新型冠状病毒特异性抗体检测对COVID-19的诊断效果

徐亮

（绍兴文理学院附属医院/绍兴市立医院，浙江 绍兴 312000）

0 引言

COVID-19患者在早期感染过程进行单一病毒核酸检测的阳性率不高，在一定程度上受到了标本采集手法、体内病毒载量小或者病毒核酸检测过程中操作失误等原因的负面影响。通常情况下，单一病毒核酸检测阴性但是其CT结果和临床症状均满足《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案（试行第五版）》的患者同样也划分为临床诊断分类中[1]。人体内抗体往往是受到外界病毒感染之后，浆细胞对其作出对应反应，同时产生相对抗原结合后生成的免疫球蛋白。分析COVID-19的感染情况，可以得到其在感染前期体内的血清IgM抗体水平较高，在感染后期体内的血清IgG抗体水平较高，由于其在体内往往会存留很长一段时间，所以可以通过检测血清IgG、IgM抗体进一步辅助分析患者是否感染过COVID-19。本次对114余例检测血清抗体呈阳性研究对象进行深入分析，进一步分析得到影响其结果为阳性的因素，具体报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料。选取绍兴文理学院附属医院2020年5月1日至2020年5月31日进行病情检测的8800例，在其同意参与研究的前提下设为研究对象。分别对其进行COVID-19核酸和血清IgG、IgM抗体的检测。8800例中所有核酸检测均为阴性，其中114余例检测血清抗体呈阳性。114例研究对象中，男69例，女45例，研究对象的年龄范围为26～89岁，平均（65.55±1.25）岁。

1.2 试剂与仪器。按照《医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册（试行第二版）（联防联控机制医疗发[2020]）313号开展实验室检测工作。核对研究对象的个人信息，收集其咽拭子和血液样本，进行双试剂盒平行试验联合血清抗体检测。试剂盒开封后立即取出阳性对照和阴性对隔放置核酸提取间。使用湖南圣湘生物科技股份有限公司生产的实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）荧光探针、引物以及试剂；辉瑞制药生产的病毒RNA提取试剂盒；美国赛默飞世尔公司提供的BI7500型qPCR仪。血清IgM、IgG 检测试剂盒由珠海丽珠试剂股份有限公司提供，严格根据其使用说明书以及相关规范约束具体行为。

1.3 方法。研究对象先使用生理盐水清洁口腔，采集口咽拭子工作人员使用无菌生理盐水浸湿拭子，引导研究对象张开口，且保证微仰头部的姿势，暴露两侧咽扁桃体。采集口咽拭子工作人员将拭子较为用力的擦拭两侧咽扁桃体表面，然后将拭子头放在等渗盐溶液中保存。弃去尾部，旋紧管盖，避免其被污染。严格根据核酸提取试剂盒的说明书操作，将其收集的口咽拭子标本进行总RNA溶液的增殖，保证其至少有50 μL的剂量，然后放置在零下20℃准备后续的检测使用。同时在检测过程中收集研究对象的外周空腹静脉血5 mL，核对研究对象的个人信息，确保信息准确。将血液放置在无抗凝剂分离胶管一段时间后，使用离心机控制其5 min的3500 r/min离心，将分离后的血清标本提取到血清IgG、IgM检测卡的加样孔中，分析观察其15 min之后的结果。工作人员将其根据设置反应要求调整条件以及反应体系溶液，使用荧光定量PCR仪对其进行深入检测分析。

1.4 指标判定。COVID-19的诊断根据《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案（试行第五版）》中具体要求判定。

1.5 统计学分析。t检验用（±s）代表的计量资料，χ2检验用n（%）代表的计数资料，统计学软件为SPSS 18.0。分析两组数据之间的组间差异，如果P＜0.05，则证明当前研究讨论的组间差异具有有统计学意义。

2 结果

8800 例中所有核酸检测均为阴性，其中114余例检测血清抗体呈阳性。

3 讨论

结合此次试验结果，进一步分析当前新冠病毒的核酸检测与血清病毒抗体检测的诊断鉴别关系，具体情况如下：①核酸拭子诊断为阴性，血清IgM诊断和血清IgG诊断结果均为阳性，被诊断评价为疑似感染者；②核酸拭子诊断为阴性，血清IgM诊断为阳性，血清IgG 诊断结果为阴性，被诊断评价为疑似感染者；③核酸拭子诊断为阴性，血清IgM诊断为阴性，血清IgG诊断结果为阳性，被诊断评价为治愈感染者或者感染抗体获得者[2]。

随着当前疫情发展，患者的诊断难度也在不断上升，部分COVID-19感染患者在发病时期被诊断为阴性，有可能是由于自身病情发展病毒从鼻咽部上处转移到下呼吸道，所以降低了拭子诊断精准度。分析其COVID-19感染患者的病程变化情况，到现在也没有明确拭子采集的科学时间[3]。

COVID-19病毒感染的特异性血清IgG抗体的产生时间主要为人群感染之后，通产情况下被检测对象如果第一次检测的抗体为阳性而核酸阴性，则需要进行第二次核酸检测，确保诊断鉴别的精准性，但是其第二次诊断结果依旧为核酸阴性，则证明被检测对象可能是曾经感染COVID-19病毒。这类对象可能会由于免疫保护的获得而存在抗体阳性核酸阴性结果，但是其并没有传染性[4]。当前新冠肺炎确诊病例的鉴别金标准为核酸检测，血清IgM诊断和血清IgG 诊断并不能作为无症状感染者或者病例的诊断标准，血清抗体检测作为辅助筛查技术为疾病诊断鉴别提供价值，同时还需要联合CT、血常规等检查结果持续观察。

有研究表明IgM/IgG化学发光免疫分析法在COVID-19疑似病例中显示出高灵敏度和特异性，但是在实际针对核酸检测阴性而血清抗体阳性人群的后续处理没有明确的管理制度以及工作思路，在各地面对这类人群需要引起足够重视[5]。不能单独依照某一种检验鉴别结果进行标准解读，否则出现误诊结果会给个体人群带来严重负面影响[6]。针对这一情况，需要各医院专家组成员搜集分析人群病情实际情况，结合影像学、血常规、临床表现以及不同检测结果进行综合分析，不能放过一个疑似患者的同时，降低感染误诊率。

综上所述，COVID-19病毒感染的鉴别诊断需要从多种角度进行深入分析，结合不同检测试剂以及检测方法的对比，筛选出更合理的试剂和方法，为疫情的常态防控更加合理化提供参考。