善清金花茶对高脂血症小鼠的降脂作用

秦健峰，苏梓霞,2，郝二伟，蓝滴,2，陈锋，孙燕莲，韦玮，杜正彩，侯小涛,2，邓家刚

（1.广西中医药大学科学实验中心，广西中药药效研究重点实验室，农作物废弃物功能成分研究协同创新中心，广西南宁 530200）（2.广西中医药大学药学院，广西南宁 530200）

随着生活质量和饮食水平的不断提高，人们不自觉地摄入更多高热量、高脂、高糖的食品，导致了患高脂血症、糖尿病、高血压等疾病的概率也越来越高。高脂血症（hyperlipidemia，HLP），是一种由于体内脂质代谢异常紊乱引起的病症，主要表现为血浆中的胆固醇（TC）过高和（或）甘油三酯（TG）过高或低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）过高或高密度脂蛋白胆固醇水平过低（HDL-C）的各种血脂成分异常[1]，是诱发动脉粥样硬化、心血管疾病及脂肪肝病的重要病因[2,3]。高脂血症已经成为冠心病的重要致病因素，逐渐成为严重危害全人类身体健康的夺命凶手[4,5]。

防治高脂血症的主要措施有药物治疗、运动以及饮食控制等，目前有效治疗高脂血症的药物主要有他汀类和贝特类药物，但这些药物长期使用后会有许多不良反应。因此副作用小且资源丰富的中药在治疗高脂血症方面极具优势。其中以中药为原料制备的降脂保健茶具有预防动脉硬化、调节人体新陈代谢、降低血压血脂、保护肝脏等保健作用，且其采用冲饮的方式进行服用，大大提高了用药依从性，更易被消费者所接受，因此降脂保健茶的开发前景更为广阔[6,7]。

金花茶叶是山茶科山茶属植物金花茶Camellia nitidissima（Merrill）Sealy的叶子，金花茶被美誉为“植物界的大熊猫”、“茶族皇后”，为广西壮族传统药用植物，2010年被国家卫生部列入新资源食品名录[8]。金花茶叶中的主要活性成分有茶多酚、黄酮类、多糖、皂苷等，这些活性成分具有抗肿瘤、抗氧化、降血脂以及防止动脉粥样硬化等作用[9,10]，对金花茶叶进行制茶适宜性的实验研究，结果表明金花茶叶的茶多酚/氨基酸比值小，是一种制作保健茶的好原料。罗汉果为葫芦科多年生藤本植物罗汉果（Siraitia grosvenoriiSwingle）的果实，是广西道地药材。罗汉果性凉、味甘，归肺、大肠经，具有清肺利咽，化痰止咳，润肠通便、保肝、降血糖、降血脂的功效[11-15]。

市售产品主要是以金花茶叶或罗汉果为单一原料所制备，以金花茶叶和罗汉果等原料组合制成的调节血脂的复方产品极少。本研究以金花茶叶和罗汉果组合制备的复方产品善清金花茶为研究对象，采用高脂血症小鼠模型，对善清金花茶调节血脂水平和护肝作用进行了探究，为善清金花茶的开发和应用提供了科学依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物

C57BL/6雄性小鼠，40只，体重20±2 g，购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，许可证号：SCXK（湘）2016-0002。小鼠在SPF级动物房进行分笼饲养，自由进食和饮水，温度20~25 ℃，相对湿度50%~60%。普通维持饲料适应性喂养1周后按体重随机分组后开始实验。

1.2 实验药品与试剂

善清金花茶，广西中药药效研究重点实验室研制；辛伐他汀，浙江京新药业股份有限公司；总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、超氧化物歧化酶、丙二醛测定试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所；纯净水，娃哈哈有限公司。

普通饲料，成分为玉米33%，豆粕20%，麸皮18%，鱼粉5%，面粉15%，酵母粉1%，植物油1%，食盐1%，其他成分6%，北京科澳协力饲料有限公司。

高脂饲料，成分为酪蛋白25.80%，胱氨酸0.40%，麦芽糊精16.30%，蔗糖9.40%，纤维素6.50%，猪油31.70%，大豆油3%，酒石酸胆碱0.30%，矿物质及维他命成分6.60%，北京科澳协力饲料有限公司。

