鸡新城疫的现场检疫和实验室检验

孙振明

（农安县农安镇畜牧兽医站，吉林 农安 130200）

鸡新城疫又称为“伪鸡瘟”“亚洲鸡瘟”，其病原体为副黏病毒，其主要临诊特征为神经紊乱、呼吸困难、腹泻、黏膜或浆膜出血。现场检疫包括流行病学调查、活体检疫、肉尸检疫。鸡新城疫检疫的常见检验方法有病毒分离鉴定、血凝抑制试验。前者用于新城疫的诊断；后者用于新城疫的免疫抗体测定和免疫监测。

1 现场检疫

（1）流行病学。鸡对本病易感性最高，各种品种、年龄的鸡均有易感性，幼雏和中雏的易感性比成年鸡更高。近年来国内已有鹌鹑、鸽及观赏鸟发病的报道。本病的主要传染源是病鸡以及流行间歇期的带毒鸟类，经呼吸道和消化道向外大量排出病毒而传播。本病一年四季均可发生，但以冬春两季较多。免疫鸡群也可能发生新城疫，出现非典型症状，但雏鸡和成年鸡的发病率和病死率不高。

（2）活体检疫。①最急性型：发病突然，无显著症状而快速死亡。②急性型和慢性型：病鸡表现为明显的咳嗽，流涕，呼吸困难，张口呼吸，并发出“咯咯”的叫声。口中有黏液，常见摇头和吞咽动作，企图将黏液甩出。嗉囊有液态黏稠物，倒提即从口内流出。粪便常呈黄绿或黄白色，偶见带血的粪便。病程稍长的病鸡出现脚、翅麻痹、歪头扭颈、站立不稳等神经症状。③非典型新城疫：主要发生于免疫鸡群，由于免疫水平偏低或免疫力不整齐，幼鸡和育成鸡出现轻微的呼吸道症状。成年鸡产蛋量下降，持续性的零星死亡。

（3）肉尸检疫。主要病变是淋巴系统肿胀、出血或坏死，全身黏膜和/或浆膜有出血点、出血斑。典型病变：①腺胃黏膜乳头及其周围出血、溃疡或坏死，肌胃角质层下也常见有出血点或出血带；②盲肠、扁桃体肿大、出血或坏死。肠黏膜有大小不等的出血点以及纤维素性渗出物。病程较长者有的形成假膜，假膜脱落后即成“枣核状”溃疡。气管黏膜增生，并有渗出物。若鸡群已进行了免疫处理，则发生新城疫时仅见黏膜呈卡他性炎症，直肠黏膜和盲肠扁桃体出血，病变相对较轻，其他病变不典型。

2 实验室检验

（1）病毒分离鉴定。①样品采集及处理：取病死禽的脑或心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、气囊等组织，用生理盐水研成1∶5乳液，加入青霉素（至终浓度为100 IU·mL-1）、链霉素（使终浓度为1 000 μg·mL-1）。采取的气管拭子和泄殖腔拭子（或粪拭子），置于2～3 mL含有青、链霉素的生理盐水中（青、链霉素的用量提高5倍），反复挤压至无水滴渗出弃之。调节pH至7.0～7.4，37 ℃作用1 h，以1 000 r·min-1离心10 min，取上清液4 ℃保存备用。②病毒分离鉴定：取处理后的样品上清液0.1 mL经尿囊腔接种9～10日龄SPF鸡胚，培养4～7 d，无菌收集尿囊液；与标准阳性血清作血凝抑制试验，判定是否感染新城疫病毒。③病毒致病力测定：用生理盐水连续10倍稀释尿囊液至1×10-9，从1×10-6～1×10-9，每个稀释度接种9～10日龄的SPF鸡胚5个，0.1 mL·胚-1，于37 ℃温度条件下孵化。8 h后以同样方法接种第2批鸡胚。连续7 d观察鸡胚死亡时间，并记录。判定依据：引起接种鸡胚死亡的最大稀释倍数为该病毒的最小致死量。④结果判定：以40～70 h死亡为强毒，140 h以上死亡为弱毒。

（2）进行血凝抑制试验。①需准备的器材：96 孔U 型微量板、微量移液器、微型振荡器。pH 7.0～7.2的磷酸盐缓冲液；浓缩抗原或被检培养物尿囊液（病毒鉴定）；阳性和阴性标准血清由指定单位提供。制作0.5%鸡红细胞悬液：于成年鸡的翅根处采血，用20倍体积的磷酸盐缓冲液洗涤3～4次，以2 000 r·min-1离心3～4 min，吸弃上层血浆、白细胞 等， 最 后 一 次 离 心5 min， 制 成0.5% 悬 液。②抗原血凝效价测定（血凝试验）：用微量移液器在微量板上每孔加入磷酸盐缓冲液50 μL，共4排。取1∶5倍稀释抗原或被检物液（病毒鉴定）加入每排第1孔，50 μL·孔-1；后由左至右稀释至第11孔，再从第11孔中吸取50 μL弃之不用。最后1 孔不加抗原，目的是作为血细胞对照。加入0.5%红细胞悬液50 μL·孔-1。将试液置于微量振荡器中，混合1 min 后，于18～20 ℃的室温环境下静置30 min，仔细观察血凝图像。以出现完全凝集的抗原最大稀释度为该抗原的血凝效价。每次4 排重复，经几何均值确定抗原的血凝效价。③试验操作：抗原稀释倍数=血凝效价/4。在微量板每排第1孔分别加入磷酸盐缓冲液50 μL，每排第2孔加入浓度为8个单位的抗原50 μL，第3至12孔依次加入浓度为4个血凝单位的抗原50 μL。每排第1孔分别加被检血清50 μL，混匀后吸取50 μL 加入第2 孔；依次倍比稀释至第12孔，混匀后弃去50 μL。置于18～20 ℃的室温环境下持续20 min。滴加0.5%红细胞悬液50 μL·孔-1，充分混匀后于室温下静置30 min 并观察结果。④判定结果：红细胞对照、阳性血清对照结果应为不凝集红细胞；阴性血清对照、抗原对照应出现凝集现象。

3 病死鸡的处理

若经尸检发现病死鸡的内脏有病变而肉尸无病变者，其内脏作工业用或销毁，肉尸高温处理后可用；出现全身病变者，肉尸与内脏全部作工业用或销毁，血液及羽毛消毒后出场。