4- 氨基安替比林光度法测定挥发酚的精密度偏性试验分析

热汗古丽·依米提

（哈密水文勘测局，新疆 哈密 839000）

1 引言

长时期饮用被酚类污染的水，可引起贫血、出疹、头昏、瘙痒以及各种神经系统的症状。当酚类在水中的含量等于（0.1 mg/L～0.2 mg/L）浓度时，生长在此的鱼类肉质就会有异味，当浓度高于5 mg/L 时就会导致鱼类中毒死亡。当农田灌溉用水中酚类的浓度比较高时，农作物就会减产或者枯死。当水中含有微量酚类时，通常会在加氯消毒过程中产生氯酚臭［1-3]。本文通过精密度偏性分析实验，保证实验室测定挥分酚数据的准确性和精密度。

2 实验部分

2.1 实验室基本设施情况

为保证检测工作正常进行，使实验室环境对检测结果影响始终处于最小程度，确保检测结果的有效性和准确性。选择在试验中心进行实验。实验室建筑总面积560 m2，分三层，一、二层为实验室占总面积的60%，一楼有气相色谱、原子荧光、原子吸收等设备实验室，三间实验室配备有专用的排气设施。二楼为毒物分析室、微生物实验室（无菌室）、天平室、仪器室，常规分析室和毒物分析室分开。一般实验室内温度在15℃～35℃，相对湿度在40%以下，精密仪器室安装有空调，控制室内温湿度。压力容器单独存放，有效安全隔离。药品库房内所存固、液体试剂根据其不同性质分区存放，库房内设有防火、防盗、防爆等设施。每间实验室具有足够照明，通风性好，有良好的安全设施，具备消防安全设施。实验室内清洁、整齐、明亮、安静。三层为办公室和会议室。

2.2 测定方法

实验采用4- 氨基安替比林分光光度法测定（GB 7493-87），用蒸馏法将化合物中的酚类蒸馏出，使固定剂和干扰物质分离。蒸馏出的馏出液体积必须等于试样体积，当蒸馏出的酚类化合物在pH10.0±0.2 介质中，并且有铁氰化钾情况下，同4- 氨基安替比林发生化学反应生成橙红色的安替比林染料，再用氯仿萃取后，在460 nm 波长下测定其吸光度值。

2.3 实验仪器

仪器设备选用723C 可见分光光度计，20 m 比色皿4 个，250 mL 分液漏斗24 个，2 mL 单标线移液管3 个，10 mL 单标线移液管1 个。

2.4 实验试剂

氯化铵，氢氧化，4- 氨基安替比，铁氰化钾，氯仿（分析纯），实验用水为新制备的蒸馏水或去离子水。

3 实验内容

3.1 溶液、试剂的配制

（1）氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠10 g溶于水，稀释至100 mL。

（2）4- 氨基安替比林溶液配制：称取2g 4- 氨基安替比林溶于适当水中，溶解后慢慢转移到100 mL 容量瓶中，然后用无酚水稀释至标线。

（3）缓冲溶液的配制：称取20 g 氯化铵溶于100 mL 氨水中。

（4）铁氰化钾溶液配制：称取8 g 的铁氰化钾溶于少量水中，溶解后慢慢转移入100 mL容量瓶中，用无酚水稀释至标线。

3.2 测定样品的配制

（1）酚贮备液的配制（500 mg/L）

实验室购买的挥发酚标液，浓度为500 mg/L。

（2）酚中间液的配制（10.00 mg/L）

准确吸取10.00 ml 酚贮备液（500 mg/L），用水稀释至500 mL 容量瓶中。

（3）酚标准使用液的配制（1 mg/L）（1.00 mg/L）

准确吸取10.00 ml 酚中间液（10.00 mg/L），用水稀释至100 mL 容量瓶中。

（4）0.9C 测试液的配制（C 为标准曲线的上限0.2 mg/L）

准确吸取1.8 mL 酚中间液（10.00 mg/L），用水稀释至100 mL 容量瓶中。

（5）0.1C 测试液的配制（0.02 mg/L）

准确吸取20 mL 酚中间标准使用液（10.00 mg/L），用水稀释至1000 mL 容量瓶中。

（6）天然水样

天然水样一般情况下不含有酚，作为本次实验的测试样品就不适合了，所以向天然水样中加入一定的酚使用液作为本次实验的测试样品。

（7）天然水样+标样

在天然水样品中加入一定量的酚标准使用液，使浓度为天然水样品浓度的0.5～2 倍。

4 分析测试过程

4.1 标准曲线的绘制

（1）7 个分液漏斗中，分别加入100 mL水，依次加入0.00 mL、0.50 mL、1.00 mL、3.00 mL、5.00 mL、7.00 mL 和10.00 mL 酚标准使用液，再分别加水至200 mL。

