HPLC法测定重感灵片中的安乃近的含量

陈朝晖

【摘要】目的：建立用高效液相色谱法测定重感灵片中安乃近的含量。方法：色谱柱为C18柱（Luna 250 mm×4.6 mm，5μm），流动相为甲醇磷酸酯溶液（0.05 mol/l磷酸二氢钾溶液，用1%磷酸调节pH值至4.5±0.5）（22：78），检测波长：275nm，流速：1.0 mL·min-1，柱温：30℃。结果：安乃近在0.178 2～3.564 mg/mL范围内呈良好的线性关系，r=0.999 9；平均回收率：为99.8%，RSD=1.1%（n=6）。结论：该方法简便，结果准确，重现性好，可作为该制剂的质量控制依据。

【关键词】HPLC；重感灵片；安乃近对照品

[中图分类号]R284.1；O657.72 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249（2021）07-0177-02

重感灵片为甘肃省西峰制药有限公司生产品种，基片为0.25 g，本标准为“国家食品药品监督管理局药品国家标准WS-10872（ZD-0872）-2002-2011Z”。该方含有中药、西药成份，配比为七味中药，具体剂方：毛冬青、羌活、葛根、马鞭草、板蓝根、青蒿，2个西药（马来酸氯苯那敏、安乃近）。根据药品的相关改进技术需求，并根据原有的标准和2010年版第一册的中国药典》[1]，进行了各项目的研究工作，含量测定项修订了原标中安乃近含量的方法，建立了HPLC法测定重感灵片制剂中安乃近含量测定的方法。

1 仪器与试药

1.1仪器 安捷伦1200高效液相色谱仪（美国）。

1.2试药 安乃近对照品（批号：100002-201307，购自中国药品生物制品检定所）；重感灵片由甘肃省西峰制药有限公司提供，规格：0.25 g/片；甲醇为色谱纯，磷酸，磷酸二氢钾为分析纯，水为重蒸水。

2 方法与结果

2.1检测波长的选择 取安乃近适量（约10 mg），精密称定，置棕色量瓶中，用甲醇-水（70： 30）混合液配制，用量为0.1 mg/mL，摇匀，既得。扫描范围为200～400 nm，最大吸收波长为275 nm。参考国家食品药品监督管理总局国家药品标准（WS-10872（ZD-0872）-2002-2011Z）[2]重感靈片质量标准测定安乃近的检测波长275 nm，采用275 nm作为检测波长。

2.2流动相的选择 取本品20片，精密称定，研细，精密称取0.1 g，置100 mL棕色容量瓶中，临用前加甲醇-水（70： 30）的混合溶液40 mL，振摇提取3 min，加入甲醇-水（70： 30）混合液，稀释至刻度，摇匀，过滤，取连续滤液10μL注入液相色谱仪，国家食品药品监督管理总局国家药品标准（WS-10872（ZD-0872）-2002-2011Z）[2]中重感灵片质量标准的流动相，采用甲醇-磷酸盐溶液（取0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液，用1%磷酸调节pH值至4.5±0.5）（25： 75）为流动相，结果安乃近色谱峰与相邻峰分不开。通过调整流动相比例，以甲醇-磷酸盐溶液（取0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液，用1%磷酸调节pH值至4.5±0.5）（22： 78）作为流动相，安乃近和相邻色谱峰其分离是完全的，所得的色谱峰比较好。

2.3色谱条件 磷酸二氢钾（C18.0μm流动相）色谱柱；流动相色谱法（C14.0μm，甲醇）；高效液相色谱法（用1%磷酸调节pH值至4.5±0.5）（22： 78）；柱温：30℃；检测波长为275 nm；流速：1.0 mL/min；进样量：10μL；理论塔板数按安乃近峰计算不低于3500。

2.4干扰试验 按处方量配制阴性样品，按供试品溶液的制备方法配制供试品溶液和阴性样品溶液。精密量取供试品溶液和阴性样品溶液各10μL，按上述色谱条件测定，并记录色谱图。结果阴性品的色谱图在安乃近峰处无色谱峰。结果表明，其他药材和辅料对安乃近的含量测定无干扰。

