急性冠脉综合征患者血浆miR-122、miR-29b、miR-30d水平变化及诊断价值

郝春霞 张小光 李伟 张颖

经调查［1］发现，急性冠脉综合征（Acute coro-nary syndrome，ACS）是导致心血管疾病患者死亡的主要原因。同时也是冠状动脉粥样硬化性心脏病中的急危重症；若是早期能够准确识别，对控制病情发展及改善预后具有重要意义。有研究［2］指出，血脂、高敏C 反应蛋白等指标在冠状动脉粥样硬化心脏病的发生及发展中起到重要意义。基于此，探寻一种特异性、敏感度较高的指标用于预测急性冠脉综合征病情发展十分重要，也一直是临床研究的重点。有研究［3］指出，miRNA 异常表达与急性冠脉综合征的发生密切相关，但临床上关于其研究报道较少，尚不清楚miR-122、miR-29b、miR-30d等作用机制，故本次旨在探讨急性冠脉综合征患者血浆miR-122、miR-29b、miR-30d 水平变化及诊断价值。现将其报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

分析2017年1月至2020年1月诊治的102 例急性冠脉综合征患者（观察组）和40 例健康体检人员（对照组）的临床资料。诊断标准：符合《急性冠脉综合征急诊快速诊治指南（2019）》［4］的诊断标准，经冠状动脉造影等技术确诊。纳入标准：①首次发病；②年龄>18 岁；③无脑出血等疾病。排除标准：①存在全身性感染等疾病；②伴有先天性心脏病；③接受过冠脉支架植入治疗。观察组中男性52 例、女性50 例；年龄平均（51.23±2.45）岁；其中非ST 段抬高型肌梗死51 例、不稳定型心绞痛51 例；NYHA 心功能分级［5］：Ⅰ级15 例、Ⅱ级28例、Ⅲ级35 例、Ⅳ级24 例；对照组中男性21 例、女性19 例；年龄平均（51.32±2.41）岁；两组在性别、年龄等资料比较，差异无统计学意义（P>0.05）。

1.2 试剂与方法

实时荧光定量PCR 检测后的血浆miR-122、miR-29b、miR-30d 等资料。操作步骤如下：于空腹状态下抽取受检人员外周静脉血5 mL，5 000 rpm离心20 min，取上清液至干净离心试管中待检；采用血液RNA 分离试剂盒（美国赛默飞世尔科技有限公司）提取血浆RNA，将100 ng 总RNA 进行1%琼脂糖凝胶电泳，以此保证RNA 的完整性，并采用紫外分光光度计（美国赛默飞世尔科技有限公司）检测吸光值，确定提取RNA 纯度是否合格，其次采用RNA 逆转录试剂盒（美国Takaya 科技有限公司）对提取RNA 进行逆转录，且选择SYBR-Green 荧光定量PCR 检测试剂盒（美国赛默飞世尔科技有限公司）对血浆miR-122；miR-29b；miR-30d 进行荧光定量PCR 检测；其中，miR-29b 反应体系为SYBR mix12.5 μL，miR-30d 为25 μL，miR-29b 为20 μL。PCR 扩增条件为95℃，40 s；96℃，10 s；59℃，50 s，进行36 个循环。最后根据2-△△Ct法计算miR-122、miR-29b、miR-30d 相对表达量，并以其相对表达量来表示血浆miR-122、miR-29b、miR-30d 的表达水平。三项联合=miR-122+（β miR-29b/β miR-122）×miR-30d（β miR-30d/β miR-122）×miR-29b，β 以组别为因变量，以miR-122、miR-29b、miR-30d 为自变量进行二元logistic 回归的回归系数。miR-29b 上游引物：5′GGCCTTAAGTCAAATGTCGGCT-3′；下游引物：5′-AAAGGATCACTGGAACCTGCC-3′；miR-122 上游引物：5′-GTTCGTGGGAGCTACATCTG-GC-3′；下游引物：5′-GCAGGGTCCGAGGTATTC-3′；miR-30d 上游引物：5′-AACCTGAGTGGAGCA-GA-3′；下游引物：5′-TGTAAACATCCCCGAC-3′。

1.3 观察指标

①评估观察组与对照组的血浆miR-122、miR-29b、miR-30d。②分析miR-122、miR-30d、miR-29b及三项联合的ROC 曲线，并评估其敏感度、特异度、约登指数。③评估A 组与B 组的血浆miR-122、miR-29b、miR-30d。④分析血浆miR-122、miR-29b、miR-30d与急性冠脉综合征患者严重程度的相关性。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0 软件进行数据分析；计量资料用（）表示，行独立样本t检验；预测价值评估采用ROC 曲线分析；相关性采用Spearman 法分析；以P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血浆miR-122、miR-29b、miR-30d 比较

观察组的miR-122、miR-30d 高于对照组，而miR-29b 低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

表1 两组血浆miR-122、miR-29b、miR-30d 比较（±s）Table 1 Comparison of plasma miR-122，miR-29b，miR-30d between 2 groups（±s）

表1 两组血浆miR-122、miR-29b、miR-30d 比较（±s）Table 1 Comparison of plasma miR-122，miR-29b，miR-30d between 2 groups（±s）

组别观察组对照组t 值P 值n 102 40 miR-122 4.83±1.94 1.02±0.14 12.382<0.001 miR-29b 0.70±0.23 1.45±0.49 12.404<0.001 miR-30d 5.01±1.14 1.98±0.32 13.238<0.001

