无偿献血者的乳糜血浆对抗-HCV 检测影响研究

张杰嫦，林雪珍，刘运保，虢娟，邓凯航，赖艳娥，喻红玲，谢冬梅，黄勇华，张松英，廖丽梅，龚嘉聪，梁伟文

（清远市中心血站，广东 清远 511518 ）

0 引言

采供血机构的质量目标就是为临床提供安全优质的血液。而对无偿献血者血液筛查项目之一是抗-HCV 检测，ELISA 具有可靠性、敏感性、特异性、操作简便的特点，故在当前医学领域中得到了广泛应用。但ELISA 检测对象要求空腹抽血，标本不能有乳糜，而无偿献血者一般都在餐后随机献血，不可避免采集到不同程度的乳糜血液,国内有文献报道乳糜标本对ELISA 实验有影响[1]，但对无偿献血者乳糜血液的检测报道却少见，本文就乳糜血浆不同程度对抗-HCV 检测的影响进行探讨。

1 资料与方法

1.1 一般资料

检测无偿献血者血液，分离血浆，收集血浆标本320 袋，其中无乳糜血浆（乳糜指数≤1）40 袋，不同乳糜程度血浆280 袋（乳糜指数2、3、4、5、6、8 及＞8 各40 袋）。无乳糜的抗-HCV 阳性血液备用。所有实验用血浆均经病毒灭活处理。

1.2 研究方法

1.2.1 试剂与仪器

抗-HCV 试剂（北京万泰生物药业股份有限公司，批号C20180616），SEPAMATIC-SL(III)全自动血液成分分离机，BSSD-III-01 速冻机，Xantus 150 全自动加样系统，BEPIII 全自动酶联免疫分析系统(德国西门子公司)，旋涡混合器（国产），移动式乳糜测定仪(自主研发)，仪器经检定合格。

1.2.2 方法

在乳糜血浆中加入定量的抗-HCV 阳性血液，通过不同检测时间，对不同乳糜指数血浆检测，对影响质量因素进行分析。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测抗-HCV。具体操作按照产品说明书严格进行。

1.2.2.1 血浆乳糜指数检测

采用移动式乳糜测定仪测定乳糜指数，并与稀释法[2]比较取得一致结果，将乳糜指数分为≤1、2、3、4、5、6、8 及＞8，选取乳糜指数为≤1、2、3、4、5、6、8 及＞8 备用。

1.2.2.2 抗-HCV 阳性血液制备

选取高浓度抗-HCV 阳性无乳糜（指数≤1）血浆，经过稀释，进行预实验，使测定管的检测值S/CO 在弱阳性或中等阳性范围，取稀释的TP-Ab 阳性血液作为实验用。本实验选取的稀释后阳性血浆S/CO=50.473。

1.2.2.3 抗-HCV 检测

取乳糜指数分别为≤1、2、3、4、5、6、8 及＞8 血浆各40 份，每管4mL 血浆，加入200μL 抗-HCV阳性血清，经1000g-1498g 离心20min，分层清晰，取无或少乳糜层的中下层血浆检测抗-HCV。

1.2.2.4 不同时间检测抗-HCV

测定后样本，放置4℃，分别于第3 天、第5 天、第7 天、第10 天检测抗-HCV。

1.3 统计学方法

全部数据使用SPSS Statistics 17.0 软件进行汇总、编辑、计算和显著性归纳。

2 结果

2.1 乳糜血浆抗-HCV 检测结果

对乳糜指数分别为≤1、2、3、4、5、6、8 及＞8 血浆进行抗-HCV 检测，根据检测值，计算X=S/CO,结果以表示。随乳糜程度增加，检测下降，与无乳糜血浆（乳糜指数≤1）比较，检测结果均无统计学意义（P＞0.05），结果分析如表1。

表1 不同程度乳糜血浆抗-HCV 结果分析

2.2 不同时间检测乳糜血浆抗-HCV 结果

取乳糜指数分别为≤1、2、3、4、5、6、8 及＞8 血浆，放置4℃，分别于时间第1d、第3d、第5d、第7d、第10d，按离心血浆检测抗-HCV。结果显示：放置时间越长，检测结果升高：第1d 与第3d和第5d 的检测结果无统计学意义（P＞0.05），第7d 以上，各指数抗HCV 结果分析，见表2。

