冷藏时间对两广二号越年种孵化率影响试验初报

秦友华 张兆琴 龚毕宝 宿吉峰

(陕西省石泉县蚕种场，陕西石泉 725200)

蚕桑产业一直是石泉县的主导产业，是全县富民强县的功勋产业，尤其在脱贫攻坚工作中对贫困户产业增收致富发挥着巨大作用。随着近年来极端气候频发，石泉县夏秋季蚕病发生率越来越高，甚至有的村上大面积爆发，蚕农颗粒无收，严重影响蚕农养蚕的积极性。2012年以来石泉县蚕种场优化全县蚕品种结构，夏秋季全县饲养两广二号替代春秋兼用品种871×872，大幅降低了蚕病发生率，提高了蚕茧质量。但是，生产实践中两广二号越年种多次发生蚕种孵化不齐、孵化率低问题，导致生产用种直接报废，给蚕种场造成严重经济损失。为了解和掌握两广二号蚕种的冷藏时间与孵化率、千卵粒重变化的关系，笔者于2018年、2019年进行了两广二号越年种冷藏天数对其实用孵化率的影响试验，分析冷藏天数与孵化率及千粒卵重变化的相关性，探讨两广二号春制越年种与秋制种的冷藏期限，以期对改进蚕种生产、保护工艺提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

两广二号(正反交)、皓月×菁松一代杂交种，均为石泉县蚕种场繁育的越年种。

1.2 试验方法

将本场2017年春制两广二号正交、两广二号反交、皓月×菁松一代杂交种按照常规复式冷藏方法入库保护，2018年分阶段分别抽取冷藏0 d、79 d、111 d、142 d、146 d、150 d、153 d、156 d、159 d、162 d、165 d、168 d、171 d的以上品种各3 g，按品种对应冷藏天数分成3个重复区，每区1 g，清点各区卵粒数，采用两段式简化催青方法分次催青，蚕种转青后黑暗保护至次日早6：00感光孵化：①催青开始前，调查各品种入库前和入库后各处理区千粒卵重，进行各品种冷藏天数与千粒卵重变化的相关性分析；②蚕卵孵化二日后，调查各品种冷藏79 d、111 d、142 d、146 d、150 d、153 d、156 d、159 d、162 d处理区的实用孵化率，对处理区孵化率反正弦转换数据进行相关性分析。孵化率调查方法按照农业部颁发的一代杂交种检验操作规程(NY/T327-1997)进行。

2)将本场2018年春季、2018年秋季繁育的两广二号正反交品种按照常规复式冷藏方法入库保护，2019年分阶段分别抽取冷藏79 d、111 d、142 d、162 d两广二号正反交品种各3 g，按品种对应冷藏天数分成3个重复区，每区1 g，清点各区卵粒数，采用两段式简化催青方法分次催青，蚕种转青后黑暗保护至次日早6：00感光孵化，2日后调查实用孵化率。将实用孵化率数据反正弦转换后按繁育期、冷藏时间及二因素互作进行显著性分析检验，并对差异显著的因素进行平均数多重比较。

2 结果与分析

2.1 冷藏时间对蚕卵重量的影响

两广二号(正反交)、皓月×菁松千粒卵重的变化调查及相关系数显著性检验见表1-2。

从表1、表2可知，两广二号(正交)、两广二号(反交)、皓月×菁松冷藏入库时蚕卵千粒卵重分别为0.505 g、0.497 g、0.558 g，随着冷藏时间延长，蚕卵重量均逐渐减轻，冷藏171日(6月30日)后其千粒卵重分别下降至0.473 g、0.470 g、0.548 g。经相关分析，相关系数分别为-0.6346、-0.729、-0.4631，经F值显著性检验，两广二号(正交)差异性显著，两广二号(反交)差异性极显著，皓月×菁松差异性不显著。

表1 不同品种不同冷藏时间的千粒卵重调查

表2 冷藏时间对不同蚕品种卵粒重相关系数显著性检验

2.2 冷藏时间对蚕种孵化率的影响

两广二号(正反交)、皓月×菁松不同冷藏时间下的孵化率调查及相关系数显著性检验见表3-4。

从表3、表4可知，在标准温度冷藏保护中，不同品种对冷藏期限表现不同效果，皓月×菁松冷藏162 d(6月21日)孵化率达98.57%，仍达到农业部桑蚕一代杂交种行业质量标准(NY/326-1997)越年种实用孵化率≥90%的要求，与春季3月30日(冷藏79 d)孵化率调查相差不大，完全可以满足蚕桑生产需要，而两广二号正反交品种的孵化率随冷藏时间延长逐渐下降，142 d(6月1日)孵化率分别为81.07%、71.37%，冷藏162 d时孵化率分别下降至71.23%、58.37%，按照桑蚕一代杂交种行业及企业标准，这两批蚕种不能用于夏蚕生产。经孵化率数据转换后的相关分析，3个批次两广二号(正交)、两广二号(反交)、皓月×菁松的相关系数分别为-0.9360、-0.9497、-0.3521，相关系数显著性检验，3个批次两广二号(正交)、两广二号(反交)、皓月×菁松的F值分别为：49.495、64.3777、0.9906，两广二号(正交)、两广二号(反交)差异极显著，皓月×菁松差异不显著，说明含多化性血液品种耐冷藏性差，不利于长期冷藏。