1.3 实验仪器

RVC 2-331R真空离心浓缩仪，德国Christ；ALPHA 1-2 LD plus冷冻干燥机，德国Christ；TGL-16M台式冷冻离心机，湖南湘仪实验室仪器开发有限公司；SOP电子分析天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；Envision多功能酶标仪，Perkin Elmer。

1.4 实验方法

1.4.1 受试药的制备

取适量善清金花茶样品，按料液比1:10、1:8、1:6，小火保持微沸状态下依次浸提三次，每次浸提30 min，合并浸提液，减压浓缩至适量体积，随后冷冻干燥24h，成浸膏状，密封，4 ℃保存。取适量浸膏用纯净水分别配制成浓度为103.98 mg/mL（低剂量组）和207.96 mg/mL（高剂量组）的药液，取适量辛伐他汀用纯净水配置成0.4 mg/mL,备用。

1.4.2 分组与造模、给药

C57BL/6小鼠40只，经普通饲料进行适应性喂养一周，称重后按体重随机分为空白对照A组、模型B组、阳性药C组、善清金花茶低剂量SQL组、善清金花茶高剂量SQH组共五组。空白对照A组给予普通维持饲料进行喂养，模型B组、阳性药C组以及善清金花茶给药组均给予高脂饲料进行喂养。阳性药组和金花茶低剂量组给药剂量按照人的等效剂量换算所得，金花茶高剂量为低剂量两倍，各组小鼠灌胃的药物及给药剂量见表1，每次灌胃体积均按0.1 mL/10 g计算，各组每天灌胃一次，连续灌胃8周。每周对各组小鼠进行称重并记录，观察各组小鼠体重变化并重新调整灌胃体积。

表1 各组小鼠灌胃的药物及给药剂量Table 1 Gavage drugs and dosage of mice in each group

1.4.3 血清的获取及指标测定

按“1.4.2”项下方法连续给药8周，末次给药后，小鼠禁食不禁水12 h，摘取眼球取血，静置1 h后将血样离心 10 min（4 ℃，3000 r/min），分离血清于-20 ℃密封保存。采用试剂盒检测血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C水平，并按照公式计算AI值。

1.4.4 肝脏的获取及指标测定

解剖小鼠获取肝脏，用生理盐水清洗后，吸干并称重，并根据公式计算肝脏指数，按照试剂盒操作方法测定肝脏组织SOD和MDA含量。

1.4.5 数据统计分析

采用GraphPad Prism 6.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，“n”表示“每组小鼠的数量”，采用独立样本T检验分析，以p<0.05认为有显著性差异，p<0.01为有极显著性差异。

2 结果与讨论

2.1 善清金花茶对小鼠体质量的影响

肥胖与高脂血症息息相关，而体重是小鼠肥胖程度最为直观的指标之一[16]。各组小鼠体重变化如表2所示，与正常组相比，高脂喂养组小鼠体重变化有显著差异，说明高脂模型建立成功。与模型组相比，给药组小鼠体重均有所下降，其中C组和SQL组与B组进行比较，有显著的差异，SQH组小鼠体重有所下降但无显著性差异。说明善清金花茶可以较好的控制小鼠由于高脂饲料喂养而导致的体重增加，其中善清金花茶低剂量的效果与辛伐他汀的效果接近，有很好的降脂作用，高剂量组的效果不明显，可能是由于提取物中糖分较多，加大剂量造成小鼠摄取糖分过多使体重增加。

表2 善清金花茶对小鼠体质量的影响Table 2 Effect of Shanqing Camellia nitidissima tea bag on weight of mice (± s , n=8)

表2 善清金花茶对小鼠体质量的影响Table 2 Effect of Shanqing Camellia nitidissima tea bag on weight of mice (± s , n=8)

