E6/E7 mRNA检测联合液基薄层细胞学检查应用于宫颈癌早期诊断的价值

刘汉起，谭艳玲，高淑平，陈桂茹，周欣滢，袁卫维，林善群

阳春市人民医院检验中心1、病理科2、妇科3，广东 阳春 529600

宫颈癌的病死率较高，尽早诊断对于患者预后改善有积极作用。液基薄层细胞学(TCT)检查取样方便，可定期复查，图像较传统抹片更清晰，能够早期诊断宫颈癌和其癌前病变，降低宫颈癌发生率及死亡率，现已广泛用于宫颈癌的筛查[1]。但有研究发现，TCT检查容易受到主观判定的影响，有一定漏诊率[2]。既往研究认为，高危型人乳头瘤病毒病毒(HPV)持续感染和宫颈癌的发病有关[3]。HPV感染能够刺激HPVE6、E7的表达，E6/E7 mRNA能够引起细胞周围紊乱，增加恶性肿瘤发生风险[4]。E6/E7 mRNA的转录水平能够反映癌基因E6、E7情况，以评价机体HPV感染情况[5]。本研究旨在分析E6/E7 mRNA联合TCT检查在宫颈癌早期诊断中的临床价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2019年6月至2020年12月广东省阳春市人民医院妇科收治的300例高危型HPV DNA阳性患者为研究对象。纳入标准：性生活史大于3年；无盆腔相关治疗史；高危型HPV DNA阳性，均接受E6/E7 mRNA及TCT及阴道镜病理组织活检；生殖道无急慢性炎症；非妊娠、哺乳或经期妇女；排除传染性疾病和其他恶性肿瘤者。300例患者年龄30～55岁，平均(44.38±3.56)岁；孕次0～6次，平均(3.57±0.34)次；产次0～4次，平均(2.16±0.25)次；经阴道镜宫颈病理组织活检确诊慢性宫颈炎患者192例，CΙNⅠ级46例，CΙNⅡ级30例，CΙNⅢ级17例，宫颈癌15例。

1.2 方法

1.2.1 HPVE6/E7 mRNA检测 患者取膀胱结石位，暴露宫颈，用宫颈脱落细胞专用采样刷采集细胞并放置在取样瓶内。检测HPV E6/E7 mRNA表达情况，依据相关标准进行HPVE6/E7 mRNA阴性及阳性判定[6]。

1.2.2 TCT检测 患者取膀胱结石位，暴露宫颈，用宫颈脱落细胞专用采样刷采集细胞并放置在含有保存液的新柏氏细胞学测试瓶内，并进行相关检测。按照贝塞斯达系统分类法[6]对检测结果进行分类，其中低度鳞状上皮内病变、高度鳞状上皮内病变、鳞状细胞癌(SCC)为TCT检测阳性。

1.2.3 病理活检 用阴道镜采集可疑病灶组织，送至病理科活检。诊断标准根据世界卫生组织(WHO)制定的分类标准[6]，其中宫颈上皮内瘤变CΙNⅠ、CΙNⅡ、CΙNⅢ、SCC为病理活检阳性。

1.3 统计学方法 应用SPSS18.0软件进行数据统计学分析，计量资料以均数±标准差(±s)表示，计数资料比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

HPV E6/E7 mRNA诊断宫颈癌的特异度高于TCT，差异有统计学意义(P＜0.05)；TCT诊断的灵敏度高于HPV E6/E7 mRNA，差异有统计学意义(P＜0.05)，HPV E6/E7 mRNA与TCT诊断的准确率比较差异无统计学意义(P＞0.05)；HPV E6/E7 mRNA联合TCT诊断的特异度、灵敏度及准确率明显高于HPV E6/E7 mRNA、TCT单独检查，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 HPV E6/E7 mRNA、TCT单独与联合检测诊断宫颈癌的特异度、灵敏度及准确率比较(%)

