脂联素基因多态性与浙江汉族人群原发性高血压的相关性

范宏彦 郑文文 翟昌林

高血压是血管性疾病的主要危险因素，也是全球健康负担的主要来源[1]。虽然原发性高血压（essential hypertension，EH）的病因学尚未完全阐明，但基因与环境因素的相互作用在EH 的病理生理过程中发挥了重要作用[2]。脂联素是一种脂肪细胞因子，既往研究发现在心血管疾病、EH、肥胖和2 型糖尿病等疾病中均有血浆脂联素水平的降低[3-5]，提示脂联素可能在高血压的发病机制中起着重要作用。国内外关于脂联素基因单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms，SNP）与EH 关联研究的结果并不一致。本研究旨在探讨浙江地区汉族人群脂联素基因rs1501299 和rs2241766 位点多态性与EH之间的相关性，为EH 机制的研究提供一定依据。

1 对象和方法

1.1 对象 选择2018 年1 月至2019 年6 月嘉兴市第一医院收治的EH 患者236 例为观察组，其中男118 例，女118 例，均为汉族；另择同期在本院进行健康体检的265 例为对照组，其中男134 例，女131 例。本研究根据《中国高血压防治指南（2018 年修订版）》标准，高血压定义为收缩压≥140 mmHg和（或）舒张压≥90 mmHg[6]。排除标准：继发性高血压、糖尿病、癌症、冠心病、脑梗死等严重心脑血管疾病及其他引起高血压的疾病。本研究经过医院医学伦理委员会批准（批准文号：LS2018-071）及所有受试者的知情同意。

1.2 方法

1.2.1 实验室指标检测 收集患者性别、年龄，身高、体重，并计算体重指数（body mass index，BMI）。抽取空腹外周静脉血5 mL，测定甘油三酯（triglyceride，TG）、总胆固醇（total cholesterol，TC）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）及低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）。

1.2.2 基因组DNA 提取及分型 采用DNeasy 血液/组织基因组DNA 提取试剂盒（德国Qiagen 公司）提取外周血全基因组DNA。采用竞争性等位基因 特 异 性PCR （kompetitive allele specific PCR，KASP）检测所有受试者的脂联素基因rs1501299 和rs2241766 位点的基因型，引物序列见表1（引物由北京一道生物科技有限公司提供）。具体步骤：首先检测所有DNA 样本，将质检合格的DNA 进行稀释，最终浓度为5 ng/μL。取2 μLDNA 样本，在55 ℃45 min 烘干，再配置混合物（mix），3 μL 体系[包括2X KASP master mix（北京梓熙生物科技有限公司）及引物mix]，然后在ABI 7900 仪器上进行预读，再在ABI 9700 PCR 仪上进行PCR 反应，94 ℃5 min，94℃20 s，61 ℃1 min，共10 个循环；94 ℃20 s，55 ℃1 min，共26 个循环；最后72 ℃1 min。完成后，在ABI 7900 仪器上读出，通过SDS2.4 进行基因分型和判读。

1.3 统计学处理 采用SPSS 20.0 统计软件，符合正态分布的计量资料以表示，不符合正态分布的计量资料以M（P25，P75）表示，组间比较采用独立样本t 检验；计数资料以百分率表示，组间比较采用χ2检验。基因型分布采用Hardy-Weinberg 平衡检验，采用χ2检验分析两组等位基因频率和基因型频率，并计算OR 值和95%CI；采用非条件logistic 回归分析EH 的危险因素。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较 见表2。

由表2 可见，观察组年龄、BMI、TC 水平均高于对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.01），其余指标差异均无统计学意义（均P ＞0.05）。

2.2 脂联素基因各位点Hardy-Weinberg 平衡检验本研究选取了脂联素基因2 个SNP 位点（rs1501299、rs2241766），均符合Hardy-Weinberg 平衡（均P ＞0.05），表明样本具有群体代表性。

2.3 脂联素基因各位点基因型和等位基因频率分布 见表3、4。

由表3、4 可见，脂联素基因rs1501299 基因型频率在观察组和对照组间分布差异有统计学意义（P ＜0.05）；在显性模型中，观察组rs1501299 CC+CA 基因型频率高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.4 脂联素基因rs1501299 基因型各临床指标比较见表5。

由表5 可见，在显性模型下，按总研究人群以及不同性别分类，男性BMI 在脂联素基因rs1501299的不同基因型中差异有统计学意义，CC+CA 基因型BMI 高于AA 基因型（P＜0.01）。

