黔东南州育肥猪猪瘟疫苗免疫抗体水平检测

杨先富， 杨胜红， 莫兴虎， 袁晓娟， 杨政益， 彭彩丽， 赵孝木， 吴通奎

(黔东南州动物疫病预防控制中心， 贵州 凯里 556000)

猪瘟是由黄病毒科猪瘟病毒属猪瘟病毒引起的一种急性、接触性传染，具有高度传染性和致死性[1]。猪瘟一般分为急性、慢性和亚临床性3种类型，慢性和亚临床性猪瘟统称为非典型猪瘟。急性猪瘟由强毒力猪瘟病毒感染引起，发病率和死亡率均很高。非典型猪瘟由低毒力猪瘟病毒感染引起，临床症状和病理变化表现为多样性，而且特征不明显，是目前危害我国养猪业最严重的疾病之一[2]。猪瘟在我国主要采取以疫苗免疫为主的综合防治措施，抗体检测是评价猪瘟疫苗免疫效果的主要方法，也是猪群免疫水平监测的重点。为掌握黔东南州育肥猪的猪瘟疫苗免疫效果，2020年12月至2021年1月，对黔东南州13个规模猪场和13个散养点开展了猪瘟免疫抗体检测，现将检测结果报道如下，为当地猪瘟的防控提供参考。

1材料与方法

1.1猪血清与检测试剂

育肥猪血清：采集于黔东南州的13个规模养猪场(360份)和13个散养点(358份)，共计718份。猪瘟病毒ELISA检测试剂盒：由北京纳百生物科技有限公司生产，批号：ZE0011201001。

1.2猪瘟疫苗免疫抗体检测

1) 洗涤液配置。按1∶25比例，用灭菌水稀释浓缩洗涤液至25倍。

2) 加样。取出酶标版，记录样品位置。在酶标版各孔中分别加入血清稀释液(试剂盒提供)50 μL。在适当的两孔中加入未稀释的阴性对照50 μL，在适当的两孔中加入未稀释的阳性对照50 μL，其余各孔分别加入50 μL血清样品，用封板膜密封酶标版，室温孵育120 min。

3) 洗板。弃去板孔中液体，用洗涤液300 μL洗板，重复5次，最后一次洗板后将液体彻底拍干。

4) 加酶标抗体。每孔加入酶标抗体100 μL，盖好反应板，室温孵育30 min。

5) 洗板。弃去板孔中的液体，用洗涤液300 μL洗板，重复5次，最后一次洗板后将液体彻底拍干。

6) 加底物。每孔加入底物溶液100 μL，盖好反应板，室温避光孵育10 min。

7) 终止反应。每孔加入终止液50 μL终止反应。

8) 测定吸光值。测定样品、对照在450 nm波长下的吸光值(OD450nm)。

1.3检测结果判定

阴性对照的OD450nm平均值≥0.5，阳性对照的阻断率>50%，表明抗体检测实验条件成立。待检血清的阻断率计算公式如下。

阻断率=[(阴性对照OD450nm平均值-样品OD450nm平均值)/阴性对照OD450nm平均值]×100%

阻断率≥40%，判断为阳性；阻断率≤30%，判断为阴性；阻断率在30%～40%，应在14 d后重新检测。

2结果与分析

经测定，阴性对照的OD450nm平均值为1.478，阳性对照的平均阻断率为70.23%，根据结果判定标准，此次猪瘟疫苗免疫抗体检测实验条件成立。

2.1猪瘟疫苗免疫抗体合格率

从表1看出，规模场、散养点的猪瘟疫苗免疫抗体平均合格率分别为80.28%和73.74%，规模场的猪瘟疫苗免疫抗体合格率明显高于散养点。从规模场看，13个规模场中有11个场猪瘟疫苗免疫抗体合格率达80%以上，高于国家规定的免疫群体猪瘟疫苗免疫抗体合格率(≥70%)的要求，说明大部分猪受到猪瘟疫苗免疫抗体保护，较为安全；而1号、10号场免疫合格率均为50%，低于70%，未达到国家规定的合格标准，可能是首次免疫后1月左右未加强免疫导致。

表1黔东南州规模场和散养点猪瘟疫苗免疫抗体检测结果

从散养点看，2号、3号、4号、5号、6号、7号和11号散养点猪瘟疫苗免疫抗体合格率分别为86.67%、80.00%、80.00%、80.00%、76.67%、87.50%和76.67%，高于国家规定的合格率，而1号、8号、9号、10号、12号和13号散养点的合格率分别为40.00%、50.00%、40.00%、55.55%、67.65%和52.00%，低于国家标准。原因之一是部分养殖户的防疫意识淡薄，未开展猪瘟疫苗免疫；原因之二是一些养殖户只在秋季给猪免疫1次，免疫抗体水平低，所以免疫合格率较低。

2.2阻断率

根据表1计算得规模场、散养点猪瘟疫苗免疫抗体平均阻断率分别为51.50%和40.09%，规模场猪的猪瘟免疫抗体水平明显高于散养点。抗体阻断率与抗体水平成正比，即抗体水平越高抗体阻断率也越高。从规模场看，除1号、10号场外，其余11个场的猪瘟疫苗免疫抗体平均阻断率均在50%以上，说明这些场猪瘟免疫抗体水平较高，免疫效果好；1号、10号场的平均阻断率分别为25.65%和25.13%，说明这2个场猪瘟免疫抗体水平低，近半数的猪未得到有效保护。

从散养点看，2号、3号、4号、5号、6号、7号和11号散养点猪瘟疫苗免疫抗体平均阻断率分别为59.36%、51.12%、51.36%、51.24%、48.62%、61.01%和47.65%，均高于40%，免疫效果较好；而1号、8号、9号、10号、12号和13号猪瘟疫苗免疫抗体平均阻断率分别为14.38%、25.13%、14.48%、29.73%、39.50%和27.61%，说明这6个散养点猪瘟疫苗免疫抗体水平低，感染猪瘟的风险极高。

3小结

对黔东南州13个规模猪场和13个散养点的猪瘟疫苗免疫抗体水平检测结果表明，规模养猪场中有11个场的猪瘟疫苗免疫抗体合格率在80%以上，而1号、10号场的合格率仅为50%，建议这2个场建立猪瘟疫苗免疫程序并按程序开展免疫，使其免疫抗体合格率达到国家规定的合格标准。对于散养猪，建议加强猪病防治知识宣传，增强养殖户对猪疫病的防控意识，做到应免尽免，一般仔猪在35日龄左右首次免疫，65日龄加强免疫1次，免疫保护期可达半年以上[3]。