惠州市7 109例女性人乳头状瘤病毒感染率及亚型分布

黄海勇，车玉传，罗百文，刘海辉，范向平

（惠州市中心人民医院检验中心，广东惠州 516001）

临床上人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染可造成尖性湿疣和鳞状上皮细胞内病变，高危型人类乳头瘤病毒慢性感染与各种HPV相关癌症的诱发有关，例如宫颈癌、肛门癌、阴道癌、外阴癌、阴茎癌和口咽癌[1-2]。HPV是一种具有8 kb基因组小型双链环状DNA病毒，主要包括8个开放阅读框的双链环状DNA病毒，按功能可分为调控染色体外的DNA复制的早期编码区（E区）和形成病毒衣壳的结构成分的晚期编码区（L区）和非编码区。迄今为止，世界卫生组织已经鉴定出200余种DNA基因分型，其中包含40多种与人类生殖道病变相关。通常临床上根据其致癌风险的大小分为高危型和低危型，高危型则与高度鳞状上皮内病变和宫颈癌相关，主要包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68型共15种[3]，低危型HPV感染常诱发低度的鳞状上皮内病变和尖锐湿疣，主要包括6、11、42、43、44、CP8304型共6种[4]。HPV感染多为暂时性并在8~12个月自行消退感染。目前我国HPV感染在16.8%左右[5]，HPV的感染率因地区和年龄差异而有不同。鉴于目前宫颈癌在女性死亡率中不断攀升，迫切需要研究分析HPV在女性流行状况，为宫颈癌防治和HPV疫苗推广策略的制定提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选取2020年6月－2020年12月在广东省惠州市中心人民医院妇科门诊就诊，疑似有妇科炎症或癌前病变，接受人乳头瘤病毒DNA分型检测的患者7 109例。所纳入的患者均为惠州地区内居民，患者年龄为13~85岁，平均年龄为（40.70±10.24）岁。纳入标准：患者处于非月经期，同时在采样前停止2 d以上性生活和至少停用一切阴道内用药物3 d。

1.2 样本采集

由妇产科医师使用一次性宫颈脱落细胞采集刷，取宫颈管分泌物并将收集的细胞洗入盛有保存液的小瓶内，4℃下妥善保存。

1.3 HPV分型检测

采用潮州凯普基因生物有限公司的人乳头瘤病毒基因分型检测试剂盒(PCR-反向点杂交法)进行21种HPV亚型的分型检测，严格按照说明书提供的参考操作步骤，通过基因提取、PCR扩增、基因探针杂交方法进行人乳头瘤病毒的检测(HPV-DNA)。检测21种HPV分型，包括15种高危型（16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68）及6种低危型（6、11、42、43、44、CP8304），同时感染低危型和高危型定义为混合型感染。

1.4 统计学方法

数据采用SPSS 22.0软件进行统计学处理，计数资料采用数和率进行统计描述，组间比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同HPV亚型检出情况

检测收集的样本共7 109例，其中阳性检出共1 470例，阳性率为20.68%，21种亚型均有检出。HPV高危亚型感染以52亚型最多，占阳性检出样本的26.73%，其次为16型，为15.37%。另外，58型、53型、51型也较常见，分别占阳性检出的14.83%、9.73%、8.16%。HPV低危亚型感染以CP8304亚型为最高，检出率为4.63%。见表1。

表1 人乳头瘤病毒不同亚型检出情况Table1 Detectionofdifferentsubtypesofhumanpapillomavirus

2.2 不同年龄段妇女HPV感染情况

在1 470例阳性标本中，<20岁样本组人乳头瘤病毒的检出率最高，为46.93%，同时单一感染率也最高，为32.65%。31~40岁年龄组的感染率最低，为18.91%。各年龄组人乳头瘤病毒的检出率比较，差异有统计学意义（χ2=40.23，P<0.05）。单一感染的病例共有1 162例，单一感染率为16.35%；共有242例双重感染的标本，其感染率为3.40%；另外同时感染三重及以上的66例，感染率为0.93%，其中包括三重感染54例，四重感染9例，五重感染2例和八重感染1例。

2.3 HPV感染不同年龄组分布

1 470 份阳性标本中基因型为高危型的1 277例，占总样本的17.96%，低危型103例，占总样本的1.45%，混合型感染91例，占总样本的1.28%。总阳性率最高的为≤20岁组，高危型感染率的前3位分别为≤20岁组，21~30岁组和≥50岁组。各年龄组人乳头瘤病毒的检出率比较，差异有统计学意义（P<0.05），各年龄段的HR-HPV、LR-HPV和混合型感染的检出率比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。

3 讨论

宫颈癌是一种起源于宫颈的癌症，其临床特征是阴道异常出血、阴道异常分泌物、盆骨疼痛或性交疼痛。宫颈癌是世界上女性第4大常见癌症，患病率占癌症的3.2%[4]。全球每年约有宫颈癌新发病例52.8万，与宫颈癌相关的死亡人数达26.6万，其中85%的病例发生在发展中国家［5］。尽管我国致力于推进宫颈癌的筛查和防治的工作，但是其发病率和致死率仍居高不下，且发病年龄更趋于年轻化的态势。造成社会和家庭经济严重的负担。