2.5校正曲线与线性关系 精密称取安乃近标准品0.017 82 g置100 mL量瓶中，用甲醇-水（70： 30）的混合溶液溶解并稀释至刻度，精密测定1，2，5，7，10，12，15，20μL注入液相色谱仪。记录色谱图。以溶液浓度（x）为横坐标，峰面积（y）为纵坐标进行线性回归分析。回归方程为y-0.001 2x-0.008 6。结果表明，安乃近的线性范围为0.178 2～3.564 mg/mL，r=0.999 9。

2.6重复性试验 按上述色谱条件对同一批号（批号：406093）的6个样品进行称重测定，并计算含量。结果6个样品重复性良好（RSD=1.1%，n=6）。

2.7精密度试验 取上述对照品溶液1份，连续进样6次，测定安乃近色谱峰积分面积，结果RSD=0.2%（n=6）。

2.8待测溶液稳定性试验 取上述同一样品溶液，分别于0、2、4、6、8 h进样，测定安乃近色谱峰的积分面积，结果在室温条件下样品中安乃近在8 h内稳定，RSD=0.5%。

2.9回收率试验 精密称取每个样品0.07 g，共称取6个样品，精密称取安乃近对照品0.022 36 g，置于50 mL容量瓶中。加入甲醇和水的混合溶液（70： 30）稀释至刻度。分别精密测定10、15、20 mL两个样品，共6个样品。平均回收率为99.8%，RSD=1.1%（n=6）。

2.10色谱系统耐用性试验 色谱条件：安捷伦1200高效液相色谱（美国）；色谱柱：采用C18柱（Luna（C18）250 mm×4.6 mm，5μm）为流动相，用1%磷酸调节pH值至（4.5±0.5）（22： 78）；柱温：30℃；检测波长为275 nm；流速：1.0 mL/min；进样量：10μL；理论塔板数按安乃近峰计算不低于3500。

样品溶液和对照品溶液的色谱峰峰形良好，阴性样品溶液和空白溶媒均不干扰。实验结果表明，该方法耐用性良好。

2.11样品含量测定 ①对照溶液的制备：取安乃近对照品（约18 mg），精密称定，置100 mL容量瓶中，用甲醇-水（70： 30）溶液溶解，稀释至刻度，摇匀得（每1 mL约0.2 mg安乃近）；②供试品溶液的制备：取样品粉末0.1 g，精密称定，置100 mL量瓶中，加甲醇-水（70： 30）的混合溶液40 mL，振摇提取3 min，加入甲醇-水（70： 30）混合液，稀释至刻度，摇匀，过滤，取连续滤液，（避光操作，确保立即进样）；③测定法：取三批样品，按供试品的制备方法配制供试品溶液。分别精密量取对照品溶液10μL和供试品溶液3批，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算峰面积。

结果三批样品含量分别为标示量的99.75%、98.75%、96.70%，根据国家食品药品监督管理总局国家药品标准WS-10872（ZD-0872）-2002-2011Z中安乃近的含量限度和处方中根据安乃近的比例，结合实际生产、储存、运输等因素，每片中安乃近（c13h16n3nao4s·H2O）的含量應为标示量的85.0%～115.0%。详见表1。

3 讨论

3.1流动相的选择 流动相为甲醇磷酸溶液（0.05 mol/ L磷酸二氢钾溶液，用1%磷酸调节pH值至4.5±0.5）的比例分别为（25： 75）（24： 76）（23： 77）（22： 78），结果只有在流动相比例为（22： 78）的条件下，对照品色谱峰才能与相邻组分的干扰峰达到完全分离，故选用（22： 78）为流动相的比例。

3.2样品处理方法的选择 曾选用样品加流动相，振摇提取，放置4 h后进样；经比较样品于临用前加甲醇-水（70： 30）的混合溶液振摇提取后立即进样，所测得样品的含量更加稳定，故本实验采用了样品于临用前加甲醇-水（70： 30）的混合溶液振摇提取后立即进样作为样品的提取方法。

3.3对照品配制方法的选择 曾选用对照品加磷酸盐溶液，放置4 h后进样的配制方法；经比较对照品于临用前加甲醇-水（70： 30）的混合溶液，摇匀，既得。所测得对照品的色谱峰更加稳定，故本实验采用了对照品于临用前加甲醇-水（70： 30）的混合溶液，摇匀，即得。作为对照品的配制方法。

参考文献

[1] 《中国药典》2010年版一部.

[2] 国家食品药品监督管理国家药品标准（WS-10872（ZD-0872）-2002-2011Z）。.