食用菌种植中污染菌青霉的拮抗菌筛选

曹俊

摘要：随着人们生活水平的不断提高，对食用菌的需求不断增长，食用菌产业整体规模迅速扩大。但种植食用菌需要必备营养丰富的基质，一旦周围的空间潮湿，病菌容易繁殖。在这种情况下，会导致食用菌的总产能减少，还很有可能没有利润。食用菌培养过程中，通过对污染菌-青霉菌的鉴定，同时强调防治的重要性，与筛选的灭菌试剂进行对比。由防治测验可以得到：选出来的拮抗菌取得了最好的效果。

关键词：食用菌种植;污染菌青霉;拮抗菌筛选

近年来，我国食用菌产业发展迅速。根据中国食用菌协会提供的资料：在1996年我国食用菌商业生产总量达到350万吨，2001年达到560万吨，2004年达到900万吨左右。在食用菌生产中，由于基质中营养成分丰富，空间相对潮湿，容易造成病原菌污染，使食用菌品质变差，减产。目前，国内外食用菌生产污染防治的主要方法是高温杀菌和使用杀菌剂（主要是化学制剂）。化学制剂一般都含有残留药物，这直接影响食用菌的质量，带来了直接的经济损失。在分析拮抗关系后，选择了拮抗细菌，寻找更合适的污染解決方案。只有这样，才能提高食用菌产能，探索种植应用的新途径。

1.选取测试原材

通过筛选出受污染的菌体，并从土壤中分离20株含有放线菌的菌株。选取了香菇、杏鲍菇及金针菇特有的菌袋，选择农贸市场购买的甲醛、阿维菌素和百菌清作为消毒剂。培养基设置为PDA特定规格并用于测试。

2.解析筛选流程

2.1选择拮抗性抗菌种

利用平板进行稀释，选择单菌落进行培养，便于后续的鉴定。存活的菌株被调整为斜面，设置直接堆砌，筛选和辨别了周围中所设置的抑菌环境。调制各种具有污染性质特性的悬浮液，将其均匀铺放在平板之上，把各种菌类均匀添加到平板，并在恒温下继续进行培养。随时检查标记的抑菌区，选择合适的抑菌菌株，通过平板培养确认其中存在的菌落群和聚集的形式，通过显微镜分析鉴定各种类型的有害菌株和微观组织。在经过生化试验后，确认其形状并对其进行测量，通过色谱分析得到明确的菌株特性。

2.2调制可用的制剂

筛选10%的调和混合物制成的液体，置于培养基上，150转每分钟进行震荡。每隔12小时采集一次最终的样品。需要先过滤上侧发酵液，离心5分钟后再去除发酵中所有积累细菌并储存上侧澄清液。用青霉菌法将制备的原液均匀填涂到平板之上，打孔而备后使用，然后将其放在一边，设置不同的培育时间，将准备好的原液上清进行分拣，放入一个小孔中，恒温地培育。通过观察受抑制部位的变化来判断最合理的发酵时期。进行了发酵步骤之后，选择了上清液来比较百菌清、甲醛和阿维菌素抗菌作用效果。制备带有细菌的平板，经由恒温进行培养。

2.3后续试验的过程

经过60小时，选择了发酵细菌并在其中添加适量的药物。针对香菇和其他类别，检查食用菌袋状况。对于透明发酵液体，通过细分原液在顶部调节浓度。从每一批中选取出菌袋，并在其中添加了喷雾液和注射剂。涂抹后，在原先的破坏区域进行粘贴。在菌类培养后期，统计分析可以获得病斑或者污染性疾病特殊菌袋的数量。

3.解析测验结果

3.1分离污染菌类

在固定板上，可以培养出单个菌落，它们看起来是圆形的。菌类具有更致密的组织并且通常是感觉毡状的。表层突出粉末状态，其呈青蓝色。通过显微镜可得：菌丝体附带着孢子，使其具有与青霉菌特征一致的扫帚形状，由此可以看出，这部分被青霉菌污染了。

3.2田间获取的测验数值

针对食用菌，细分具有污染性质的不同菌袋，分离成不同浓度。添加制剂后，附着在菌袋上的病斑被适当抑制。通过培养食用菌，可以在最短的时间内抑制病斑的快速生长，消除菌类污染。在各种制剂内，原液抑菌能力最好，消除了细菌袋污染，杀菌率超过77%。经过一段时间的测试，发现百菌清杀菌力最强，其次是甲醛和阿维菌素。在杀菌前期阶段，显示出明确有效的效果，但是难以持久，应当需要继续改进。

4.归纳可得结论

供应测试筛选了太多的菌株，消耗工作过大。在这种情况下，通常选择堆砌的方法。筛选低比例的菌株并填涂在悬浮板上。随后培育后，再继续检查抑菌圈。留存抑菌这样的菌株，然后改变初始液体浓度，重新筛选，即可以获得最佳抗菌株。从定性选择的角度来看，直接堆砌不失为最优途径。

通过诊断和鉴别的步骤，确认出拮抗菌所表达的抑菌状态。过滤发酵液，去除上清离心细胞。这样的测试结果能够看到：抗菌作用效果较为显著，而且其抗菌作用的持续期非常长。这就是说：菌体的代谢物能够有效地抑菌，避免了实际应用过程中的一些后续环境污染。随着药物使用时间的增加和推移，药液浓度逐渐增加，60小时后达到抗菌作用效果最好。因此，其最佳工作时间一般应该设置在60小时左右。

目前，人们对环境保护意识与日俱增，需要去探索无公害的新型农药并应??用于田间。通过现场试验，选择拮抗剂以便于确认安全性，并且具有优异的抗菌效果。在未来的研究中应侧重于辨别可从代谢中获得的产物，探索抗菌机制，并扩大当前的现场试验范围。

参考文献

[1]钟欣，食用菌产业如何面对未来[J]，1997.农民日报.10，6（3）.

[2]我国食用菌产量统计[J].中国食用菌信息2002，（3）.3-5.

[3]李宝聚，阐琳娜等.食用菌生产中主要竞争性病害的种类及其防控技术[J].中国蔬菜，2005，（12）：61-62