两种大孔树脂提取都匀毛尖茶儿茶素对比探究

杜文静，李 静

（黔南民族师范学院生命科学系，贵州都匀 558000）

儿茶素又称儿茶精、茶单宁，是茶叶中的主要成分，天然的儿茶素主要有6 种单体，分别为表儿茶素、儿茶素、表没食子儿茶素、没食子儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯［1-2］。儿茶素由于其抗氧化性及清除自由基的功能而日益受到人们的重视，具有抗氧化、抗癌、抗衰老和降脂降压等作用，在医药领域有广泛应用，主要用于生产抗肿瘤药物、心血管保健药物、抗病毒制剂、抗糖尿病及肥胖症保健药品等［3］。提取茶叶中的这些重要活性化学物质有着重要意义。目前我国对于提取儿茶素的主要来源是茶叶，方法主要有溶剂萃取法、离子沉淀法和柱色谱分离法［4-6］。

本研究改进传统的儿茶素提取工艺，采用树脂法提取纯儿茶素。以绿茶提取物——茶粉样品为原料，经浸提、大孔吸附树脂吸附洗脱，最后经乙醇解离烘干得单体，用树脂法进行儿茶素提取。研究不同浓度乙醇对于树脂提取儿茶素是否有影响；并用两种树脂进行比较，树脂的吸附能力对于儿茶素提取含量进行比较。区别于其他传统方法，本研究对于提取的儿茶素没有污染，没有重金属残留。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

RE-52AA 旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）、KD-80 三孔电热恒温水槽（上海齐欣科学仪器有限公司）、GZX-9140MBE 电热鼓风干燥机（上海博讯实业有限公司）、自制填充管、CP214 电子天平（奥豪斯仪器有限公司）、紫外分光光度计（上海元析仪器有限公司UV-6100S）、CTFD-10S抽真空器（郑州长城科工贸有限公司）、SE602FZH 电子天平［奥豪斯仪器（上海）有限公司］。

甲醇、乙醇、丙醇、乙酸乙酯、蒸馏水等。

1.2 实验材料

干茶叶，品种为都匀毛尖，采于贵州省都匀市；茶多酚，购于好再来天然植物馆；D101 大孔树脂，购于慧赢实验厂家；AB-8 大孔树脂，购于天津市凯威化工有 限公司。

1.3 方法

1.3.1 大孔树脂筛选

1）取材。称取14 组茶多酚，每组茶多酚均为2 g，分别溶于50 mL 水。2）加热。放入水浴锅加热，水温恒定在75 ℃。3）冷却。材料溶液冷却至常温。4）树脂吸附。将茶多酚溶液分别倒入装有D101 树脂和AB-8 树脂的烧杯中［7-9］，静置10 min；将有吸附树脂和茶多酚的混合溶液倒入自制的填充柱中进行过滤，滤干。5）解离。将40 mL 浓度为35%、45%、55%、65%、75%、85%和95%乙醇，分别倒入7 支填充柱中进行解离，重复3 次。6）测OD。取2 mL 解离液用紫外光分光光度计在210 nm、270 nm 和280 nm 处测吸光度。7）浓缩干燥。将解离液用蒸发仪抽真空浓缩，浓缩液放到干燥箱内干燥12 h。

1.3.2 不同浸提剂提取儿茶素

按照上述步骤取材后，在75 ℃的恒温水浴锅中浸提30 min，然后取出，待溶液冷却至常温，使用树脂吸附及过滤，用40 mL 的浸提剂水、50%甲醇、50%乙醇、50%丙醇和乙酸乙酯，分别倒入5 支填充柱中进行解离，重复3 次。最后测OD 值、浓缩干燥。

1.3.3 不同原料提取儿茶素

称取一组20 g 干茶叶和一组2 g 的茶多酚成品，分别溶于50 mL 温度为75 ℃的水中恒温浸提后冷却，树脂吸附、过滤，将浓度85%乙醇40 mL 倒入填充柱中进行解离，重复2～3 次，使儿茶素充分解离，最后测OD 值、浓缩干燥。

1.4 儿茶素提取质量

将解离液放入旋转蒸发仪抽真空浓缩5 倍，浓缩液放入烘干箱60 ℃烘干12 h，用电子天平称量，得到儿茶素提取质量。

2 结果与分析

2.1 大孔树脂筛选结果

在D101 大孔树脂中不同浓度梯度乙醇对提取儿茶素的结果如图1 所示。根据图1 可知，不同乙醇浓度对儿茶素提取会有不同的影响。乙醇浓度在75%时对于吸附在树脂上的儿茶素解离的较充分，提取最多。

图1 儿茶素提取质量图

在AB-8 大孔树脂中不同浓度梯度乙醇对提取儿茶素的结果如图2 所示。根据图2 可知，AB-8 大孔树脂对儿茶素的提取量在乙醇浓度为35%～85%时随浓度升高提取量升高，在乙醇浓度为85%提取量最高，提取效果最好，乙醇浓度大于85%提取量降低。

图2 儿茶素提取质量图

2.2 不同溶剂对干茶叶提取儿茶素的结果

不同浸提剂条件下，干茶叶提取儿茶素的结果见 表1。根据表1 可知，不同溶剂对儿茶素提取量不同，乙醇的提取量最高。

表1 不同浸提剂对干茶叶提取儿茶素的比较结果

2.3 不同原料对儿茶素提取的影响

干茶叶和茶多酚成品提取儿茶素含量见表2。根据表2 可知，不同原料对儿茶素提取有不同的影响，干茶叶提取儿茶素比茶多酚提取量高。

表2 干茶叶和茶多酚成品提取儿茶素含量比较

3 结论与讨论

1）在D101 大孔树脂实验中，儿茶素提取在乙醇浓度75%时最多。而AB-8 大孔树脂提取的最佳条件和D101 大孔树脂的不同。AB-8 大孔树脂对儿茶素的提取率在乙醇浓度为35%～85%会随浓度升高提取量升高。该大孔树脂乙醇浓度为85%时提取的儿茶素量是最高的。乙醇是作为解离剂，在85%的时候对于吸附在树脂上的儿茶素解离较充分，提取效果最好。且图2 直观的呈现儿茶素提取量与乙醇浓度间的关系，乙醇浓度为35%～85%时，儿茶素提取量与乙醇浓度呈正比关；乙醇浓度为85%～95%时，茶素提取量与乙醇浓度呈反比关系。

2）根据相似相溶的原理，应是乙酸乙酯对于儿茶素的选择性最强，但其提取儿茶素的得率最低。乙醇的得率最高，这是由于乙醇的羟基与儿茶素及茶多酚分子中含有的酚羟基能形成氢键而具有良好的溶解性，而且天然状态的儿茶素与茶多酚往往以氢键与蛋白质、多糖等大分子物质结合成复合物形式存在，乙醇溶液具有断裂氢键的能力，有利于使缔合态的儿茶素及茶多酚游离出来。

3）在干茶和茶多酚两种原料提取儿茶素的实验中，干茶叶的提取率比茶多酚的提取率高。