气相色谱法测定食品中的甜蜜素

邓文辉 李二冬 杨瑾玮 王攀峰

在食品中甜蜜素（环己基氨基磺酸钠）的检测中，通常把其置于低温条件下，在酸性环境中与亚硝酸钠反应生成环己醇，产物与亚硝酸钠继续发生酯化反应生成环己醇亚硝酸酯，结合周正香、杨娟等的研究成果，成酯反应在一定体系条件下呈动态平衡，且随着时间推移和环境条件变化，主产物环己醇亚硝酸酯逐渐转化为副产物环己醇，而两者峰面积的和基本不变。

本研究在试验中发现，采用国家标准GB 5009.97-2016中规定的正庚烷作为提取剂时，在环己醇亚硝酸酯和环己醇之间，还有另外两个峰。王珮等的研究也表明，在重氮化反应中会有暂时无法确定的峰，目前仍无法确定其是否是重氮化反应的其他产物，同时，它们与环己醇亚硝酸酯和环己醇的分离度并不大，虽然我们多次进行色谱方法优化，试图将其分离度变大，但是效果并不理想。特别是当检品成分复杂时，更加困难。因此，我们设想能否将其全部视为目标物，以减少实际检验中的困难，为后续甜蜜素测定方法的改进提供参考。为此，我们分别选取了健力宝、面包、腐乳、火腿等常见的液体类，低脂、低蛋白固体类，高蛋白固体类，以及高脂固体类试样，对其检出限、精密度、回收率等进行考察，看其能否满足相关要求。为了减少干扰，上述四种样品均为阴性样。最后发现，发现其线性良好，检出限、精密度、回收率均满足要求，采用本方法，可以准确测定常见食品中甜蜜素的含量。

一、试验部分

1.仪器及试剂。仪器：岛津GC-2010 plus高效气相色谱仪，配氢火焰离子FID检测器;梅特勒XS204 电子天平;梅特勒-托利多MS105DU 电子天平;KQ-500DE超声波清洗器;IKA ?MS3漩涡混合器。

试剂：环己基氨基磺酸钠（Dr.Ehrenstorfer.GmbH，纯度99.9%）;正庚烷（色谱纯）;氯化钠（分析纯）;石油醚（分析纯，沸程为30-60℃）;氢氧化钠（分析纯）;硫酸（分析纯）;亚铁氰化钾（分析纯）;硫酸锌（分析纯）;亚硝酸钠（分析纯）;纯化水。

2.仪器条件。检测器温度：260℃;进样方式：分流：5.0∶1;进洋口温度：230℃;进样量：1μL;流速：5.0mL/min;氢气：40mL/min、空气：                  400mL/min、尾吹气：30mL/min;色谱柱：SH-RTX-5（30m×0.53mm×1.0μm）;升温程序：50℃保持5min，以7℃/min升温到90℃，保持0.5min，再以20℃/min升温到200℃，保持5min。

3.试验方法。（1）标准液的制备。准确称取环己基氨基磺酸钠0.1001g于100mL容量瓶中，用纯化水定容至刻度，配制成浓度为0.9999mg/mL的标准溶液。

（2）标准液线性考察。①线性考察。分别精密量取上述标准溶液0.25mL、0. 5mL、1.0mL、4.0mL、8.0mL至5个100mL的容量瓶中，用纯化水定容至刻度。分别准确移取上述5个容量瓶中的溶液各10mL于50mL带盖离心管中，离心管置试管架上冰浴5min，加入5.00mL正庚烷、2.5mL亚硝酸钠溶液、2.5mL硫酸溶液，摇匀，冰浴30min，期间振摇10次，加入2.5g氯化钠，盖上盖后置旋涡混合器上振动1min，3000r/min低温离心10min分层后取上清液1μl进行气相色谱分析，记录色谱峰面积，并绘制标准曲线，甜蜜素色谱图见图1，线性方程见图2。

线性方程：y = 547.21x + 322.19，r 2=1

②样品制备。按GB 5009-2016的要求对四种样品进行样品制备及衍生化。

二、结果与分析

1.检出限确定。称取健力宝样品25g，加入标准储备液0.05mL;称取打碎、混匀的5.0g面包试样于50mL离心管中，加入标准储备液0.05mL;称取5.0g腐乳试样于50mL离心管中，加入标准储备液0.05mL;称取打碎、混匀的火腿试样5.0g于50mL离心管中，加入标准储备液0.05mL;分别按上述②的方法处理后测定，色谱峰高度均大于3倍噪音，故检出限分別为：0.002g/kg、0.010g/kg、0.010g/kg、0.010g/kg。

2.精密度试验。准确称取健力宝25.0g于烧杯中，加入7.01mL标准溶液;称取打碎、混匀的5.0g面包试样放于50mL离心管中，加入标准储备液8.00mL;称取5.0g腐乳试样放于50mL离心管中，加入标准储备液3.25mL;称取打碎、混匀的火腿试样5.0g放于50mL离心管中，加入标准储备液1.50mL，按上述②的方法处理，在上述色谱条件下连续进样6次，结果见表1。

3.回收率试验。分别对四种样品进行3个水平的6次加标回收试验，结果见表2。

按照本试验中方法对四种类型的检品进行检出限、精密度、回收率的验证，均满足相关要求，有利于日常检验工作的开展，为后续甜蜜素检测方法的改进提供了新的思路。

作者简介：邓文辉（1985-），男，工程师，硕士研究生，研究方向为食品检验。