宫颈上皮内病变患者HPV感染情况与其临床病理特征的关系

周世波

（重庆永荣矿业有限公司总医院病理科，重庆 402460）

宫颈上皮内病变是一组与子宫颈浸润癌密切相关的癌前病变。此病的发生、发展与患者存在人乳头瘤病毒（human papilloma virus，HPV）持续感染有关。有研究指出，几乎所有的宫颈上皮内病变患者都存在HPV 感染[1-2]。宫颈上皮内病变发展为宫颈癌需要较长的时间。有学者指出，了解宫颈上皮内病变患者的HPV 感染情况有助于判断其病情的进展情况。相关的研究表明，与存在单一HPV 感染的宫颈上皮内病变患者相比，存在多重HPV 感染宫颈上皮内病变患者的预后较差[3]。近年来，随着人们对女性健康的重视程度越来越高，宫颈上皮内病变患者的HPV 感染情况逐渐成为临床上研究的热点。本文对2017 年1 月至2020 年10 月在重庆永荣矿业有限公司总医院就诊的100 例宫颈上皮内病变患者进行研究，旨在分析宫颈上皮内病变患者的HPV 感染情况与其临床病理特征的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017 年1 月至2020 年10 月在重庆永荣矿业有限公司总医院就诊的100 例宫颈上皮内病变患者（病情经薄层细胞学检查得到确诊）作为研究对象。其纳入标准是：1）临床资料完整；2）近1 个月内未使用过抗菌药物；3）性生活史≥3 年；4）其本人及其家属均知情并同意参与本研究，且均已签署知情同意书。其排除标准是：1）合并有心、肝、肾功能不全；2）存在血液系统疾病或全身性感染；3）存在严重的精神疾病或认知障碍。这些患者的年龄为25 ～70岁，平均年龄（50.34±10.67）岁；其中有未婚的患者15 例，已婚的患者85 例，有未育的患者23 例，已育的患者77 例。本研究经重庆永荣矿业有限公司总医院医学伦理委员会批准。

1.2 方法

对100 例患者均进行HPV DNA 分型检测和宫颈组织病理检查。进行HPV DNA 分型检测的方法如下：1）告知患者检查前3 d 内禁止进行阴道给药，检查前24 h 内禁止过性生活。在非经期对患者进行检查。在患者进入检查室后，用窥阴器扩张其阴道，充分暴露其宫颈。使用干棉签擦净宫颈口的分泌物，用HPV 毛刷在宫颈鳞柱的交界处顺时针旋转5 圈，采集宫颈口、宫颈管上脱落的上皮细胞。完成采集后，将HPV 毛刷置于专用的HPV 保存液中，并及时送检。若未能第一时间送检，则需将标本置于4℃的环境中保存待检。2）取0.5 mL 的宫颈细胞液样本，进行离心处理（离心速度为14000 rpm，离心时间为1 min），然后留取上清液。将其加入到400 μL 的溶液Ⅰ中振荡混匀，置于100℃下加热15 min，随后将其加入到400 μL 的溶液Ⅱ中，振荡混匀，置于室温下静置2 min。再次进行离心处理（离心速度为14000 rpm，离心时间为1 min）后留取上清液，室温下静置2 min，然后将其加入到60 μL 的溶液Ⅲ中充分溶解。再次进行离心处理（离心速度为14000 rpm，离心时间为1 min），然后取1 ～2 μL 的上清液，并稀释于无菌蒸馏水中。使用紫外分光光度计检测其OD260-280值。3）将水、DNA 模版、聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）预混液和水生栖热菌（thermus aquaticus，Tap）酶相混合，加入核酸模版5μL，混匀后进行扩增处理。PCR 扩增反应条件：在50℃环境下扩增15 min；95℃预变性10 min；95℃变性20 s；55℃退火90 s；72℃延伸30 s。共循环40 次，于72℃下延伸5 min。随后进行PCR 产物导流杂交。孵育5 min，重复2次。加入酶标液，于25℃下温育3.5 min，使用冲洗缓冲液进行彻底的冲洗，除去未结合的酶标液，加入化学发光底物溶液，于盖板上显色3 ～5 min。在膜芯片上对应的HPV亚型探针位点上可见蓝色斑点，提示单一HPV 感染。在膜芯片上可见两个或两个以上对应HPV 亚型探针位点上的显色斑点，提示双重或多重HPV 感染。进行宫颈组织病理检查的方法是：在阴道镜下观察患者宫颈处的上皮细胞和血管。在蓝光下观察有无异常血管。用3%的冰醋酸棉球浸润宫颈3 min，然后观察上皮细胞颜色及形态的变化情况。随后在宫颈处涂2%的碘溶液，观察碘反应。对碘染色异常位置进行活检，采用顺时针锥切法切取组织标本（深达宫颈管黏膜下10 ～15 mm）。完成切取后，进行组织病理检测，检测结果分为宫颈上皮内病变Ⅰ级（cervical intraepithelial neoplasia Ⅰ，CIN Ⅰ）、宫颈上皮内病变Ⅱ/Ⅲ级（cervical intraepithelial neoplasia Ⅱ/Ⅲ，CIN Ⅱ/Ⅲ）和宫颈癌。

