江苏地区鸡志贺氏菌病的血清流行病学调查

2021-12-09 05:33安东王成丽曹斌卢炜葛梦婷杨将辉
中国畜禽种业 2021年11期
关键词:抗原阳性率养殖场

安东 王成丽 曹斌 卢炜 葛梦婷 杨将辉

(江苏农牧科技职业学院 225300)

鸡志贺氏菌病是志贺氏菌引发的一种细菌性痢疾病[1],病原菌有鲍氏志贺菌、痢疾志贺氏菌等。鸡志贺氏菌病具有较强的传染性,且发病突然,病程短,主要通过消化道途径感染,幼龄雏鸡感染率和致死率最高[2]。病鸡感染后出现精神不振,采食量下降,水样腹泻,严重者夹杂血液,日龄越小雏鸡死亡率越高,整个病程可持续3~7d[3]。由于鸡志贺氏菌病对常用的链霉素有一定的耐药性,若用药不当会加重病情扩散,引发更多鸡只感染。由于该病原体可感染人类,对食用者肠道菌群健康具有破坏作用,必须做好鸡志贺氏菌病防治管理。本试验对江苏地区5 个规模化养殖场和散养农户进行随机抽样调查,通过平板凝集试验了解该地区志贺氏菌流行情况,为开展鸡志贺氏菌病的净化提供参考。

1 材料与方法

1.1 抗原和血清

鸡志贺氏菌平板凝集染色抗原、阳性血清和阴性血清由本实验室自行制备。

1.2 稀释液

0.15%的石炭酸生理盐水(pH7.2)由本实验室自行配制。

1.3 培养基

ss 琼脂平板培养基采购于浙江天杭生物科技股份有限公司。1%葡萄糖肉汤培养基为本实验室自行配制。

1.4 受检鸡群

检测血清来自于江苏地区的5 个规模养殖场、35 户农家散养XXX 鸡只,血清采集数量共700 份,其中规模养殖场500份,农家散养200 只。采血部位为鸡翅静脉,血清由血液高速离心获得,血清样本置于-20℃保存,每只鸡采血量为500uL。

1.5 制备抗原

(1)培养种菌:将纯化好的菌株接种到灭菌好的牛肉汤蛋白胨内,培养温度为37℃,培养时间为24h。

(2)细菌接种:将鲍氏志贺菌液均匀地涂抹在ss 琼脂平板培养基内,培养温度为37℃,培养时间为24h,促进病原菌大量繁殖。同样方法接种痢疾志贺氏菌。

(3)采集培养的细菌:培养过后可发现不同平板内均长满病原菌,两种病原菌培养基表面分别加入适量的稀释液至表面湿润,然后刮取表面病原菌,全部移入无菌瓶中。

(4)细菌灭活:鲍氏志贺菌液和痢疾志贺氏菌液分别置于121℃高压灭活,灭菌时间为2h30min。

(5)浓缩抗原:将抗原进一步浓缩,根据离心法将不同质量的物质进行离心,得到所需要物质,离心转速为每分钟4000r,离心时间为20min,用无菌吸管缓慢吸弃上清,该步骤充分多处直至上清液无杂质且清凉,最后弃掉全部上清液,保留管底菌体。

(6)调整浓度:最终抗原浓度为40 亿/ml,用无菌吸管将细菌分散开来。

(7)抗原染色:提取一部分溶液,将这部分溶液进行抗原染色。加入适量的碱性亚甲蓝染色液进行染色,充分混匀。

(8)保存方法:制备好的2 种不同的抗原菌放入冰箱冷藏保存,以备后续使用。

1.6 被检血清处理

采集的鸡只血清在检测前放置于56℃水浴锅内孵育30min进行灭活处理。

1.7 检测方法

采用平板凝集试验进行检测,试验开始前将所有血清(含待检测、阳性、阴性)及制备的抗原放置于室温条件下1h,让试剂温度较为均一,实验温度为25~30℃。用蜡笔将玻璃板平均分成6 格,将制备的鲍氏志贺菌凝集反应抗原滴加在前3 个格,第1 格内加入待检血清,第2 格加入鸡志贺氏菌病阳性血清(阳性对照),第3 格加入等量生理盐水(引性对照),将制备的痢疾志贺氏菌凝集反应抗原滴加在后3 个格,第4 格内加入待检血清,第5 格加入鸡志贺氏菌病阳性血清(阳性对照),第6 格加入等量生理盐水(引性对照)。每个反应时间为5min。