2.2 诊断效能

ROC 曲线分析显示，miR-122、miR-30d、miR-29b、三项联合诊断急性冠脉综合征的AUC 分别为0.959、0.966、0.936、0.999（P<0.05）。见表2、图1。

表2 血浆miR-122、miR-29b、miR-30d 及三项联合的诊断效能分析Table 2 Analysis of the diagnostic efficacy of plasma miR-122，miR-29b，miR-30d and the combination of three items

图1 miR-122、miR-29b、miR-30d 及三项联合的ROC 曲线分析Figure 1 ROC curve analysis of miR-122，miR-29b，miR-30d and the combination of three

2.3 急性冠脉综合征患者的血浆miR-122、miR-29b、miR-30d 比较

A 组血浆miR-122、miR-30d 高于B 组，而miR-29b 低于B 组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表3。

表3 A、B 组的血浆miR-122、miR-29b、miR-30d 比较（±s）Table 3 Comparison of plasma miR-122，miR-29b，miR-30d between group A and group B（±s）

表3 A、B 组的血浆miR-122、miR-29b、miR-30d 比较（±s）Table 3 Comparison of plasma miR-122，miR-29b，miR-30d between group A and group B（±s）

组别A 组B 组t 值P 值n 51 51 miR-122 6.68±0.69 2.98±0.42 35.775<0.001 miR-29b 0.45±0.10 0.95±0.16 20.697<0.001 miR-30d 7.95±0.75 2.54±0.47 47.739<0.001

2.4 相关性分析

Spearman 相关性显示，miR-122、miR-30d 与急性冠脉综合征患者病情的严重程度呈负相关（r=-0.937、-0.857，P<0.05），而miR-29b 与急性冠脉综合征患者病情严重程度呈正相关（r=0.854，P<0.05）。

3 讨论

流行病学［6］调查发现，急性冠脉综合征在临床上具有较高的发病率和死亡率。经分析发现，该病的发生与动脉粥样硬化斑块破裂、血小板聚集、血栓形成、血管痉挛等病因具有直接关系，均是导致急性冠脉综合征患者冠状动脉管腔出现完全或不完全闭塞的重要原因，最终引起心肌急性缺血或坏死［7］。有研究［8］指出，miRNA 的异常表达与心血管疾病的发生、发展密切相关。也有研究表示，miRNA 参与血管脂质斑块形成、斑块破裂、糜烂、血小板聚集及心肌细胞坏死、凋亡等过程［9］。鉴于miRNA 异常表达与急性冠脉综合征的发生、发展具有一定相关性。本次从分析血浆miR-122、miR-29b、miR-30d 等因子入手，以期为临床诊断急性冠脉综合征及评估预后筛选实用指标。本研究结果提示血浆miR-122、miR-29b、miR-30d 异常表达与急性冠脉综合征发生、发展密切相关。其中，miR-122 是一种由肝脏特异性编码的多聚腺苷酸。经分析发现，其表达水平受miR-370 的调控，且参与体内脂肪酸和三酰甘油的合成。也有研究［10］指出，miR-122 参与胆固醇及脂肪酸代谢的调控，若是抑制血浆miR-122 的表达量，能有效降低总胆固醇水平，以及减少肝脏三酰甘油的含量。在侯素芝等［11］学者研究中可见，急性冠脉综合征组的TG、TC 显著高于稳定性心绞痛组和健康对照组，从中说明TG、TC 水平的升高能增加动脉粥样硬化的风险，导致急性冠脉综合征的发生。而miR-122 又参与了TG、TC 水平的升高，故本文推测miR-122 可能是胆固醇和脂肪酸代谢的调节器，可将其作为急性冠脉综合征诊疗的靶点。

有研究发现，miR-29b 异常表达与T 淋巴细细胞瘤、动脉粥样硬化、心肌纤维化等疾病的发生密切相关。譬如其在急性心肌梗死、心肌纤维化等疾病发生中均能起到一定调节作用，故临床将其作为多种疾病的诊断标志物分子［12-13］。在本研究中可见，miR-29b 与miR-122、miR-30d 不同，在患者中其血浆miR-29b 表达量呈明显下降趋势，经分析为，血管内皮细胞中的miR-29b 具有抑制核因子kB 信号通路活化的作用，在正常表达情况下，能抑制炎症反应对细胞的损害，使血管内皮细胞在细胞脂多糖的刺激下仍存活。当血浆miR-29b 表达量下降，则无法抑制核因子kB 信号通路的活化，并且会导致炎症因子水平升高，加大对心肌细胞的损伤，最终引发急性冠脉综合征［14］。miR-30d 作为microRNA-30 家族中的一员，参与了多种细胞的分化。有研究指出，miR-30d 表达量变化能调节硫化氢的分泌，保护缺血缺氧状态下的心肌细胞。在石萍等［15］学者研究中可见，急性冠脉综合征患者血浆中的miR-30d 表达量会随着胸痛时间呈动态变化，从中说明miR-30d 表达量会随病情发生改变。在本文Spearman 相关性显示，miR-30d 与急性冠脉综合征严重程度呈负相关，佐证上述说法的可靠性。在本文研究中也可看到，miR-122、miR-30d、miR-29b 预测急性冠脉综合征的AUC 分别为0.959、0.966、0.936；说明其预测价值较高，若是联合诊断，有利于提高诊断确诊率，即三项联合的AUC为0.999，说明其预测价值较miR-122、miR-30d、miR-29b 单独检测高。

综上所述，miR-122、miR-30d、miR-29b 用于诊断急性冠脉综合征患者具有较高的临床价值，其表达量会随着病情的严重程度上升或下降。