表3 不同品种不同冷藏时间的实用孵化率调查

表4 冷藏时间对不同蚕品种孵化率的相关系数显著性检验

2.3 蚕种繁育期与冷藏时间的关系

春制、秋制两广二号正反交品种常规复式冷藏后的孵化率调查结果见表5-7。

从表5、表6可知，春制、秋制两广二号冷藏79 d平均孵化率分别为98.2%、98.4%，随着冷藏时间延长，春制两广二号孵化率逐渐下降，冷藏142 d时时平均孵化率下降至76.2%，冷藏162 d平均孵化率下降至64.8%，生产中必须淘汰；秋制两广二号冷藏至162 d平均孵化率仍有97.7%，下降幅度不大，达到行业及企业质量标准，夏蚕种完全可以使用。经孵化率数据转换后差异显著性分析，繁育时期、冷藏时间及二因素交互作用均为差异极显著。

表5 繁育时期与冷藏时间二因素孵化率调查表

表6 冷藏时间、繁育期二因素方差分析表

由表7可知，B1、B2差异不显著，与B3、B4差异极显著，B3与B4差异极显著，进一步对不同处理组合平均数采用SSR法多重比较，由表9可知，A2B1、 A2B2、A1B1、A2B3、A1B2、A2B4差异不显著，与A1B3、A1B4差异极显著，A1B3与A1B4差异极显著,说明秋制两广二号安全冷藏期可达162 d，春制两广二号安全冷藏期只有111 d，即：春制两广二号越年种只可翌年春用，不可翌年夏用，秋制两广二号蚕种可以冷藏至翌年夏季使用[1]。

表7 不同处理组合平均数多重比较(SSR法)

3 小结与讨论

3.1 冷藏时间对蚕种质量的影响

千粒卵重是衡量蚕种质量优劣的指标之一。试验结果表明，两广二号千粒卵重与与冷藏时间呈负相关，反交千粒卵重随冷藏时间延长显著性减小，而皓月×菁松千粒卵重与冷藏时间相关不显著。两广二号蚕卵小，可能是贮存的营养物质较皓月×菁松少，加之两广二号越冬解除滞育早，蚕卵内营养物质消耗比皓月×菁松快，所以两广二号蚕种冷藏时蚕卵重量减轻幅度较皓月×菁松大。千粒卵重的变化反映了蚕卵内营养物质的消耗情况，必然对蚕种的孵化造成一定的影响，千粒卵重与孵化率之间的变化关系有待进一步研究。

3.2 冷藏时间对蚕种孵化率的影响

实用孵化率即二日孵化率是衡量蚕种质量优劣的重要指标。试验结果表明，两广二号孵化率与冷藏时间呈负相关，随着冷藏时间的延长，孵化率逐渐下降，其反交种孵化率下降更为明显，而皓月×菁松品种几乎不受影响，在现行实用孵化率≥90%的生产标准下，本试验两广二号春制越年种冷藏安全期为111 d,秋制种冷藏安全期为162 d。两广二号为上世纪九十年代广东、广西蚕区选育的夏秋用四元杂交种，我国南方地区桑树发芽开叶早，一年可多批次养蚕，越年种无需长时间冷藏。两广二号含有多化性血缘[2]，抗高温，越年种滞育期短，北方引种繁育后应掌握好冷藏期限，防止超期冷藏造成蚕种孵化率下降，给蚕桑生产带来迎头损失。

3.3 两广二号春制越年种与秋制种用种问题

一般地，春制种可以通过即时浸酸、冷藏浸酸满足当年夏蚕种、秋蚕种的生产需要，春制越年种和秋制种可以为翌年提供生产用种。本试验结果表明，两广二号繁育期、冷藏时间的差异极显著，二因素交互作用的差异极为显著，也就是说春制越年种不如秋制种耐冷藏，两广二号春制越年种只可翌年春用，不可翌年夏用，两广二号秋制越年种可以冷藏至翌年夏季使用。2018年起，石泉县蚕种场结合品种特性及气候特点，采用多批次繁育蚕种模式，即：春季以生产菁松×皓月为主，晚春或夏季繁育两广二号作为即时浸酸早秋用种，秋季繁育两广二号翌年夏季用种的模式，缩短蚕种冷藏时间，大幅提高了两广二号蚕种的孵化率，降低蚕种生产成本的同时还减轻了冷藏浸酸蚕种计划失调而报废蚕种的风险。