2.5 EH 危险因素的logistic 回归分析 见表6。

由表6 可见，以是否发生EH 作为因变量，选择年龄、TC、BMI、rs1501299 基因型作为自变量，logistic回归分析显示，年龄、TC、BMI≥25 kg/m2、rs1501299 CC 及CA 基因型是EH 的危险因素（均P＜0.05）。

表2 两组一般资料比较

表3 脂联素基因各位点基因型和等位基因频率分布

表4 脂联素基因各位点两种遗传模型基因频率分布

表5 脂联素基因rs1501299 基因型各临床指标比较

3 讨论

EH 是心脑血管疾病的主要危险因素之一，影响着全球近27%的人口，预计到2025 年，患病人数将增加约60%，总数达到15.6 亿[7]。在中国，患有EH的成年人占总人口的27.9%[8]。目前认为脂肪细胞通过分泌大量生物活性因子参与体内多种生物功能调节[9]。脂联素是一种脂肪细胞分泌激素，是目前唯一发现的对人体有保护作用的脂肪细胞因子[10]。有体外研究表明脂联素可以刺激一氧化氮的产生并且改善内皮功能，同时还具有调节机体新陈代谢和免疫反应的作用[11-14]。循环中相对较高的脂联素浓度（5～30 μg/mL）与血压值以及未来发生高血压的风险呈反比[15-17]。值得注意的是，人类脂联素的浓度主要受遗传因素影响，估计遗传力为40%～70%[18]。脂联素基因由ADIPOQ 编码，位于染色体3q27 区域，包含3 个外显子，跨度约17 kb，该基因编码的蛋白含有244 个氨基酸，包含4 个结构域：N 端信号序列、胶原型结构域、可变区域、C 端球状结构域[19]。目前，大量研究均有发现脂联素基因存在EH、2 型糖尿病、代谢综合征的易感位点。

表6 EH 危险因素的logistic 回归分析

大多数已发表的研究探讨了脂联素基因rs2241766、rs1501299 多态性与发生EH 风险的关系[20-25]，但结果是不一致的。Mousavinasab 等[22]关于芬兰人群的研究发现脂联素基因rs2241766 和rs1501299 的多态性与EH 风险明显相关。Ronconi等[23]研究也显示rs2241766 及rs1501299 与意大利人群EH 相关。但Yan 等[24]在中国人群中的研究发现，rs2241766 和rs1501299 与EH 无明显相关性。康庄等[25]关于大理白族人群的研究则发现rs2241766与EH 发生有关，而rs1501299 与EH 无关。本研究发现中国浙江汉族人群脂联素基因rs1501299 多态性与EH 的发病风险明显相关，而rs2241766 与EH无关，且经过调整了混杂因素的logistic 回归分析进一步证明rs1501299 CC、CA 基因型是浙江地区EH的危险因素。本研究结果与既往研究存在差异，考虑原因有以下几点：（1）因不同地区、不同种族的遗传背景、生活环境及生活习惯有很大差距，将导致结果的差异性；（2）本研究将性别、年龄、BMI 等影响EH 的危险因素均纳入了回归分析，而其他一些研究则忽略了混杂因素的影响，因而可能导致结果的差异性；（3）本研究样本含量较小，且只选择了浙江单地区的研究人群，缺乏更大样本量的抽样调查，从而可能导致结果的差异性。

众所周知，超重和肥胖是EH 的一个独立危险因素。研究发现BMI 与血压水平呈正比，BMI 每增加3 kg/m2，4 年内EH 的发生风险，女性增加57%，男性增加50%[6]。而脂联素基因作为脂肪细胞因子，参与调节机体胰岛素、血糖、脂质代谢，具有胰岛素增敏、抗炎以及抗动脉粥样硬化的功能，在肥胖、2 型糖尿病、EH 等代谢性疾病中发挥重要作用[26]。本研究结果提示TC、BMI≥25 kg/m2是EH 的危险因素，这与既往研究相符。本研究还发现在男性研究人群中携带脂联素基因rs1501299 CC+CA 基因型者具有更高的BMI 水平，这表明脂联素基因变异可能与肥胖密切相关，而肥胖作为EH 的重要危险因素，进一步表明脂联素基因可能通过脂质代谢等途径参与EH 的发生、发展。

综上所述，本研究初步探讨了脂联素基因与EH 之间的相关性，发现脂联素基因rs1501299 与浙江汉族人群EH 的风险相关。但本研究样本量小、为横断面研究，且缺乏血清脂联素等更具相关性的生化指标，因此尚需更多关于脂联素基因与EH 发生发展的机制研究。