1.3 观察指标

观察100 例患者HPV DNA 分型检测和宫颈组织病理检查的结果，并比较其中不同临床病理特征患者的HPV 感染情况。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0 软件对本研究中的数据进行处理，计量资料采用t检验，计数资料采用χ² 检验，等级资料采用F检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 100 例患者HPVDNA 分型检测和宫颈组织病理检查的结果

100 例患者HPV DNA 分型检测的结果如表1 所示，其宫颈组织病理检查的结果如表2 所示。

表1 100 例患者HPV DNA 分型检测的结果

表2 100 例患者宫颈组织病理检查的结果

2.2 比较100 例患者中不同临床病理特征患者的HPV 感染情况

在100 例患者中，宫颈癌患者中存在多重HPV 感染患者的占比高于CIN Ⅰ患者、CIN Ⅱ/ Ⅲ患者，P＜0.05。详见表3。

表3 比较100 例患者中不同临床病理特征患者的HPV 感染情况[例(%)]

3 讨论

宫颈癌是临床上常见的一种女性生殖系统恶性肿瘤，其发病率仅次于乳腺癌的发病率[4]。宫颈癌的发生、发展是一个多因素、多基因、多阶段相互作用的过程。临床研究发现，几乎所有的宫颈癌患者和宫颈上皮内病变患者都存在HPV 感染[5-6]。本研究的结果显示，在100 例患者中，有CIN Ⅰ患者28 例（占28.00%），CIN Ⅱ/Ⅲ患者52 例（占52.00%），宫颈癌患者20 例（占20.00%）；其中有单一HPV 感染患者41 例（占41.00%），双重HPV 感染患者30例（占30.00%），多重HPV 感染患者24 例（占24.00%），无HPV 感染的患者5 例（占5.00%）。可见，绝大多数的宫颈上皮内病变患者都存在HPV 感染。HPV 是一种具有种属特异性的嗜上皮病毒。大部分女性在感染HPV 后，均能通过自身的免疫功能将其清除，但部分患者会出现HPV 持续感染的情况，并逐渐出现宫颈病变[7-8]。本研究的结果显示，在100 例患者中，宫颈癌患者中存在多重HPV 感染患者的占比高于CIN Ⅰ患者、CIN Ⅱ/ Ⅲ患者，P＜0.05。这表明，存在多重HPV 感染的宫颈上皮内病变患者，其宫颈癌的发生风险较高。这与相关研究的结果相符[9-10]。对于存在多重HPV 感染的宫颈上皮内病变患者，临床上应及时对其进行有针对性的治疗，以降低其宫颈癌的发生率。

综上所述，宫颈上皮内病变患者的HPV 感染情况与其临床病理特征的关系密切。存在多重HPV 感染的宫颈上皮内病变患者，其宫颈癌的发生风险较高。