注：“**”表示与模型组相比p<0.01，有极显著性差异，“*”表示与模型组相比p<0.05，有显著性差异。下表同。

组别 Weight/g 0 week 2 week 4 week 6 week 8 week空白对照A 组 20.79±0.58 21.50±1.07 21.49±1.18* 21.99±1.14* 22.41±1.29**模型 B 组 21.44±0.89 22.61±1.41 23.03±1.56 23.64±1.73 24.62±1.20阳性药C 组 21.23±1.02 21.43±0.79 21.66±0.75 22.79±0.90 22.89±1.03**低剂量SQL 组 21.49±0.49 21.66±0.81 22.19±0.98 22.59±1.01 23.14±0.40**高剂量SQH 组 21.35±2.28 22.79±2.00 23.74±1.82 24.10±1.38 24.24±0.85

2.2 善清金花茶对小鼠血脂水平的影响

由表3可知，模型组比空白对照组的TC、TG、LDL-C含量分别增加了34.44%、33.64%、27.45%，HDL-C含量降低了14.94%，说明经高脂饲料喂养后，小鼠的血脂明显升高，高脂血症模型制造成功。与模型B组比较，给药组的小鼠血清中TG、TC、LDL-C含量均降低，HDL-C含量均升高，说明阳性药和善清金花茶均能调节高脂模型小鼠的血脂水平。SQL组与B组相比，小鼠血清中的TC、TG、LDL-C的含量分别降低了 20%、16.08%、21.54%，HDL-C的含量增加了27.60%，与阳性药组相比效果更好，说明其调节血脂水平的作用在一定程度上优于辛伐他汀。以上说明善清金花茶对高脂血症小鼠血清的血脂有良好的调节作用，低剂量效果更为显著。

表3 各组小鼠之间的血脂水平Table 3 Blood lipid levels among mice in each group (±s , n=8)

表3 各组小鼠之间的血脂水平Table 3 Blood lipid levels among mice in each group (±s , n=8)

组别 TC/(mmol/L) TG/(mmol/L) HDL-C/(mmol/L) LDL-C/(mmol/L)空白对照A 组 3.31±0.84** 1.07±0.33* 3.28±0.21** 0.51±0.06**模型 B 组 4.45±0.24 1.43±0.23 2.79±0.30 0.65±0.06阳性药C 组 3.92±0.44** 1.26±0.30 3.25±0.19** 0.56±0.11低剂量SQL 组 3.56±0.35** 1.20±0.21 3.56±0.16** 0.51±0.10**高剂量SQH 组 4.04±0.35 1.16±0.56 3.11±0.67 0.60±0.15

宁恩创等[17]对金花茶叶进行降脂实验研究，发现金花茶叶水提物低剂量对大鼠血清中TC、TG、LDL-C的含量分别为降低了5.26%、6.29%、8.32%，HDL-C含量提高了14.55%。林国平等[15]发现罗汉果对高脂高糖饮食诱导的糖尿病兔的TC、TG含量有降低的作用。以上研究结果显示金花茶叶和罗汉果都具有降血脂的作用，而本研究将二者与其他原料科学的搭配在一起，进行取长补短，研究结果也表明善清金花茶能够多方面的调节血脂，其效果不仅优于单组分给药，并且在一定程度上优于阳性药辛伐他汀。

2.3 善清金花茶对小鼠AI的影响

由图1可知，模型组小鼠的AI指数高于空白对照组，说明高脂血症小鼠造模成功；而经阳性药及善清金花茶给药后的各组小鼠的 AI均低于模型组，其中低剂量组与模型组相比，p<0.05，有显著性差异，低剂量SQL组的AI降低了46.07%，与阳性药相比，SQL降低AI的效果在一定程度上优于阳性药辛伐他汀。说明善清金花茶对缓解高脂血症小鼠的动脉粥样硬化有显著效果。

图1 善清金花茶对小鼠AI的影响Fig.1 The effect of Shanqing Camellia nitidissima tea bag on AI of mice (±s , n=8)

2.4 善清金花茶对小鼠肝脏SOD活性、MDA含量的影响

SOD活性主要可以反映小鼠肝脏机体的抗氧化能力，MDA的含量可以反映小鼠肝脏机体相应的过氧化损伤程度。由表4可知，模型组的SOD活性低于空白对照组，模型组的MDA含量高于空白对照组，说明经过8周的高脂饮食对小鼠肝脏造成了一定的损伤。给药后，阳性药组及善清金花茶低剂量SQL组和高剂量 SQH组的 SOD活性分别增加了 13.89%、19.29%、10.54%，MDA含量分别降低了 26.59%、16.27%、9.33%，说明善清金花茶在一定程度上能提高小鼠肝脏SOD活性，降低MDA含量，提高小鼠肝脏的抗氧化水平，在一定程度上对小鼠肝脏具有潜在的保护作用。