（2）分别加2.0 mL 缓冲溶液混匀，此时溶液的pH 值为10.0±0.2，加1.5 mL 4- 氨基安替比林溶液并且混匀，然后再加入1.5 mL 铁氰化钾溶液并且充分混匀。

（3）在分液漏斗中准确加入10.0 mL 氯仿，密塞，剧烈摇动2 min，倒置放气，静置分层。用小块滤纸或者脱脂棉擦干分液漏斗颈管内壁中的小水珠，然后在颈管内壁中塞入滤纸或者脱脂棉，使氯仿层通过滤纸或脱脂棉，去掉滤出的前数滴萃取液体后，将剩下氯仿溶液直接放入比色皿（20 mm）中进行比色。

4.2 样品的测定与分析

用空白样、0.1 C 浓度标样、0.9 C 浓度标样、天然水样、水样+标样、统一标样，同标准曲线测试步骤相同，每天测试一批次，每批次两个平行样，连续测定6 个批次。质控样每天测定一次，每次做两个平行双样，连续测定10 d。

5 实验的结果与分析

5.1 批内、批间变异分析

根据实验数据计算F值，若F＜F0.05，代表变异“不显著”；F＞F0.01，代表变异“显著”，环境、条件等可能干扰实验结果；F0.05＜F＜F0.01，代表变异显著性证据不足，需要查找原因进行分析。若MS批间＜MS批内，则。若F＜F0.05，说明批内、批间变异不显著，可将批间变异视为零，将批内变异作总变异的估计值；若F＞F0.05，则必须对其进行纠正。

表1 精密度偏性检验表

根据表1 精密度偏性检验表内容可以看出，实验数据通过批内变异（a）和批内变异（b）计算得出的变异显著性检验（F 检验）为无显著性差异，即0.1C、0.9C、天然水样、水样加标、统一标样均无显著性差异，说明实验结果没有受到实验外界条件的影响。

5.2 总标准差（St）检验

总标准差（St）小于被测浓度的5%可以接受；当5%浓度低于方法给定的检测限时，即用检测限作为衡量标准。此次实验总标准差（St）都小于测得数据浓度的5%，总标准差检验结果全部为合格，说明测试人员对仪器的操作使用熟练，对仪器的日常维护保持良好。

5.3 准确度的分析

在测定样品时，于同一样品加入一定量的标准物质进行测定，将测定结果扣除样品的测定值，计算回收率。加标回收分析在一定程度上能反映测试结果的准确度。在测定样品时，于同一样品加入一定量的标准物质进行测定，将测定结果扣除样品的测定值，计算回收率。加标回收分析在一定程度上能反映测试结果的准确度。在实际应用实应注意加标物质的形态，加标量和样品基体等。每批相同基体类型的测试样品应该随机抽取10%～20%的样品进行加标回收分析。

本次试验的平均回收率P＝99.8%，在合格范围之内，说明此次实验的数据是准确可靠的。

5.4 质控图的合理性分析

本次实验通过10 天对0.9C 进行的20 次测定数据，计算出控制样的X 及S，绘制精密度控制图。纵坐标为测定值，横坐标为获得数据的顺序。将均值X 作成与横坐标平行的中心线CL3S 为上、下控制限UCL 及LCL，±2S 为上、下警戒限UWL 及LWL。试样分析时，每批带入控制样，测定数据在控制图上打点，若点落在控制警戒限内，则表示结果满足要求；若点落在控制限外，表示结果不合格，查找原因并纠偏后再进行测定。若控制样品的结果落在控制限和警戒限之间，表示实验的精密度不理想，应该引起重视。

图1 为质量控制图，点数全都落入警告限以内，75%以上落入辅助限以内，分布合理，表示该次实验数据处在受控状态。

图1 质量控制

6 结论

精密度偏性试验与评价，是对实验室人员的技术水平和分析标准方法的适用性得出科学评价。通过4- 氨基安替比林光度法测定挥发酚的精密度偏性试验可以看出：实验室对挥发酚项目分析操作控制过程较好，实验分析得到的各项数据指标均可以达到实验室内部质量控制要求，整个分析过程均在质量控制状态，分析人员的操作技能和方法、测试数据质量是可靠的。