常见药用植物纯露抑菌性及保湿性能研究

赵 丹

（衡水学院生命科学学院 河北 衡水053000）

纯露是指芳香植物在进行水中蒸馏萃取的过程中，提取精油时分离出来的一种饱和的蒸馏原液，是精油的一种副产品，成分无杂，纯净，香味清新雅淡[1]。纯露中含矿物养分单宁酸及类黄酮，这些是精油中缺乏的，由于其浓度很低，皮肤很容易吸收，并且没有任何香精和酒精的成分，温和无刺激性，受到许多女性的青睐，尤其是一些肌肤敏感的女性。纯露具有良好的抑菌性[2]，不同植物纯露抑菌性效果存在差异，筛选优良纯露需要对其进行抑菌性试验。国内纯露市场缺少抑菌性方向的研究，纯露应用功能性较为单一。通过研究常见药用植物的抑菌性，兼顾纯露其他特性，以期开发筛选出新型抑菌性强、多功能的优质纯露，拓宽药用植物在化妆品、医药等方面的运用渠道。

1 材料与方法

1.1 试验材料与试剂

1.1.1 药用植物。蒲公英、生姜、薄荷。

1.1.2 菌种。大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphyloccus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，由衡水学院微生物实验室提供。

1.1.3 试验药品。牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂(均为国产分析纯)，蒸馏水、超纯水。

1.2 试验仪器与设备。SW-CJ-2F超净工作台、BSD-250全温振荡培养箱、SPX-150B-Z生化培养箱、BGZ-140电热鼓风干燥箱、YXQ-LS-50SII立式压力蒸汽灭菌锅、移液枪、蒸馏装置、游标卡尺、pH计、皮肤水分测试仪。

1.3 试验方法

1.3.1 纯露的提取。选取常见的药用植物蒲公英、生姜、薄荷，蒸馏水清洗干净，在超净工作台中将材料和超纯水按1∶2的比例加入蒸馏瓶中，整理装置使其处于密闭状态，用水蒸气蒸馏法[3，4]蒸馏萃取出3种植物纯露。将提取的3种纯露分别装入灭菌的棕色试剂瓶中，于4℃冰箱中避光保存。

1.3.2 菌种活化。在超净工作台中，用接种环分别将枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌菌斑在牛肉膏蛋白胨固体培养基上划线，37℃培养3 d。挑取单菌落接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，37℃震荡培养20～24 h，使菌液浓度达到1×105～106CFU/mL。

1.4 纯露抑菌性测定

1.4.1 纸片抑菌圈法[5]。用打孔器将滤纸裁成6 mm的圆片，干热灭菌备用。在净化工作台中进行无菌操作，将活化浓度为1×105～106CFU/mL的大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌，用移液器分别吸取100μL接种到牛肉膏蛋白胨培养基上，并用灭菌的涂布棒涂布均匀，在每个含菌培养基上放置4个滤纸片，将滤纸片均匀分布在培养基上，其中3个滤纸片分别滴加5μL蒲公英、生姜、薄荷纯露，另1个滤纸片滴加5μL灭菌的超纯水作为对照。3种纯露、3种菌种做3组平行试验。放在37℃培养箱中培养24 h后观察菌落生长情况，用十字交叉法测量抑菌圈的大小，记录并整理好试验数据。由抑菌圈的直径大小比较纯露的抑菌性，以灭菌的超纯水作为对照。抑菌性评价标准见表1[6]。

表1 抑菌圈法抑菌性评价标准

1.4.2 自然沉降法。本试验将3种药用植物纯露，在无菌条件下用移液器分别吸取150μl的纯露在牛肉膏蛋白胨固体培养基上，用涂布棒涂布均匀。以灭菌的超纯水为空白对照。在衡水学院实验楼进行自然沉降试验30 min。沉降结束后放入培养箱培养16～24 h，计数并统计结果。经过培养计数后，观测培养皿中菌落的生长状况，以此来判断纯露的抑菌效果[7]。

1.5 纯露酸碱度的测定。用pH计分别测定3种纯露的酸碱度。

1.6 纯露保湿性能比较。选用人体法[8，9]进行3种纯露保湿性能的比较，以5%甘油作为阳性对照。招募30名皮肤健康的志愿者，在室温22℃±2℃、相对湿度40%～50%的环境中，用皮肤水分测试仪进行测试。首先将志愿者的手臂清洗干净自然晾干，在手臂内侧画出3 cm×3 cm的5个区域进行测试，用移液枪吸取不同纯露，以(2.0×0.2)mg/cm2的浓度分别涂抹在手臂的测试区域，用戴乳胶手套的手指按摩至吸收，用皮肤水分测试仪分别测量各个位置的含水量[10]，共设置7个时间梯度，分别是：0 min、15 min、30 min、45 min、60 min、90 min、120 min，同时间段同一位置重复3次测定皮肤水分含量，记录并统计，最后求平均值，计算在测试时间内皮肤水分变化率。皮肤水分变化率为皮肤水分含量的变化值与涂抹纯露前的测定值之比。