宫颈癌的发生机制复杂，包括阴道内微环境、激素水平的改变等。流行病学资料显示，慢性持续性的HPV感染是导致宫颈上皮内瘤变和宫颈癌发生的必要条件［6］。99%的宫颈癌患者的宫颈脱落细胞中可检测到HPV感染［7］。HPV的E5、E6和E7是促进宿主细胞增殖以促进病毒扩增的主要癌基因。E5、E6和E7癌蛋白的表达可以改变多种信号通路引起癌症，E5可以使表皮生长因子受体对表皮生长因子敏感，以增加PI3K/Akt和丝裂原激活的蛋白激酶途径的激活，同时E5还可以抑制其中特定的死亡受体（Drs）和由其相应的配体激活的外在凋亡途径，E6可以在刺激磷酸肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt），Wnt以及Notch通路的同时使肿瘤蛋白p53和PDZ失活[8]。E7可抑制视网膜母细胞瘤蛋白并刺激PI3K/Akt通路[9]。E6和E7都可以解除细胞mi‐croRNA的表达调控［10］，从而改变细胞的信号传导途径，这些信号通路的改变对癌症的发展和维持起着重要的作用。在一项对某院2010－2011年妇科门诊就诊女性的宫颈脱落细胞标本进行检测分析的研究中发现，正常或炎症、CIN-Ⅰ、CIN-Ⅱ、CIN-Ⅲ和浸润性宫颈癌（invasive cervical cancer，ICC）病例HPV检出率依次是15.03%、68.94%、80.56%、83.87%和100%，HPV的感染率随着宫颈病变程度的提高而逐步升高[7]。70%~80%女性在一生中存在一过性的HPV感染，一般可在8~12个月自行消除，极少数的感染者在高危因素且慢性持续性感染状态下可导致宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的发生[7]。在中国HPV感染率为9.9%~27.5%，平均水平为16.8%。

表2 不同年龄段妇女人乳头瘤病毒感染情况Table 2 HPV infection in women of different ages[n(%)]

表3 不同年龄段妇女人乳头瘤病毒感染型别分布情况Table 3 Distribution of HPV infection types in women of different ages[n(%)]

HPV的感染率和型别分布因不同地区不同年龄而异。HPV基因型中致癌性最强的为16型和18型，本次分析的7 109例中，HPV感染亚型的前10位 分 别 为HPV52、16、58、53、51、39、68、18、CP8304、66，前3位 分 别HPV52型，感 染 率 为26.73%，16型感染率为15.37%，58型感染率为14.83%，且三者均为高危型。而广东省整体感染水平前3位分别为16型、52型和58型[11]，两者情况比较相近。整体的感染率达到了20.68%，而东莞地区的感染率为17.30%[12]，深圳光明新区为13.70%[13]，梅州地区为20.67%［14］，此次研究中本市和梅州市的整体感染率非常相近，均处于较高的水平。年龄上呈现“V”字形分布，第一个感染高峰为≤20岁，虽然在此次调查中≤20岁的例数较少，但是其感染率最高，警示HPV感染有向低龄化发展的趋势，可能与该年龄段女性性活动次数多和机体发育并不完全成熟有关。随年龄增长感染率有所降低，这可能与感染后病毒的自然清除转阴有关。≥50岁组感染率略有所升高，而此年龄段的女性激素水平和机体的免疫能力均有所下降，对病毒的清除能力降低是感染率升高的主要原因。

目前包括二价、四价和九价的HPV疫苗在我国获准上市。其中二价覆盖为16型和18型，适用范围为9~45岁；四价覆盖16型、18型、6型和11型，适用范围为20~45岁；九价覆盖16、18、31、33、45、52、58、6和11型，适用年龄为16~26岁。预防性的HPV疫苗推广使用对于宫颈癌癌前病变和HPV的持续感染显示了高效的保护效应。关于HPV认知上存在认为覆盖型别数较多的九价疫苗产生的抗体滴度高的误区，HPV16、18型的持续感染是宫颈癌发生的主要型别，3种疫苗均包含了16、18型，具有同等的保护效力。同时，九价疫苗在产能上存在不足限制了它的大范围接种[15]。根据2015年的一项研究显示我国青少年的初次性行为平均年龄在15.9岁，正好处于女性感染HPV第一个高峰期15~24岁期间。因此，青少年女性应尽早接种疫苗。本研究发现，惠州市普通妇女人群中国HPV的感染率处于较高水平，与此前2012报道的惠州市总体的感染率为18.95%有明显的提升，感染率最高的亚型由原来的16型转变为现在的52型［16］。发病年龄趋于年轻化，警示我们需要进一步的改善医疗条件，大力推广疫苗的使用，同时仍需要加大预防工作的宣传力度，提高卫生意识，加大宫颈癌早期的筛查工作，以期减少宫颈癌的发生。