自体免疫多细胞联合化疗治疗多发性骨髓瘤患者的临床效果

欧阳贤凤，罗萍（通信作者），邬珊，胡飞，于继海，李金凤，徐旭升，郭瑛，黄雄，朱文凤

江西省九江市第一人民医院 （江西九江 332000）

多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）是临床常见的血液系统恶性肿瘤，好发于老年人群，主要临床表现为血钙增高、贫血、骨痛及肾功能损伤，即“CRAB 症状”[1]。近年来，随着我国人口老龄化速度的加快，MM 发病率不断上升。临床治疗MM 患者的传统方法包括化疗、靶向治疗、造血干细胞移植等，但疗效均不理想，患者的中位生存期仅为3年[2]。随着恶性肿瘤自体免疫细胞治疗研究的广泛开展，树突状细胞（dendritic cell，DC）、细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-induced killer，CIK，）、自然杀伤细胞（natural killer cell，NK）分别在MM 患者的治疗中取得了一定疗效[3]。本研究在传统治疗基础上联合DC-CIK-NK 自体免疫多细胞治疗MM 患者，预期目的是提高患者的无进展生存期（progression free survival，PFS）及总生存期（overall survival，OS），改善患者的生命质量，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年6月至2018年6月我院血液科收治的MM初诊患者42例，按随机原则分为两组，每组21例。试验组男11例，女 10例；平均年龄（68.84±9.72）岁；Duris-Salmon 分型，Ⅰ～Ⅱ型12例，Ⅲ型9例；R-ISS 分型，Ⅰ～Ⅱ型10例，Ⅲ型11例；平均血红蛋白（hemoglobin，Hb）水平为（76.96±5.21）g/L。对照组男10例，女 11例；平均年龄（68.50±9.45）岁；Duris-Salmon 分型，Ⅰ～Ⅱ型13例，Ⅲ型8例；R-ISS 分型，Ⅰ～Ⅱ型7例，Ⅲ型14例；平均Hb 水平为（77.04±5.47）g/L。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经医院医学伦理委员会批准。

诊断标准：完成基本检查；骨髓单克隆浆细胞比值≥10%或活检提示浆细胞瘤；血清或尿液中出现单克隆球蛋白；表现有“CRAB 症状”[4]。纳入标准：通过血液检查、尿液检查、骨髓检查、影像学检查等确诊为MM；具有完整行为能力并同意签署知情同意书。排除标准： 对本研究化疗药物不耐受的患者；合并严重心脑血管或神经系统疾病的患者；曾接受过骨髓移植或二次治疗的患者；依从性差或中途退出的患者。

1.2 方法

对照组采用TMP 方案（沙利度胺+美法仑+地塞米松）化疗：沙利度胺片（常州制药厂有限公司，国药准字H32026130，规格50 mg）口服，首周50 mg/d，每周增量50 mg，最大剂量为200 mg/d；美法仑（爱克兰， Heumann Pharma GmbH，注册证号 H20040125，规格 2 mg）口服，0.15 mg/kg，d1-4；地塞米松硫酸钠注射液（辰欣药业股份有限公司，国药准字H37021969，规格1 ml∶5 mg）静脉滴注，40 mg/d，d1-2、d4-5、d8-11，6周为1个疗程。