2 结果与分析

2.1 3 种药用植物纯露体外抑菌试验。本试验选用枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌3种菌种对3种纯露进行体外抑菌试验。通过试验得出3种纯露对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果明显，但对大肠杆菌无抑菌作用。其中蒲公英、生姜、薄荷纯露对枯草芽孢杆菌平均抑菌圈直径分别为12.48 mm、11.30 mm、10.90 mm，对枯草芽孢杆菌的敏感度达到中度敏感，抑菌强度：蒲公英＞生姜＞薄荷。蒲公英、生姜、薄荷纯露对金黄色葡萄球菌平均抑菌圈直径分别为15.63 mm、13.25 mm、12.07 mm，对金黄色葡萄球菌的敏感度达到中度敏感，抑菌强度：蒲公英＞生姜＞薄荷。蒲公英纯露对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌均表现出较强的抑菌性，结果如表2。

表2 3种纯露对3种供试菌的抑菌作用

2.2 自然沉降法试验。通过自然沉降试验，统计各培养皿的菌落数，所选3种药用植物纯露培养皿的菌落数明显低于对照菌落数，比较结果如图1，通过本试验可以证明，这3种药用植物纯露均具有抑菌性，抑菌效果：蒲公英＞生姜＞薄荷。

图1 自然沉降法药用植物纯露抗菌性试验计数结果

2.3 纯露酸碱度测定结果。用pH计测定3种纯露的酸碱性，测定结果显示3种纯露均为弱酸性，蒲公英纯露pH值为5.40，生姜纯露pH值为5.53，薄荷纯露pH值为5.61，人体皮肤的pH范围是4.2～6.5[11]，pH值5～6的护肤品是最适合人体皮肤的，因此这3种纯露均符合标准，适合用来做护肤品，不会对皮肤产生刺激。

表3 3种纯露酸碱性测定结果

2.4 纯露保湿性能测定结果。将纯露和5%的甘油分别涂抹到手臂内侧，利用皮肤水分测试仪对2 h内的皮肤水分变化率进行测定。在0～90 min内，蒲公英和薄荷纯露的皮肤水分变化率高于5%甘油，具有显著性差异(P＜0.05)，在达到120 min时无显著性差异。在0～120 min内，生姜纯露的皮肤水分变化率均低于5%甘油。纯露保湿性能测定结果表明，蒲公英和薄荷纯露保湿能力高于5%甘油，可以作为一种天然保湿剂使用。

图2 使用纯露后的皮肤水分变化率

3 结论与讨论

本试验选用蒲公英、生姜、薄荷3种常见药用植物进行纯露的提取，研究了这3种纯露对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌3种细菌的抑菌性，并对这3种纯露的pH值、皮肤水分变化率进行测定。

3.1 在抑菌性试验中，纸片法试验得出3种纯露均对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌具有抑菌作用，且对金黄色葡萄球菌的抑菌效果最强，3种纯露对大肠杆菌无抑菌性。3种纯露的抑菌效果为蒲公英＞生姜＞薄荷，蒲公英纯露的抑菌性最强。自然沉降法试验得出这3种药用植物纯露均具有抑菌性，抑菌效果为蒲公英＞生姜＞薄荷，蒲公英纯露的抑菌性最强。

3.2 纯露酸碱度测定试验中，得出3种纯露均呈弱酸性，与人体正常皮肤所需pH值相符，适合做皮肤的护理产品，不会因为pH值对皮肤产生刺激。

3.3 通过皮肤水分变化率的测定可以得出，蒲公英和薄荷纯露保湿能力高于5%甘油，可以作为天然保湿剂使用，其中蒲公英纯露的保湿性能最佳。

综合以上试验结果表明，蒲公英纯露在供试的3种药用植物纯露中抑菌性最强，保湿性能最佳。对药用植物的综合利用和开发有借鉴意义，可以为蒲公英附加值产品的开发提供理论依据。

进行试验时要注意试验操作误差，如在纯露提取过程，需要反复摸索药用植物和超纯水的比例，保证纯露的提取效率；菌种的放置时间会对菌种的活性产生影响，避免菌种存放时间过久，若菌种活性降低也可以通过多次接种保持菌种的活性，试验过程中要排除因菌种活性降低对试验结果的影响。