顶空毛细管气相色谱法测定盐酸右美托咪定中残留溶剂含量*

杨园，谷亦平

(1.武汉药品医疗器械检验所，武汉 430073；2.桂林医学院公共卫生学院，桂林 541199)

盐酸右美托咪定(dexmedetomidine hydrochloride)化学名称为(+)-4-(S)-[1-(2，3-二甲基苯基)乙基]-1H-咪唑盐酸盐，是Orion pharma/Abott公司研发的镇静催眠药，2000年首次在美国上市。盐酸右美托咪定是一种新型高选择性α2-肾上腺素受体激动剂，半衰期短，主要作用于脑内负责觉醒与睡眠且α2-肾上腺素受体最密集的区域蓝斑核，产生镇静、镇痛、抗焦虑作用，降低交感神经活性，降低机体应激反应程度，并对呼吸功能影响甚微，故其较传统镇静镇痛药在临床麻醉及重症监护室(ICU)应用中具有明显优势[1-3]。不同的盐酸右美托咪定合成工艺，会引入不同的有机溶剂，分别有甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、环己烷、二氧六环及甲苯。残留溶剂又称有机挥发性杂质，可能对人体的健康造成一定危害。根据《中华人民共和国药典》2015年版[4]关于残留溶剂的相关规定，应对盐酸右美托咪定生产或纯化中使用的溶剂进行检测。关于盐酸右美托咪定中残留溶剂的检测已有文献报道[5]，但同时测定盐酸右美托咪定中多种有机溶剂残留量的文献笔者尚未见报道。笔者在本实验建立毛细管气相色谱法配以顶空进样，对盐酸右美托咪定原料药中11种有机溶剂残留量分析进行系统性研究与确认，以期为盐酸右美托咪定的质量控制提供参考。

1 仪器与试药

1.1仪器 Agilent 7890B 气相色谱仪，FID检测器(氢火焰离子化检测器)，Agilent G1888 顶空进样器，DB-624毛细管色谱柱(美国Agilent公司)；XS105电子天平(梅特勒-托利多公司，感量：0.01 mg)；CLXXXUVM2纯水机(ELGA公司)。

1.2试药 乙醚、异丙醇、二氯甲烷、1，4-二氧六环(分析纯，国药集团化学试剂有限公司，批号分别为80059618，80109218，80047318，10008918)；甲醇、乙醇、甲苯、丙酮、N，N-二甲基甲酰胺、环己烷(色谱纯，德国FISHER公司，批号分别为174486，1714869，134611，165605，1673620，106977)；四氢呋喃(色谱纯，上海星可生化有限公司，批号：41161101)；乙酸乙酯(色谱纯，美国TEDIA公司，批号：13040152)。盐酸右美托咪定(厂家提供，批号：6601604012，6601604022，6601605012)。

2 方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱为DB-624(30 m×0.32 mm，1.80 μm)毛细管柱；柱温采取程序升温，初始温度35 ℃维持10 min，以0.5 ℃ ·min-1升温至40 ℃，维持5 min，再以20 ℃ ·min-1升温至65 ℃，维持1 min，再以60 ℃ ·min-1升温至220 ℃，维持5 min；检测器为 FID，检测器温度250 ℃；进样口温度 200 ℃ ；载气为高纯氮气，分流进样，分流比10：1，流速2 mL·min-1；氢气流速30 mL·min-1；空气流速300 mL·min-1；顶空进样，平衡温度85 ℃，平衡时间30 min，进样体积：1 mL。

2.2溶液的配制

2.2.1空白溶液 精密量取N，N-二甲基甲酰胺5 mL，置50 mL量瓶，加水稀释至刻度，即得。

2.2.2对照品储备溶液 分别取甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、环己烷、二氧六环、甲苯适量，精密称定，用N，N-二甲基甲酰胺溶解并定量稀释成30 000，50 000，50 000，50 000，50 000，6 000，50 000，7 200，38 800，3 800，8 900 μg·mL-1，摇匀，作为各对照品储备溶液。

2.2.3混合对照品储备溶液和混合对照品溶液 精密量取各对照品储备溶液1.00 mL，置50 mL 量瓶，纯化水稀释至刻度，摇匀，即为混合对照品储备溶液。精密量取混合对照品储备溶液5 mL，置10 mL 量瓶，用纯化水稀释至刻度，摇匀，即为混合对照品溶液。

2.2.4供试品溶液 精密称取供试品1.0 g，置10 mL 量瓶，纯化水溶解稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3方法学验证

2.3.1系统适用性实验 按“2.2”项方法制备混合对照品溶液、供试品溶液和空白溶液，按“2.1”项色谱条件分别进样分析，色谱图见图1。色谱图中各被测物色谱峰相互间分离度均符合要求。

2.3.2标准曲线的绘制与线性范围考察 精密量取“2.2.3”项混合对照品储备溶液10.0，5.0，2.5，1.0，0.5 mL，分别置10 mL量瓶，用纯化水稀释至刻度，精密量取1.00 mL，置 10 mL顶空瓶，加盖密封，即得标准曲线溶液。按“2.1”项色谱条件测定，以标准曲线溶液浓度为横坐标，被测物峰面积为纵坐标，进行线性回归，回归方程见表1。结果表明，甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、环己烷、二氧六环和甲苯在一定浓度范围内线性关系良好。

表1 线性回归方程及相关系数Tab.1 Linear regression equation and correlation coefficient

2.3.3精密度实验 按“2.2”项方法配制混合对照品溶液，共6份，按“2.1”项色谱条件测定，计算得甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、环己烷、二氧六环和甲苯峰面积RSD分别为2.4%，1.2%，2.8%，2.2%，2.6%，2.9%，2.8%，2.9%，2.6%，2.7%，2.8%，表明所建立的色谱系统方法重复性良好。