试验组在对照组基础上联合DC-CIK-NK 自体免疫多细胞疗法。（1）细胞株肿瘤抗原提取液制备流程：复苏冻存多发性骨髓瘤细胞株，进行细胞培养（传代不超过25代）；24 h 后吸出培养基，再用细胞勺刮取肿瘤细胞，离心去上清后，用无菌0.9%氯化钠注射液重悬；然后将肿瘤细胞置于-86 ℃冰箱，反复冻融10次，12 000 r/min 离心5 min，去上清，过滤除菌；测定细菌、真菌、内毒素、支原体及蛋白浓度，按蛋白浓度以培养液配成5 mg /ml 作为抗原提取液，-20 ℃保存，质检合格后待用。（2）DC 的培养：将外周血单个核细胞铺入6孔板，置于37 ℃、5% CO2培养箱中孵育2 h 后，轻轻晃动，取悬浮细胞待用；用培养基洗板2次后，加入培养基继续培养；第3天加入DC 培养基，第5天加入肿瘤抗原提取液，诱导10～15 h 加入细胞因子（如抗CD3单克隆抗体、白细胞介素-2和干扰素-γ 等）；第8天开始连续2 d 回输，共4次。（3）CIK 的培养：将DC 培养得到的部分悬浮细胞密度调整为1×106个/ml，加入干扰素，置于37 ℃、5% CO2培养箱中培养24 h，然后加入细胞因子（如抗CD3单克隆抗体、白细胞介素-2 和干扰素-γ等），继续培养，每3 天半量换液，并补加相应细胞因子和自体血浆；12 d 后开始回输，连续2 d，共回输4 次。（4） NK 的培养：将DC 培养得到的部分悬浮细胞密度调整为1 ×106个/ml，加入抗CD3单抗，培养3 d 后，更换含细胞因子的培养基，置于37 ℃、5% CO2培养箱中培养，每3天半量换液，并补加相应细胞因子及自体血浆；14 d 后开始回输，连续2 d，共回输4次。（5）回输：质量检控合格的细胞，用5%患者自体血浆重悬，将重悬液注入100～250 ml 0.9%氯化钠注射液中，混匀，用于第1次回输，同时取1 ml 回输液置于灭菌1.5 ml 离心管中，封口做标识，4 ℃存放3个月备查；剩余细胞在10～17 d 内回输完。

1.3 观察指标

（1）治疗4个疗程后，比较两组治疗总有效率：参考国 际 骨 髓 瘤 工 作 组（International Myeloma Working Group，IMWG）标准，治疗效果分为完全缓解、非常好的部分缓解、部分缓解、疾病稳定、疾病进展，总有效率=（完全缓解例数+非常好的部分缓解例数）/总例数×100%。（2）随访2年，记录两组PFS 与OS：PFS 为患者接受治疗至最后一次随访结束时，发现疾病进展或死亡的时间；OS 为分组至最后一次随访结束或死亡的时间。

1.4 统计学处理

采用SPSS 21.0统计软件进行数据分析，计量资料以±s表示，采用t检验，计数资料以率表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组治疗总有效率比较

试验组治疗总有效率高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两组治疗总有效率比较

2.2 两组PFS 与OS 比较

随访2年，试验组PFS 与OS 均长于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 两组PFS 与OS 比较（个月，±s）

表2 两组PFS 与OS 比较（个月，±s）

注：PFS 为无进展生存期，OS 为总生存期

组别 例数 PFS OS试验组 21 23.44±0.95 24.02±0.99对照组 21 20.87±2.42 21.09±2.18 t 4.524 5.591 P＜0.05 ＜0.05

3 讨论

目前，临床已将自体细胞免疫疗法列入MM 的治疗原则，该疗法可调节肿瘤微环境中T 细胞的组成及比例，从而识别并杀死癌细胞。

DC 是机体功能最强的专职抗原递呈细胞，它能高效地摄取、加工、处理和递呈抗原给杀伤肿瘤的效应细胞，利用肿瘤抗原冲击DC 的过继细胞免疫治疗具有强大的抗肿瘤效应，已被用于多种实体肿瘤的治疗；CIK 具有增殖能力强、杀瘤活性高、杀瘤谱广及非主要组织相容性复合体限制性杀瘤等特点，具有广泛杀伤自体、异体及耐药癌细胞的作用[5]； NK 可通过识别癌细胞表达的NK 表面分子配体，而对癌细胞产生杀伤作用[6]。DC-CIK-NK 自体免疫多细胞疗法可发挥DC 的传输抗原信息能力、CIK 的特异性杀伤和非MHC 限制性杀伤能力、NK 的识别恶性转化细胞能力。DC-CIK-NK 自体免疫多细胞疗法的治疗机制如下：首先，经辅助细胞（如DC、单核细胞、巨噬细胞等）活化的NK 细胞进入患者体内，到达效应部位，在其他活化信号的作用下成为效应细胞，发挥快速杀伤癌细胞的特点；其次，适度联合放、化疗可以使癌细胞上的NK 细胞活化受体的配体表达开启，增加癌细胞对NK 细胞杀伤的敏感性；另外，NK 和CIK 的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用也有助于提高临床疗效。本研究结果显示，试验组治疗总有效率高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；随访2年，试验组PFS 及OS 均长于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。

综上所述，自体免疫多细胞联合化疗有助于提高MM患者的治疗效果，延长其生存期。