晕痛平合剂镇痛作用及提取工艺的研究

凌利英 殷小云 张艳艳 蒙海燕 蒋宝华

摘要：目的  探讨晕痛平合剂中所含的挥发油镇痛作用，并根据实验结果对提取工艺进行优化。方法  晕痛平合剂采用扭体实验给小鼠分别腹腔注射0.6%醋酸0.2ml/20g体重，观察小鼠注射醋酸20分钟内出现扭体反应次数;利用正交实验L9（34）优化挥发油的提取工艺，确定最佳提取方法。结果  结果表明含挥发油组的晕痛平合剂镇痛效果显著;正交实验挥发有最佳提取工艺是A3B2C3，即加10倍量水，浸泡1小时，蒸馏提取6小时。

关键词：晕痛平合剂;挥发油;镇痛;工艺优化;正交实验

【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1673-9026（2021）15--01

晕痛平合剂是我院院内制剂，在临床已经应用多年，药品的主要成份为桃仁、红花、枳壳、延胡索、香附、赤芍、天麻、川芎、砂仁、柴胡、半夏、芥子、石菖蒲、桔梗、甘草。桃仁、红花具有活血祛瘀、通经脉作用，与赤芍、川芎配伍，可用于瘀血阻滞、瘀阻为器或血行不畅之证。患者因外伤致痛，瘀血阻络多见。延胡索活血止痛;香附疏肝理气、调经止痛。上药配伍，共同发挥活血祛瘀，理气通络止痛之功能。枳壳破气消痞，芥子利气散结、通络止痛。石菖蒲开窍醒神。桔梗祛痰排脓。生甘草缓急止痛。共同发挥化瘀、通络止痛、祛痰功能。本方所用之外伤头痛、头晕、头胀等症，乃由于外伤所致，气滞血瘀、瘀则不通、不通则痛。血瘀则清窍失常，则头痛、头晕、头胀。肾失和降则息呕吐。诸药相和，诸症好转。

晕痛平合剂现规格为250ml/瓶，每次服用量为50ml，服用剂量较大，因此准备在合剂的基础上开发口服液剂型，对口服液配制工艺及质量标准做进一步研究，在此研究基础上拟对挥发油的成分予以保留，但挥发油的保留是否能够提高晕痛平合剂的临床疗效，需要进一步研究。本次实验目的是探讨工艺中提取挥发油的必要性，对挥发油、含挥发油的药品及不含挥发油的药品的镇痛作用进行比较，并对挥发油的提取工艺进行优化。

1.镇痛实验研究

1.1受试药物

实验一组：晕痛平合剂（不含挥发油） 规格0.825g/ml（825g生药，制成1000ml液体）批号：160601，药物组成：桃仁、红花、枳壳、延胡索、香附、赤芍、天麻、川芎、砂仁、柴胡、半夏、芥子、石菖蒲、桔梗、甘草，桃仁、红花，来源：河北省迁安市中医医院制剂室;实验二组：挥发油组（批号：160602）：按照称取520g的饮片，破碎成粗粉，置密闭回流装置中提取挥发油，收集挥发油，备用;实验三组：晕痛平合剂含挥发油组（批号：160603）：参照二组的方法提取挥发油，并将药物残渣加水按照晕痛平合劑的提取工艺继续提取两次，配制成1000ml的液体制剂，并加入挥发油，作为含挥发油组备用。

1.2实验动物：昆明种小白鼠，数量40只，体重18-22g，均为雄性，购自：中国人民解放军军事医学科学院卫生环境医学研究所动物实验中心，合格证号：SCXK-（军）2009-003。

1.3实验仪器  电子天平、500ml烧杯、棉签、1ml注射器。

1.4试剂 冰醋酸，天津市申泰化学试剂有限公司，分析纯，批号：140420。

1.5剂量设计  晕痛平合剂，规格：0.825g/ml（825g生药，制成1000ml液体），将挥发油、含挥发油的晕痛平合剂及不含挥发油的晕痛平合剂均配成0.825g/ml生药的样品溶液，依次分为1、2、3组，试验时用蒸馏水配成0.8g生药/ml的供试液。

2.试验方法

2.1各个试验均将动物随机分成四组，分别为样品1、2、3组及对照组。每组10支小鼠，样品1、2、3组按照22g/kg灌胃不同药液，对照组灌服等容积的蒸馏水，每日一次，连续给药7天。

2.2镇痛试验：末次给药后30分钟，各组小鼠分别腹腔注射0.6%醋酸0.2ml/20g体重，观察小鼠注射醋酸15分钟内出现扭体反应次数。用下列公式计算扭体抑制率[1]。

2.3试验结果

结果显示：三组样品均能不同程度的减少15分钟内腹腔注射0.6%醋酸引起的扭体次数，试验表明样品均有一定的镇痛作用，但含挥发油的晕痛平合剂镇痛作用更加显著（P<0.01）