1.甲醇；2.乙醇；3.乙醚；4.丙酮；5.异丙醇；6.二氯甲烷；7.乙酸乙酯；8.四氢呋喃；9.环己烷；10.二氧六环；11.甲苯。图1 对照品溶液(A)、空白溶剂(B)与样品溶液(C)气相色谱图1.methanol；2.ethanol；3.diethyl ether；4.acetone；5.isopropyl alcohol；6.dichloromethane；7.acetidin；8.tetrahydrofuran；9.cyclohexane；10.dioxane；11.toluene.Fig.1 Gas chromatograms of reference solution(A)，blank solvent(B) and sample solution (C)

2.3.4加样回收率实验 取盐酸右美托咪定 (批号：6601604012) 约1.0 g，共2份，精密称定。按“2.2”项方法配制供试品溶液，按“2.1”项色谱条件进行分析，外标法以峰面积计算供试品中各溶剂的本底残留量。取同批次盐酸右美托咪定1.0 g，共9份，精密称定，置10 mL量瓶，其中3份精密加入“2.2.3”项混合对照品储备溶液2.50 mL，3份精密加入混合对照品储备溶液5.00 mL，另3份精密加入混合对照品储备溶液7.50 mL，用纯化水溶解并稀释至刻度，摇匀，得相当于各残留溶剂质量分数分别为50%，100%，150%水平的供试品溶液。按“2.1”项色谱条件进行分析，外标法以峰面积计算9份加样盐酸右美托咪定样品中各溶剂的总残留量，扣除供试品中各溶剂的本底残留量，根据加入量计算回收率，结果见表2。结果符合残留溶剂测定准确度的要求。

表2 盐酸右美托咪定残留溶剂回收率实验结果Tab.2 Results of recovery test of residue organic solvents in dexmedetomidine hydrochloride %

2.3.5检测限和定量限考察 取混合对照品溶液，逐级稀释，分别进样，以信噪比约为3计算检测限，以信噪比约为10计算定量限。结果甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、环己烷、二氧六环和甲苯的检测限分别为 0.34，0.31，0.027，0.12，0.23，0.13，0.14，0.15，0.20，2.4，0.081 μg·mL-1，相当于样品的检测限分别为3.4×10-7，3.1×10-7，0.27×10-7，1.2×10-7，2.3×10-7，1.3×10-7，1.4×10-7，1.5×10-7，2.0×10-7，24×10-7，0.81×10-7g·g-1；甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、环己烷、二氧六环和甲苯的定量限分别为1.13，1.05，0.09，0.39，0.78，0.43，0.46，0.48，0.68，8.00，0.27 μg·mL-1，相当于样品定量限分别为11×10-7，10×10-7，0.9×10-7，3.9×10-7，7.8×10-7，4.3×10-7，4.6×10-7，4.8×10-7，6.8×10-7，8×10-6，2.7×10-7g·g-1。

2.3.6稳定性考察 按“2.2”项方法配制混合对照品溶液6份，分别于0，2，4，6，8，10 h 取上述6份溶液，按“2.1”项色谱条件测定，记录色谱峰面积。结果甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、环己烷、二氧六环和甲苯RSD分别为2.2%，1.5%，3.4%，2.5%，2.1%，3.1%，2.5%，2.7%，3.5%，2.6%，2.2%。结果表明，甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、环己烷、二氧六环和甲苯在该方法下10 h内稳定。

2.4样品测定 分别精密称取3批样品各1.0 g，按“2.2.4”项方法制备，按“2.1”项色谱条件检测，结果见表3。3批盐酸右美托咪定中有机溶剂残留量均符合《中华人民共和国药典》2015年版规定的限度。

表3 样品检测结果Tab.3 Test results of samples %，n=2

3 讨论

3.1进样方式选择 使用气相色谱法测定样品中有机溶剂残留量有直接进样法和顶空进样法[6-8]。通常情况下，低沸点溶剂建议采用顶空进样法，高沸点溶剂可以采用溶液直接进样法；但考虑到有机溶剂残留量检查时通常要同时检测多种溶剂，为操作的可行性和简便性，建议尽量采用同样的检测条件控制尽量多种类的残留溶剂。故笔者在本实验中选择顶空进样法测定盐酸右美托咪定中11种有机溶剂残留量。

3.2溶剂选择 盐酸右美托咪定是咪唑盐酸盐，极易溶于水，并且在选定的色谱条件下，各溶剂残留均能达到良好的分离且不干扰样品的测定，故选用纯化水为溶剂。

3.3色谱柱选择 盐酸右美托咪定中需检查有机溶剂种类较多，参考常见的有机溶剂检查[9-12]，结合本品中需检测的11种有机溶剂，选择最常用中等极性毛细管柱DB-624作为分析的色谱柱。

3.4顶空条件的选择 在顶空气相分析中，各组分的相平衡会受到温度的影响。在平衡时间设定为30 min条件下，测定11种有机溶剂在顶空平衡温度为80，85和90 ℃时响应值。结果表明，随着平衡温度增加，各有机溶剂组分响应也逐渐增加，考虑到组分热稳定性等因素最终选择85 ℃为顶空平衡温度。另设定平衡温度为85 ℃，测定有机溶剂在平衡时间为20，30，40 和50 min 时响应值。结果表明，各被测组分在30 min 后，响应值趋于稳定，故选择30 min为顶空平衡时间。

笔者在本实验所建立的残留溶剂检测方法简便、准确，能够满足实际样品检测的需要，可以为盐酸右美托咪定残留溶剂的药典标准制定提供依据，并为盐酸右美托咪定产品残留溶剂检测项目提供技术参考。