石榴果实及果皮抗氧化成分的测定

杨红澎 李曦 徐彤 蒋与刚

摘 要：目的：比较新鲜石榴皮、干石榴皮、石榴带籽果实和去籽果实中绿原酸、总花青素、总黄酮和维生素C的含量差异。方法：采用紫外分光光度法测定绿原酸、总花青素、总黄酮，2，6-二氯靛酚滴定法测定维生素C。结果：鲜果皮中的绿原酸、总花青素、维生素C含量都高于干果皮。去籽果实中绿原酸、总花青素类成分、维生素C含量均高于带籽果肉，说明可能石榴籽中这3种成分含量很少甚至没有。而总黄酮含量带籽果肉高于去籽果肉2倍，说明石榴籽里含有黄酮，且含量高于果肉。石榴皮中绿原酸和总花青素类成分含量都较高，超过3%。结论：在今后的石榴皮和果肉活性成分提取时，侧重点应该有所不同。

关键词：石榴;绿原酸;总花青素;总黄酮;维生素C

石榴具有生津止渴、收敛止泻、止血、杀虫和解酒等功效[1-5]。石榴果皮和果汁中含有大量的花青素类和黄酮类化合物[3]。石榴皮约占石榴质量的20%～30%[4]，石榴皮中多酚含量约为其干重的10.4%～21.3%，石榴皮中没食子酸和儿茶素的含量均较高。石榴汁中多酚的含量约为2.1 g/L，包括没食子酸、绿原酸、咖啡酸原儿茶酸、儿茶素及香豆酸等。此外，石榴中的单糖类、多糖类、蹂质、有机酸、维生素、微量元素等对人体的营养健康也起重要作用。本研究测定了新鲜石榴皮、干石榴皮及去籽果肉和带籽果肉中常见抗氧化活性成分的含量差异。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

石榴，采集于四川省会理县，干石榴皮为阴干样品，新鲜石榴皮、石榴籽和果肉作为样品直接用于测定;标准品：绿原酸，中国食品药品检定研究所 （110753-201314）;花青素矢车菊-3-O-葡萄糖苷，北京世纪奥科生物技术有限公司（7084-24-4）;槲皮素，中国食品药品检定研究所（100081-201408）;试剂：2，6-二氯靛酚、偏磷酸、草酸，均为分析纯。

1.2 仪器

AEZ00电子天平，瑞士METTLER公司;紫外分光光度计，北京普析 TU-1901;旋转蒸发仪，上海亚荣RE-2000A。

1.3 方法

1.3.1 绿原酸的测定 将果皮或果肉剥离并剪碎，按固液比1∶15称取样品200 g。先用石油醚热回流提取2次每次2 h，再用75%乙醇提取上步提取后的残渣80℃热回流提取3次每次3 h，将提取液混合后用旋转蒸发仪低温回收溶剂，当溶剂完全回收后先用少量乙醇多次溶解提取物定容到100 mL。原溶液稀释200倍测定吸光度。称取10 mg绿原酸标准品配置成1 mg/mL标准溶液，然后依次稀释配制成绿原酸浓度为0.005 、0.01 、0.02 、0.03 、0.04 、0.05 mg/mL的标准溶液，在267 nm处测吸光度。以绿原酸含量为横坐标、以吸光度值为纵坐标作图，图1结果显示，在此比色体系下，绿原酸浓度介于0～0.05 mg/mL时标准曲线线性范围良好。

1.3.2 总黄酮的测定 将果皮或果肉剥离并剪碎，按固液比1∶15称取样品200 g。先用石油醚热回流提取2次每次2 h，再用75%乙醇提取上步提取后的残渣80℃热回流提取3次，每次3 h，将提取液混合后用旋转蒸发仪低温回收溶剂，当溶剂完全回收后先用少量乙醇多次溶解提取物定容到100 mL。原溶液稀释1 000倍测定吸光度。称取槲皮素10 mg标准品配置成1 mg/mL标准溶液，然后依次稀释配制成槲皮素浓度为0.002、0.004、0.006、0.008、0.01、0.015 mg/mL的标准溶液，在257 nm测吸光度。以槲皮素含量为横坐标，以吸光度值为纵坐标作图，图2结果显示，在此比色体系下，槲皮素浓度介于0～0.015 mg/mL时标准曲线线性范围良好。

1.3.3 花青素的测定 将果皮或果肉剥离并剪碎，按固液比1：15称取样品200 g。用75%乙醇60℃避光旋转回流提取3次，每次6 h。将提取液混合后用旋转蒸发仪避光低温回收溶剂，当溶剂完全回收后先用少量乙醇多次溶解提取物定容到100 mL。原溶液稀释200倍测定吸光度。称取花青素10 mg標准品配置成1 mg/mL标准溶液，然后依次稀释配制成总花青素浓度为0.005、0.001、0.002、0.04、0.06、0.08 mg/mL的标准溶液，在281 nm处测吸光度。以花青素含量为横坐标，以吸光度值为纵坐标作图，图3结果显示，在此比色体系下，花青素浓度介于0～0.08 mg/mL时标准曲线线性范围良好。