3 讨论

流行病学报道，临床分期和宫颈癌患者预后有直接关系[7]，早期宫颈癌的生存率显著高于中晚期，尽早诊治是改善此类患者预后的关键[8]。

宫颈细胞学涂片检查在宫颈癌及癌前诊断中有重要作用，传统巴氏涂片的质量较差，细胞丢失率和假阴性率高，临床开展受到限制。TCT检查为目前最常用的宫颈癌细胞学检查，可减少涂片中黏液、炎症细胞及红细胞等影响，增加阅片视野清晰度，减少误诊及漏诊可能性[9]。TCT较传统巴氏涂片更为标准及严格，可提高诊断准确性。但有研究发现，CΙN及宫颈癌多为局灶性、多中心的病理变化，TCT的取材存在局限性，采集细胞量不足，从而影响TCT检查的准确性[10]。另有研究认为，TCT为人工阅片，有较强的主观性[11]。

目前研究已表明持续高危型HPV感染为宫颈癌前病变和宫颈癌发生的危险因素，但研究指出，大部分女性新发HPV感染能够在两年内自行消退，和宫颈癌的发生无密切联系[12]。HPV DNA分型检测的特异度相对较低，假阳性率高，导致过度治疗及不必要的随访。E6、E7蛋白能够参与宫颈癌的发生发展，E6、E7蛋白可加快细胞分裂，影响细胞凋亡，导致细胞永生化，从而发生宫颈癌前病变及宫颈癌[13]。E6、E7蛋白又可引起HPV发生免疫逃逸，促进细胞增殖，诱导宫颈细胞发生恶性病变。HPV E6/E7 mRNA为癌基因E6、E7转录产物，其可评价癌基因活性，有研究认为，HPV E6/E7 mRNA能够作为评价宫颈癌风险的有效指标[14]。舒小芳等[15]研究也表明，HPV E6/E7 mRNA和宫颈病变的相关性较HPV DNA更强，能够预测宫颈病变进展情况。有文献报道，HPV E6、E7能够降低机体免疫功能[16]。HPV E6/E7 mRNA阴性提示机体未HPV感染，或者HPV为初始感染，进展可能性较低。HPV E6/E7 mRNA阳性提示机体存在HPV感染，且为活跃期，HPV病毒癌基因已经发生整合，并出现转录翻译，且拷贝数越高，癌基因活性更强，宫颈癌发生风险越高[17]。本研究以阴道下活检为金标准，观察发现，TCT及HPV E6/E7mRNA单独检查的准确率与病理结果比较相对较低，和有关文献报道相符[18]。

近年来有研究报道，HPV E6/E7 mRNA联合TCT检查能够提高宫颈癌的检出率[19]。陈瑛瑛等[20]研究也发现，HPV E6/E7 mRNA联合TCT检查能够反映细胞形态改变，起到互补作用，降低宫颈病变的漏诊率，并可预测宫颈病变进展情况。本研究中，HPV E6/E7 mRNA在早期宫颈癌诊断中的特异度较TCT高，灵敏度较TCT检测低，HPV E6/E7 mRNA联合TCT检测的特异度、灵敏度及准确率显著高于单独HPV E6/E7 mRNA、TCT检测，进一步表明两种方式联合检测能够弥补单项检测存在的不足，提高宫颈癌诊断的特异度及灵敏度，为早期宫颈癌的诊断提供参考依据，并可避免假阳性所致的过度治疗。但二者联合检测的准确率与病理组织活检比较仍有差异，表明二者联合仍无法取代病理组织活检，但可作为早期宫颈癌筛查的有效手段。另有研究发现，术后E6/E7mRNA联合TCT检测在随访宫颈癌前病变和宫颈癌复发中有重要作用，对预后监测及临床随诊有较高的指导价值[21]。但本研究未对患者进行随访监测，E6/E7 mRNA、TCT在宫颈病变预后中的作用有待进一步研究。

综上所述，HPV E6/E7 mRNA联合TCT检查能够提高早期宫颈癌诊断的灵敏度和特异度。