HPLC测定不同产地前胡中2种香豆素成分的含量*

董 军 周 琴 邵仲达

1 绍兴市中医院 浙江 绍兴 312000

2 浙江震元股份有限公司 浙江 绍兴 312000

前胡为伞形科植物白花前胡（Peucedanum praeruptorum Dunn）的根。功能降气化痰，散风清热[1]。《本草纲目》中引用陶弘景语：“近道皆有，生下湿地，出吴兴者为胜。”“吴兴”即今浙江吴兴，说明浙产前胡质量在南北朝时就获推崇。2020版《中华人民共和国药典》（简称《药典》）以白花前胡甲素、白花前胡乙素作为前胡含量测定的指标，规定白花前胡甲素含量不得少于0.9%，白花前胡乙素含量不得少于0.24%[1]。由于前胡的种植范围广，各产地的气候、自然环境有很大差异[2]，因此，不同产地前胡药材质量也可能存在差异。基于此，本课题组收集了4个产地的前胡，用HPLC法测定不同产地前胡中白花前胡甲素、白花前胡乙素的含量，以期为前胡的质量评价和道地性研究提供依据。

1 仪器与试药

Agilent Technologies 1260型高效液相色谱仪（安捷伦，美国），白花前胡甲素对照品（中国食品药品检定研究院，批号：111711-201904），白花前胡乙素对照品（中国食品药品检定研究院，批号：111904-201804），甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。前胡药材分别产于浙江、贵州、安徽、四川，经绍兴市食品药品检验研究院蒋永海主任中药师鉴定为伞形科植物白花前胡的根。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备：精密称取白花前胡甲素对照品、白花前胡乙素对照品适量，分别加甲醇制成0.102mg/ml和0.102mg/ml的对照品储备液。

2.2 供试品溶液的制备：精密称定各品种前胡药材粉末（过3号筛）约0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入三氯甲烷25ml，密塞，称定质量，超声处理（功率250W，频率33kHz）10min，放冷，再称定质量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液5ml，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀即得。

2.3 色谱条件：色谱柱：Kromasil 100-5-C18（4.6mm×250mm，5μm），流动相：甲醇-水（75∶25），检测波长：321nm，流速：0.8ml/min。柱温35℃，进样量：10μl。

2.4 线性范围考察：取“2.2”项下对照品储备液，加甲醇制成含白花前胡甲素10.2、20.4、50.1、71.4、102μg/ml及白花前胡乙素 10.2、20.4、50.1、71.4、102μg/ml的系列混合对照品溶液，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定色谱峰面积，以对照品浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，计算回归方程：白花前胡甲素：Y=29.36653X+14.6625（r＝0．99987），白花前胡乙素：Y＝26.05555X＋6.78927（r＝1.00000），结果表明：白花前胡甲素、白花前胡乙素均在10.2～102μg/ml范围内，呈良好的线性关系。结果见表1、表2。

表1 白花前胡甲素标准曲线

表2 白花前胡乙素标准曲线

2.5 精密度实验：取“2.2”项下对照品溶液，连续进样6次，测定两种对照品峰面积，得出白花前胡甲素、白花前胡乙素RSD分别为0.08%和0.34%。结果见表3、表4。

表3 白花前胡甲素精密度实验

表4 白花前胡乙素精密度实验

2.6 重复性实验：按“2.3”项下方法平行制备6份供试品溶液（产地安徽），分别测定色谱峰面积，白花前胡甲素RSD为4.17%（n＝6）。白花前胡乙素RSD为4.99%（n＝6），结果表明本法重复性良好。结果见表5。

表5 重复性实验

2.7 加样回收率实验：取6份已知含量的样品（产地安徽）各约0.25g，精密称定，每份分别精密加入适量的白花前胡甲素、白花前胡乙素对照品，按供试品溶液制备及测定方法操作，进行色谱分析，结果见表6。

表6 加样回收率实验结果

2.8 含量测定：分别精密吸取前胡样品的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，按外标法计算供试品白花前胡甲素、乙素的含量。结果见表7。

表7 前胡样品中2种香豆素的含量

3 讨论

作为一味常用中药，前胡有非常悠久的使用历史。过去前胡以野生为主，随着临床使用不断扩大，野生资源日益枯竭，目前使用多为栽培品。课题组前期应用ITS2序列对4个产地的前胡进行DNA条形码鉴定研究，通过邻接法(NJ)构建系统聚类发育树，从树图发现，4个产地的前胡聚为一个单枝，支持率为100%，很容易与其混伪品区别开。且4个产地前胡ITS2序列种内变异极小，平均K2P遗传距离几乎为0。由此判断，4个产地前胡无种内变异，可能均为栽培品种。周洁等[3]通过比较12个产地前胡提取物对于HBSMSCs增殖的抑制作用，发现来自浙江淳安、浙江临安昌化、浙江磐安和安徽宁国4个产地的抑制作用最佳。聂小忠等[4]对浙江、江西、安徽、重庆等地野生和栽培前胡质量进行比较，与本研究样品采集地不同。

通过本次研究，笔者发现产地不同，前胡中所含白花前胡甲素、白花前胡乙素含量存在差异，比较而言，浙江产前胡质量较好，白花前胡甲素、白花前胡乙素含量符合《药典》规定，其他产地前胡存在白花前胡甲素、白花前胡乙素部分或全部低于《药典》情况，从一方面验证了浙产前胡的道地性。但结果是否具有普遍性，还有待进一步的研究。