表2 不同时间检测乳糜血浆抗-HCV 结果分析（n=20，）

表2 不同时间检测乳糜血浆抗-HCV 结果分析（n=20，）

注：*P＜0.05

3 讨论

无偿献血者都是在餐后随机捐献血液,采集乳糜血液的几率更高。干扰更明显，故对乳糜血液必须进行评估和检测，才能更好的确保血液的安全性和血液的利用率。不同时间段献血,乳糜血发生率间显著性强[3]，尤其是12:01-13:00、13:01-14:00、14:01-15:00 时间段献血者乳糜血发生率显著高于其他时段，差异均有统计学意义（P＜0.01）[4]。分析原因为午后时段献血者多为刚进餐完毕者，而午餐是一日之内主要进食时间，进食种类较为丰富，高脂肪食物进食量多，使得献血者血脂含量上升，乳糜血报废率增加[5]。周旭[6]对8212 例献血者献血两餐饮食情况分析显示献血前两餐素食可有效降低乳糜血发生率，且患者献血反应少[7]。献血次数：献血次数也是影响乳糜血发生率的主要原因之一。本研究显示，随着献血次数增加，献血人群乳糜血发生率明显下降。

献血者体内乳糜成分采用自主研制的移动式乳糜测定仪测定乳糜指数，对不同程度乳糜血浆的成分血进行抗-HCV 的检测，随乳糜指数增加，检测结果下降，不同指数乳糜血浆其结果无差别：乳糜指数分别为2、3、4、5、6、8 及＞8 与无乳糜指数（≤1）检测结果比较，P均＞0.05，无统计学意义。乳糜程度对实验干扰不大，但随乳糜程度增加，血浆中乳糜微粒形成乳糜层，干扰洗板，导致本底显色加强，还会导致总加样量的误差[8-9]，乳糜微粒对酶免疫检测的影响主要是由于乳糜微粒体积大、比重轻,放置一段时间后会在血液上层形成不同厚度的乳糜层,酶免疫仪器检测时是根据由上至下液体高度进行加样。若乳糜层较厚会减少血清加入量,从而使检测结果发生偏差,同时乳糜层有可能覆盖在游离酶标记物、结合酶标记物上,干扰洗板,造成显色反应加强[6]乳糜血液上层放置时间越长,乳糜程度越高,其OD 值与正常血液偏差程度越大4 小时内,中层和下层液体的OD 值与正常血液比较均差异无统计学意义(P＞0.05)，同时乳糜程度越轻，中层和下层液体的OD 值与正常血液偏差越小，结果提示乳糜血液上层容易受到影响，而中层和下层的影响较小[9]。因此，加入乳糜血浆而减少了血清的加样量，使检测结果偏低，变异系数偏大。

不同乳糜指数血浆在不同放置时间检测抗-HCV，放置时间越长，检测结果升高，第1d 与第3d 和第5d 的检测结果比较，P＞0.05，差异无统计学意义，第5d 内抗-HCV 检测结果对乳糜血液质量无影响，第7d 以上，各指数血浆检测结果差异不同。放置时间延长增加检测的阳性率，为防止因检测结果升高，增加血液报废，乳糜血浆应在5d 内检测完毕。人体内乳糜血常发生在进餐后。大部分献血者血脂成分以外源性三酰甘油(TG)增高为主,血浆呈乳白色浑浊状献血者体内，非特异性的与表面活性剂上的非极性基团结合，从而竞争消耗表面活性剂含量，在CM 浓度与丙肝病毒含量相差悬殊的情况下，使作用于HCV 的表面活性剂含量减少[10],从而干扰HCV 检测使检测结果发生误差，导致病人输血后存在风险。另乳糜血发生还与献血者性别、年龄、BMI、职业、献血时间及献血次数等有关[11]，脂肪含量高的食物或者一些药物的服用，也会影响到血液标本的合规性[12]，在实际工作中，血液标本容易受到多方面因素的影响，因此需要采取措施进行提示检验结果准确度[13]为了用血的安全，首先应强化无偿献血宣传力度,普及献血知识,将献血注意事项制作成宣传手册发放;对于前来献血个体,体检医生应详细询问其日常饮食结构,计算其BMI,对长期饮食油腻、肥胖和严重肥胖者,则在采集血液之前进行乳糜血检测,合格者方可继续献血行为；同时询问其献血前饮食状况，对近期进食过油腻食品或饮酒者，则通过温和的语言告知其不适于献血原因，动员其延期献血，献血前积极合理筛查可有效降低街头献血中乳糜血报废率[14]。