以上试验表明，挥发油有不同程度的镇痛作用，含挥发油的晕痛平合剂较不含挥发油的晕痛平合剂的效果明显提升，此试验提示了提取挥发油的必要性。

2.挥发油提取工艺的优化

2.1.挥发油提取工艺的研究  以挥发油的收取量为参考指标，采用正交试验对提取的加水量、浸泡时间及蒸馏时间进行试验考察。

2.2材料与仪器：

材料：桃仁、红花、枳壳、延胡索、香附、赤芍、天麻、川芎、砂仁、柴胡、半夏、芥子、石菖蒲、桔梗、甘草，来源：安徽沪春堂中药饮片有限公司，经检测均为合格产品。挥发油测定器（唐山器玻化有限公司）实验用水为蒸馏水，无水硫代硫酸钠，石油醚。

2.3方法与结果

2.3.1  通过预实验发现加水量、浸泡时间、蒸馏时间是影响挥发油提取的主要因素。因此，为了探讨挥发油的提取工艺，以挥发油量为参考指标，采用正交实验对提取的加水量、浸泡时间、蒸馏时间进行考察，选择最佳的挥发油提取工艺参数，为大生产提供理论依据。

2.3.2  因素水平表  以加水量（倍）A，浸泡时间（h）B，蒸馏时间（h）C为工艺考察因素，采用L9（34）进行正交试验，因素水平表如表2。

2.3.3   提取工艺筛选 按正交实验设计进行实验，按处方的1/10比例分别称取已粉碎好的药材，放入挥发油蒸馏器中，提取收集挥发油，参照挥发油测定法乙法《中国药典2015年版一部附录2204》测定法实验，得挥发油含量（%）。正交实验表及挥发油考察结果见表3。

从表4的方差分析表可以看出，极差最大的是C（蒸馏时间），其次是浸泡时间及提取的次数，但A、B的结果均不具有显著性;从表3的最佳数据直观分析可知，A3B1C3的结果较为理想。结合表3及表4数据，同时考虑生产的成本，根据正交实验结果，确定提取挥发油的最佳工藝组合是A3B2C3，即加10倍量水，浸泡1小时，蒸馏提6小时。

2.3.4最佳工艺验证

为了验证上述结论的准确性，按照最佳工艺条件A3B2C3，称取处方量的10分之一，按照最佳工艺条件A3B2C3进行了3次试验，结果见表5。

从表中5次实验结果可以看出，挥发油的收率均处于最高，说明工艺可行，可以在大生产中应用。

3 讨论

由于腹膜有广泛的感觉神经分布，某些化学物质（如冰醋酸等）注入小鼠腹腔内可刺激脏层和壁层腹膜，引起深部、大面积且持久的疼痛，致使小鼠产生扭体反应，表现为腹部两侧内凹、躯体扭曲、后肢伸展和臀部高起等行为反应，统称为扭体反应。该反应在注射15min内出现频率最高，故注射后15min内发生的扭体次数作为疼痛的定量指标。如醋酸引起的疼痛刺激通过感觉神经纤维传送到脊髓，然后到达大脑皮质产生疼痛感觉。中央和外周镇痛剂舒缓疼痛通过感觉中枢的一体化和抑制或减少疼痛感觉的进入，因此中枢的止痛很容易通过动物实验证实效果。

晕痛平合剂处方中的川芎含有藁本内酯，藁本内酯有很强的解痉、平喘、镇静作用，能改善微循环，松弛平滑肌[2];香附中含有的挥发油主要是a-香附酮及a-香附烯，其中a-香附酮被认定为较强的前列腺素生物合成抑制剂，被认为是镇痛作用的有效成分之一[3];砂仁挥发油的主要成分为乙酸龙脑酯，具有保胎、杀虫、抗炎、抗肿瘤、止痛、止泻、改善记忆力等作用[4];石菖蒲中含有挥发油，主要为β-细辛醚，α-细辛醚，两者均有镇静作用和抗惊厥作用[5];枳壳中挥发油的主要成分是柠檬烯与芳樟醇，柠檬烯有镇咳、祛痰、抗菌作用，芳樟醇有防腐、抗病毒、镇静作用[6];柴胡挥发油中含有较多的亚油酸，有一定的抗惊厥作用[5];以上饮片的挥发油的保留可提高晕痛平合剂的临床镇痛的治疗作用，而且动物实验也验证了提取挥发油对镇痛作用显著。

因此对晕痛平合剂原有工艺进行改进，提取川芎、香附、砂仁、石菖蒲、枳壳、柴胡六味饮片的挥发油，残渣与其他剩余的几味饮片合并水提，可有效的提升晕痛平合剂的临床治疗效果。

参考文献：

[1]王海波，王章元.中药蒲黄提取液的镇痛作用研究[J].医药导报，2006，25（4）：278-279.

[2]汪称远，杜俊蓉，等.藁本内酯的研究进展[J].中国药学杂志，2006，6（41）：889-891.

[3]田友清，丁平，等.香附挥发油的研究进展及其前景开发[J].中国药业，2010，19（3）：1-2.

[4]李晓花，金玲钰，岳建军，等.砂仁活性成分乙酸龙脑酯药理活性研究进展[J].华西药学杂志，2001，16（5）：356-358.

[5]高学敏.中药学.北京：中国中医药出版社，2002.

[6]施学骄，张杰红，等.枳实、枳壳挥发油成分比较研究[J].中药与临床，2012，3（2）：21-24.