维生素A和维生素K3对产蛋后期蛋鸡生产性能、蛋品质、肝脏指数和脂质代谢的影响

习 羽 方璧君 徐晶云 赵 迪 郭双双 张正帆 丁斌鹰

(武汉轻工大学动物营养与饲料科学湖北省重点实验室，武汉 430023)

维生素能调节家禽新陈代谢，改变肠道菌群，提高生产性能，维生素缺乏会引起脂肪肝和疲劳症等疾病[1]。维生素A能维持蛋鸡视觉功能，提高免疫力、产蛋率、料蛋比和孵化率[2-3]。维生素K能够促进血液凝固和血清骨钙素合成，加快骨矿化，降低血清中钙、磷含量[4-5]。维生素A和维生素K与动物脂质代谢也密切相关，能抑制脂肪合成，促进脂肪动员和脂肪酸氧化分解[6-7]。然而，大剂量同时添加维生素A和维生素K会抑制肉鸡生长，减少骨钙素合成，延长骨矿化和凝血时间，降低机体凝血能力[5,8]。老龄蛋鸡因抗氧化能力减弱和免疫系统衰退，导致产蛋性能下降和蛋品质降低，进而对维生素需要量提高[1,9]。NRC(1994)维生素推荐量已不能完全满足现代蛋鸡生产需要[10]。因此，本试验通过在饲粮中添加不同水平的维生素A和维生素K3，探究两者对产蛋后期蛋鸡生产性能、蛋品质、肝脏指数和脂质代谢的影响及其交互作用，旨在为老龄蛋鸡生产上的维生素应用方案提供一定数据支持。

1 材料与方法

1.1 试验设计

试验选取1 080羽88周龄罗曼粉蛋鸡，采用3×3因子试验设计，随机分成9个处理，每个处理8个重复，每个重复15只鸡。试验开始前，用玉米-豆粕型基础饲粮预饲2周，调整各组产蛋率一致，正试期8周(90～97周龄)。正试期饲粮维生素A添加水平分别为0、7 000和14 000 IU/kg，维生素K3添加水平分别为0、2.0和4.0 mg/kg。

1.2 基础饲粮

试验采用玉米-豆粕型基础饲粮，参照《罗曼蛋鸡饲养管理手册》产蛋后期营养需要量配制，基础饲粮组成及营养水平见表1。基础饲粮维生素A含量为1 320 IU/kg，维生素K3含量为0.6 mg/kg。除维生素A和维生素K3按照试验设计额外添加，其他营养物质均满足或超过蛋鸡营养需要，各组均以粉料形式饲喂。

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)

续表1项目 Items含量 Content赖氨酸 Lys0.74蛋氨酸+半胱氨酸 Met+Cys0.61苏氨酸 Thr0.49

1.3 饲养管理

养殖试验在湖北省荷香水美蕲春广源养鸡场进行。采用半开放式3层阶梯式笼养，为避免换料应激，预试期第2周采用基础饲粮和试验饲粮以1∶1、1∶2配比过度1周，第3周饲喂试验饲粮。正式试验开始前，各组的产蛋率无显著差异(P>0.05)。试验期间采用定量饲喂。蛋鸡采用乳头式饮水器饮水，鸡舍光照时间为16 h，相对湿度为50%～60%，温度为(19±1) ℃，按照常规程序免疫，定期进行消毒，保持鸡舍环境卫生，每日观察和记录鸡群健康状况。

1.4 样品采集与处理

试验期间，每天准确记录各重复的采食量，并统计蛋鸡每天死淘数、产蛋数、蛋重和不合格蛋数。试验第4周和第8周末，每重复各选5枚样蛋，共360枚，做好标记，送至实验室，进行蛋品质检测。

试验第4周和第8周末，蛋鸡在前1天晚上空腹处理，于次日07：00采血，每个重复随机选取1只鸡，翅下静脉采血5 mL，低温送至实验室，在3 000 r/min、4 ℃条件下离心10 min，取上清分装于干净的EP管中，-20 ℃冷冻储存，用于血清生化指标检测。第8周末记录蛋鸡空腹体重后进行屠宰取样，颈动脉放血致死后，使用无菌剪刀和镊子，打开腹腔，完整剥离腹脂，剪取肝脏进行称重，取部分肝脏置于液氮中速冻，转至-80 ℃冰箱中冷冻保存，用于脂质代谢相关指标检测。

1.5 检测指标与方法

1.5.1 肝脏指数和腹脂指数

肝脏指数和腹脂指数的计算公式如下：

肝脏指数(g/kg)=1 000×肝脏重(g)/
活体重(kg)；
腹脂指数(g/kg)=1 000×腹脂重(g)/
活体重(kg)。

1.5.2 血清生化指标的检测

使用全自动生化分析仪(日立HITEC-7100)测定血清中总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、极低密度脂蛋白(VLDL)含量，使用南京建成生物工程研究所试剂盒测定血清甘油三酯(TG)含量。