1.3.4 维生素C的测定 维生素C按国标水果、蔬菜维生素C含量测定法：543 （2，6-二氯靛酚滴定法）GB 6195-86 测定。液浸提剂的制备：称取6 g偏磷酸，配置300 mL偏磷酸的2%溶液（W/V），称取6 g草酸，配置300 mL草酸的2%溶液（W/V）。样液制备：称取具有代表性样品100 g，放入组织捣碎机中，加100 mL浸提剂，迅速捣成匀浆。成10～40 g奖状样品，用浸提剂将样品移入100 mL容量瓶，并稀释至刻度，摇匀过滤。滴定：吸取100 mL滤液放入50 mL锥形瓶中，用以标定过的2，6-滤靛酚溶液滴定，直至溶液呈粉红色15 s不褪色为止。同时做空白试验。计算公式如式（1）：

维生素C（mg/100g）=（V-V0）·T·AW×100（1）

式（1）中，V—滴定样液时消耗染料溶液的体积（mL）;V0—滴定空白时消耗染料溶液的体积（mL）;T—2，6-二氯靛酚染料滴定度（mL）;A—稀释倍数;W—样品重量（g）。

2 结果与分析

2.1 绿原酸的含量

表4显示，果皮里的绿原酸含量高于果肉，鲜果皮中绿原酸百分含量高于干果皮，去籽果肉中绿原酸含量高于带籽果肉。

2.2 总黄酮的含量

表5显示，果皮里的总黄酮含量高于果肉，干果皮总黄酮含量高于鲜果皮的原因是水分蒸发后使成分比发生变化。带籽果肉总黄酮含量高于果肉，说明籽中也有黄酮。

2.3 花青素类成分的含量

表6显示，果皮里的花青素类成分含量高于果肉，干果皮中花青素类成分含量低于鲜果皮。去籽果肉中花青素类成分含量高于带籽果肉。

2.4 维生素C的含量

表7測定结果显示，果皮里的维生素C含量高于果肉，干果皮中维生素C含量低于鲜果皮。果肉与带籽果肉张维生素C含量一致，说明籽中不含维生素C。

3 结论与讨论

目前，在石榴果皮中已经鉴定了 40 多种成分，尤以酚类和类黄酮最为丰富;果肉中主要含有类黄酮成分、花青素及维生素[6]。本研究测定结果显示，鲜果皮中的绿原酸、总花青素、维生素C含量都高于干果皮。去籽果实中绿原酸、总花青素、维生素C含量均高于带籽果肉，说明可能籽中这3种成分含量很少甚至没有。而总黄酮含量带籽果肉高于去籽果肉2倍，说明石榴籽里含有黄酮，且含量高于果肉。从测定结果可以看出，石榴皮中绿原酸和总花青素类成分含量都较高，超过3%，这说明，在今后的石榴皮和果肉活性成分提取时，侧重点应该有所不同。研究表明，石榴皮、果肉、石榴籽具有降糖、降血脂、降血压、抗病毒、保护肝脏、抗疲劳、改善关节弹力、皮肤弹性、强化动脉、静脉和毛细血管等作用，而且对关节炎和运动伤害的炎症、眼部疾病，如糖尿病视网膜病变和视力下降也有一定作用[5]。研究表明，绿原酸和黄酮类成分槲皮素、芦丁（槲皮素的芸香糖苷）间具有协同抗氧化作用[6]。石榴中的这些成分在功效上是否有一定的协同作用值得深入研究。◇

参考文献

[1]张郴，陈建雯，宾婕，等.石榴品种果实药理作用研究进展[J].现代食品，2017（7）：31-34.

[2]王舒.石榴营养成分和保健功能的研究进展[J].海峡药学，2015，27 （4）：37-39.

[3]胡正梅，马清河.石榴的化学成分及药理活性研究进展[J].新疆中医药，2015，33（1）：74-77.

[4]周倩，孙立立，戴衍朋，等.石榴皮、石榴瓤及石榴籽的化学成分比较研究[J].中国中药杂志，2013，38（13）：2159-2162.

[5]闰恒，张辉.石榴化学成分及其药理作用研究进展[J].中国处方药，2016，14 （2）：19-20.

[6]张立华，郝兆祥，董业成.石榴的功能成分及开发利用[J].山东农业科学，2015，47（10）：133-138.

Determination on Antioxidant Components in Fruit and Peel from Puhica granatum

YANG Hong-peng1，2，LI Xi1，XU Tong1，JIANG Yu-gang1

（1Institute of Environmental and Operational Medicine，Academy of Military Medicine Sciences，Academy of Military Sciences，Tianjin 300010，China;2College of Agronomy & Resources and Environment，Tianjin Agricultural University College，Tianjin 300384，China）

Abstract：Objective The contents difference of chlorogenic acid，total anthocyanins，total flavonoids and vitamin C in fresh pomegranate peel，dried pomegranate peel，pulp with seed and pulp without seed were compared.Method Chlorogenic acid，total anthocyanins and total flavonoids were determined by UV spectrophotometry，and vitamin C was determined by 2，6-dichloroindophenol titration.Result The results showed that the contents of chlorogenic acid，total anthocyanins and vitamin C in fresh peel were higher than those in dry peel.The contents of chlorogenic acid，total anthocyanins and vitamin C in pulp without seeds were higher than those in pulp with seeds，which indicated that the contents of chlorogenic acid，total anthocyanins and vitamin C in fruits with seeds were less or even absent.The content of total flavonoids in the pulp with seeds was twice higher than that in the pulp without seeds，indicating that there were flavonoids in pomegranate seeds，and the content was higher than that in flesh.The contents of chlorogenic acid and total anthocyanins in pomegranate peel were higher than 3%.Conclusion In the future，the emphasis should be different in the extraction of active components from pomegranate peel and pulp.

Keywords：Puhica granatum;chlorogenic acid;total anthocyanins;total flavonoids;vitamin C