表4 各组小鼠之间的SOD活性、MDA含量Table 4 SOD activity and MDA content among mice in each group (±s , n=8)

表4 各组小鼠之间的SOD活性、MDA含量Table 4 SOD activity and MDA content among mice in each group (±s , n=8)

组别 SOD/(U/mg prot) MDA/(nmol/mg prot)空白对照A组 137.77±26.06* 4.54±0.76模型B组 109.78±17.46 5.04±0.56阳性药C组 125.03±2.76* 3.70±0.66*低剂量SQL组 130.96±27.47 4.22±0.30高剂量 SQH 组 121.35±10.83 4.57±0.54

何进勇等[18]研究了金花茶的三种提取物的降脂效果，发现金花茶提取物对高脂血症小鼠的 SOD活性和MDA含量的影响不大，说明金花茶单独使用时，对SOD和MDA的影响较小，而善清金花茶对小鼠肝脏抗氧化指标的作用效果优于金花茶提取物，善清金花茶对高脂血症小鼠的肝脏有一定的保护作用，说明以金花茶为原料的复方产品相比于单一产品在护肝方面具有一定的优势。

2.5 善清金花茶对小鼠肝脏指数的影响

由图2可知，模型组经高脂饲料喂养后，肝脏指数显著（p<0.01）高于空白对照组，说明高脂血症小鼠模型成功建立。给药后，各组的肝脏指数均低于模型组，其中阳性药C组、低剂量SQL组，与模型B组相比，肝脏指数明显降低，有极显著差异（p<0.01），且低剂量SQL组的效果优于阳性药C组，高剂量SQH组的肝脏指数有所降低但无显著性差异。说明善清金花茶能够降低高脂饲料喂养造成的高脂血症小鼠的肝脏质量及脂肪量，并且对肝脏脂肪的增加具有一定的预防作用。

图2 善清金花茶对小鼠肝脏指数的影响Fig.2 The effect of Shanqing Camellia nitidissima tea bag on liver index of mice (±s , n=8)

3 结论

3.1 随着人们生活水平的提高，高脂血症的发病率呈上升趋势。高脂血症是脑血栓、冠心病、动脉粥样硬化等心血管疾病致病的重要因素。目前，临床上主要使用他汀类和贝特类等西药降血脂，虽然效果明显，但是需要长期使用，易产生肝脏损伤等毒副作用。善清金花茶的原料金花茶叶与罗汉果均具有降血脂的作用，以二者为主要原料制备而成的保健茶降脂效果明显，安全健康，可以长期饮用而不必担心毒副作用，且原料均为广西道地药材，本土资源丰富，具有广阔的应用前景。

3.2 本实验通过建立高脂血症小鼠模型，验证善清金花茶的调脂作用。实验表明，小鼠进行高脂饮食干预后，血清中的TC、TG、LDL-C含量显著提高，HDL-C显著降低，AI有所提高，说明在经过8周的高脂饮食后，成功建立了小鼠高脂血症模型。经过善清金花茶干预，可以降低高脂血症模型小鼠TC、TG、LDL-C含量，提高HDL-C含量，降低AI，表明善清金花茶对高脂血症小鼠的血脂水平有调节作用，其中善清金花茶低剂量的在调节血脂水平及降低 AI方面的效果在一定程度上优于阳性药辛伐他汀和高剂量SQH。同时，由于高脂血症导致小鼠肝脏的 SOD活性降低、MDA含量升高，肝脏指数升高，说明小鼠肝脏受到一定的损伤。经过善清金花茶给药之后，小鼠肝脏的SOD活性提高，MDA含量降低，肝脏指数降低，表明善清金花茶对小鼠肝脏有一定的保护作用。

3.3 综上所述，善清金花茶在调节高脂血症小鼠的血脂水平以及缓解小鼠的动脉粥样硬化方面效果显著，且有一定的护肝作用。本实验为善清金花茶的进一步开发及应用提供了科学依据。