1.5.3 肝脏TC和TG含量的检测

肝脏样品按照1∶9(g∶mL)比例加入生理盐水，4 ℃、3 000 r/min离心10 min，制成10%匀浆液，测定匀浆液的蛋白质含量，试验结果以蛋白质含量为基础计算。肝脏TC和TG含量使用南京建成生物工程研究所试剂盒测定。

1.5.4 肝脏脂质代谢相关基因的检测

表2 检测基因的引物序列

1.6 数据统计与分析

试验数据采用SPSS 21.0统计软件进行双因素方差分析(two-way ANOVA)，当组间差异显著时，采用Duncan氏法进行多重比较。P<0.05表示差异显著，0.05≤P<0.10表示有显著趋势。试验结果用平均值和标准差表示。

2 结 果

2.1 维生素A和维生素K3对产蛋后期蛋鸡生产性能和蛋品质的影响

整个试验期间，维生素A和维生素K3对产蛋后期蛋鸡采食量[(107.7±3.9) g]、产蛋率[(85.95±3.29)%]、料蛋比(1.90±0.06)、蛋重[(65.92±1.28)g]、破蛋率[(1.21±0.79)%]、蛋白高度[(5.06±1.53) mm]、哈氏单位(63.60±15.49)、蛋黄颜色(10.54±0.59)、蛋黄重量[(18.68±1.47) g]均无显著影响(P>0.05)，括号中数据为蛋鸡生产性能和蛋品质的平均值。

2.2 维生素A和维生素K3对产蛋后期蛋鸡肝脏指数和腹脂指数的影响

由表3可见，与添加0 IU/kg维生素A相比，添加7 000和14 000 IU/kg维生素A显著降低了肝脏指数(P<0.05)，分别下降了9.1%和18.4%；维生素A和维生素K3对肝脏指数存在显著交互作用(P<0.05)。维生素A和维生素K3对腹脂指数无显著影响(P>0.05)，且二者无显著交互作用(P>0.05)。

表3 维生素A和维生素K3对产蛋后期蛋鸡肝脏指数和腹脂指数的影响

2.3 维生素A和维生素K3对血清脂质代谢相关生化指标的影响

由表4可见，与添加0 IU/kg维生素A相比，添加7 000和14 000 IU/kg维生素A显著增加了第4周血清HDL和VLDL含量(P<0.05)。随着维生素A添加水平的提高，第8周血清TG含量显著降低(P<0.05)。与添加0 mg/kg维生素K3相比，添加4.0 mg/kg维生素K3显著降低了第8周血清TG含量(P<0.05)，且维生素A和维生素K3存在显著交互作用(P<0.05)，以14 000 IU/kg维生素A和0 mg/kg维生素K3组血清TG含量最低。维生素A和维生素K3对提高第8周血清HDL含量有交互作用的趋势(P=0.056)，以14 000 IU/kg维生素A和2.0 mg/kg维生素K3组血清HDL含量最高。维生素K3对血清TC、HDL、VLDL含量无显著影响(P>0.05)。

表4 维生素A和维生素K3对产蛋后期蛋鸡血清脂质代谢相关生化指标的影响

2.4 维生素A和维生素K3对肝脏脂质代谢相关生化指标的影响

由表5可知，与添加0 IU/kg维生素A相比，添加7 000 IU/kg维生素A显著提高了肝脏TC含量(P<0.05)，添加14 000 IU/kg维生素A显著减低了肝脏TG含量(P<0.05)。维生素K3对肝脏TC和TG含量无显著影响(P>0.05)，维生素A和维生素K3对肝脏TC和TG含量无显著交互作用(P>0.05)。

表5 维生素A和维生素K3对产蛋后期蛋鸡肝脏脂质代谢相关生化指标的影响

2.5 维生素A和维生素K3对肝脏脂质代谢相关基因表达的影响

由表6可知，与添加0 IU/kg维生素A相比，添加14 000 IU/kg维生素A显著下调了肝脏PPARγ、FASmRNA相对表达量(P<0.05)，显著上调了肝脏SGLT1 mRNA相对表达量(P<0.05)。随维生素A添加水平上升，肝脏ACC、APoB、VTGⅡ mRNA相对表达量有下调的趋势(P=0.054、P=0.085、P=0.067)。维生素K3对肝脏脂质代谢相关基因mRNA相对表达量无显著影响(P>0.05)，维生素A和维生素K3对肝脏脂质代谢相关基因mRNA相对表达量无显著交互作用(P>0.05)。

