成了畜产品质量的下降。

随着近年来我国牛进口数量急剧增加，牛隐孢子虫病已成为当前严重危害我国养殖业的传染病之一，应引起我们的高度重视。

1 犊牛隐孢子虫病的诊断

1.1 实验室诊断

1.1.1 粪便采样 对肉眼观察有腹泻、消瘦的犊牛进行新鲜粪便采样，每只犊牛采集约50g粪便分别装在干净的塑料袋内，登记奶牛场名称，记录好奶牛的年龄、品种，做好编号。

1.1.2 粪便处理及染色镜检 将采集的粪样置于烧杯中,加入适量水,搅拌均匀后用160目铜筛过滤。滤液置于锥形量杯中3000r/min离心,弃去上清液,留下管底粪渣。将处理过的粪渣加饱和蔗糖溶液搅拌均匀，置于离心机中以3000r/min离心5min，吸取表层液于烧杯中，加6～10倍蒸馏水搅匀，再次置于离心机中以3000r/min离心10min，吸弃上清液，沉淀物中加2.5%重铬酸钾溶液清洗，收集卵囊，用铁环沾取沉淀液于载玻片上，然后进行应用改良抗酸染色法染色，用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2～3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加3～5min,待标本冷却后用水冲洗。然后3%盐酸乙醇脱色30～60s，用水冲洗。最后用碱性亚甲蓝溶液复染1min,水洗，用吸水纸吸干后用显微镜观察。

1.1.3 虫种鉴定 根据卵囊特征，在显微镜下观察卵囊的大小、形态、形状指数、颜色、有无卵膜孔、极帽的大小、形状及有无，有无孢子囊以及孢子囊的形态、大小，有无斯氏体、有无极粒，有无内外残体等，进行卵囊种类的鉴定。

1.2 免疫学诊断 随着分子生物学技术研究进展的不断突破，在兽医临床中免疫学诊断越来越被得到广泛应用，免疫学诊断具有特异性强、敏感性高的特点。在对隐孢子虫进行诊断时除了常见的实验室诊断之外还有酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接免疫荧光法(IFA)、单克隆抗体(McAb)技术以及流式细胞技术(FC)等也被广泛使用。目前兽医临床中普遍采用EIISA法测定宿主血清中特异性抗体，这种方法敏感度高，很少出现假阳性，能提高确诊率。

PCR不仅可用于各种样品的检测，而且可用于区分隐孢子虫卵囊的类型、鉴别虫种、判断其来源，对于控制传染源和疾病的流行具有重要的实用价值。PCR诊断试剂盒的问世进一步简化了操作过程，降低了检测费用，被广泛使用于规模化养殖场对于隐孢子虫病的诊断与筛选。

2 犊牛隐孢子虫病的防治

犊牛隐孢子虫病在国内外广泛流行,但不同国家不同地区的犊牛隐孢子虫感染情况不尽相同,通常认为隐孢子虫对宿主的感染多发生在潮湿、温暖的季节，但是不同地区隐孢子虫病的高发期不尽相同，有研究表明隐孢子虫在四个季节间的感染率差异不显著。

众多研究表明，已使用过上百种药物对犊牛隐孢子虫病开展治疗，但任何一中药物对该病的治疗都没有明确的治疗效果，预防成为了防止犊牛隐孢子虫病发生的重要手段。有文献报道，使用高免牛初乳喂养犊牛，可使其体内产生不完全保护性免疫，可使血清中的特异性抗体明显升高，并能明显缩短腹泻的持续时间和卵囊排放时间。但需要注意的是，上述提到的高免牛初乳是需通过对孕牛进行人工免疫所获得的，而自然感染隐孢子虫母牛的牛乳对犊牛隐孢子虫病无明显的防治效果。还有文献报道，在小牛在出生后的第10～14d口服磺胺二甲嘧啶可有效防止犊牛隐孢子虫的发生和混合感染。

犊牛隐孢子虫病的传播途径广泛，带虫宿主、被卵囊污染的水源、饲料等都可成为该病的传染源，消化道是主要的传播途径。在做好犊牛自身预防的同时，还要加强对圈舍扥定期清扫和消毒，控制圈舍的环境卫生，科学选择消毒药物。