表6 维生素A和维生素K3对产蛋后期蛋鸡肝脏脂质代谢相关基因表达的影响

3 讨 论

老龄蛋鸡面临免疫抑制、肠道功能紊乱、生产性能和蛋品质下降等问题，严重影响经济效益。脂溶性维生素对家禽生产性能和蛋品质的报道较多，但结果并不统一。Yuan等[10]报道，30 000 IU/kg维生素A对肉种鸡产蛋性能无显著影响，但Gan等[1]研究发现，饲粮中添加2倍推荐量的脂溶性维生素能提高85周龄蛋鸡产蛋率，但对蛋品质无显著影响。Fernandes等[11]研究表明，2、8、32 mg/kg维生素K对67周龄蛋鸡料蛋比、蛋重和产蛋率均有改善作用。NRC(1994)蛋鸡维生素A和维生素K3推荐添加水平分别为1 500～4 000 IU/kg和0.5～1.0 mg/kg，说明1500 IU/kg维生素A和0.5 mg/kg维生素K3可能就能满足老龄蛋鸡产蛋营养需要。本试验结果表明，饲粮中添加4～8倍维生素A和维生素K3对90～97周龄蛋鸡生产性能和蛋品质无显著影响。蛋鸡体内维生素代谢效率随周龄增加而下降，这可能是造成结果不一致的主要原因[12]。

肝脏指数能够体现蛋鸡肝脏功能、健康状态等情况，产蛋后期蛋鸡肝脏指数过高会引起脂肪肝，危害蛋鸡健康[13]。王利华[14]研究指出，饲粮中添加15 000 IU/kg维生素A能显著提高47日龄肉鸡肝脏指数。董以雷等[15]研究发现，饲粮维生素A添加水平从1 000 IU/kg增加到18 000 IU/kg，对21和42日龄肉鸡肝脏指数无显著影响。本研究中，饲粮添加7 000和14 000 IU/kg维生素A显著降低了肝脏指数。这可能是由于肉鸡和蛋鸡维生素A需要量不同，肉鸡对饲粮高水平维生素A更耐受导致。

肝脏是TC和TG合成的主要场所，近年发现，维生素A可抑制动物的脂肪合成。Ayuso等[16]研究表明，饲粮中添加维生素A能降低猪体内脂肪含量。研究发现，大鼠饲粮中添加维生素A能够降低肝脏TC含量[17]。本研究中，饲粮添加14 000 IU/kg维生素A显著提高了蛋鸡血清HDL、VLDL含量，降低了肝脏TG含量，添加4.0 mg/kg维生素K3和14 000 IU/kg维生素A降低了血清TG含量，具有降低血脂的效果。与本试验相反，临床试验证明过量摄入维生素A会提高人血清TG和低密度脂蛋白(LDL)含量[18]。Ahmad等[19]研究发现，饲粮添加3 000 IU/kg维生素A对40周龄蛋鸡血清HDL、VLDL和TG含量没有显著影响。本试验结果表明，高剂量维生素A和维生素K3有利于防止产蛋后期蛋鸡脂肪肝的产生，这可能与产蛋后期对维生素A需要量增加引起[20-21]。

肝脏PPARγ和FAS对脂肪合成有关键作用[22-26]。研究发现，饲粮添加维生素A能够有效下调肉鸡FAS和肉牛肝脏PPARγmRNA相对表达量[3,27]。本研究中，饲粮添加14 000 IU/kg维生素A显著降低了肝脏PPARγ和FASmRNA相对表达量，有助于抑制脂质代谢，减少肝脏脂肪生成，但维生素A调控肝脏PPARγmRNA相对表达量的机制尚不清楚。

SGLT1参与机体葡萄糖吸收，对维持血糖平衡有重要作用，当SGLT1 mRNA相对表达量升高时会导致肝脏血糖水平升高[28-29]。本试验中，饲粮添加14 000 IU/kg维生素A可增加蛋鸡肝脏SGLT1 mRNA相对表达量。目前研究维生素A和维生素K对肝脏SGLT1表达影响的研究较少。Tomimatsu等[30]发现棕榈酸视黄酯对大鼠小肠刷状缘膜SGLT1表达无显著影响，但有利于钠离子(Na+)依赖型D-葡萄糖的转运。因此，本研究中肝脏SGLT1 mRNA相对表达量升高可能和维生素A增加了产蛋后期蛋鸡体内SGLT1的周转有关。

4 结 论

在本试验条件下，添加14 000 IU/kg维生素A和4.0 mg/kg维生素K3不影响产蛋后期蛋鸡生产性能和蛋品质，但可以降低肝脏指数，调控肝脏脂质代谢相关基因表达，改善脂质代谢，对防止产蛋后期脂肪肝具有一定效果。