1.8 结果判断

阳性检查结果:整个液体血滴凝集成白色花斑状,凝集片或成片状凝集大小的颗粒,分布在液体血滴的各个边缘,肉眼观察较明显。

阴性试验结果:白色混合液仍然能保持原来的白色状态,或逐渐变成白色中心部分较浓的白色圆点状。

2 结果与分析

2.1 不同鸡场鸡志贺氏菌病感染调查结果

如表1 所示,在700 份待检血清中共检测出82 份鸡志贺氏菌病阳性血清,其中规模养殖场检测样本数量为500 份,阳性血清样本42 份,阳性率8.6%;农户散养检测样本数量为200份,阳性血清样本40 份,阳性率20.0%。从感染情况来看,规模养殖场鲍氏志贺菌感染数量为22 份(占比51.16%),痢疾志贺氏菌感染数量为15 份(占比34.88%),混合感染数量为6 份(占比13.95%);农户散养鲍氏志贺菌感染数量为19 份(占比47.50%),痢疾志贺氏菌感染数量为12 份(占比30.00%),混合感染数量为9 份(占比22.50%)。

表1 不同养殖方式鸡志贺氏菌病感染情况调查

2.2 不同群体鸡志贺氏菌病感染调查结果

如表2 所示,商品鸡阳性率最高,383 份样本中检测阳性血清57 份,阳性率为14.88%,其次为后备母鸡,阳性率为8.98%,而种母鸡阳性率为7.14,种公鸡未检测出阳性鸡志贺氏菌病。从感染情况看,商品鸡鲍氏志贺菌感染数量为29 份(占比50.88%),而痢疾志贺氏菌感染数量为17 份(占比29.8 2%),混合感染数量为11 份(占比19.30%);后备母鸡鲍氏志贺菌感染数量为11 份(占比50.0%),痢疾志贺氏菌感染数量为8 份(占比36.36%),混合感染数量为3 份(占比13.64%)。

表2 不同群体鸡志贺氏菌病感染情况调查

3 结论与讨论

试验自制的鸡志贺氏菌平板凝集染色抗原可用于检测鸡志贺氏菌,试验结果发现,不同养殖方式和饲养群体的鸡志贺氏菌病感染情况不同。从养殖方式看,规模化养殖场由于饲养方式较为科学,调查的5 个养殖场均采用分群饲养管理,且每周进行1~2 个鸡舍消毒工作,养殖人员进出鸡舍要更换衣物和清洁消毒,在养殖方式较为科学的条件下,规模化养殖场鸡志贺氏菌病阳性率明显低于农户散养模式。表明在管理粗放、卫生条件不良的条件下,鸡志贺氏菌病具有较高的发病率。若散养户不采用科学的饲养模式,缺乏定期消毒观念,会进一步加重鸡志贺氏菌病感染情况,增加鸡志贺氏菌病防治难度。

从养殖群体看,商品鸡感染鸡志贺氏菌病最严重,阳性率高达14.88%,而后备母鸡和种母鸡也存在感染情况。商品鸡发病率高的原因也和养殖方式有关,由于散养户主要养殖商品鸡,且养殖观念较为落后,疫苗接种不当会增加感染几率,甚至有散养户存在“不发病不接种”的错误思想,造成鸡群存在隐性感染鸡只。江苏地区应进一步加大科学养殖宣传工作,鼓励养殖户每年进行至少2 次鸡群检疫,及时淘汰病鸡和可疑鸡只,每周对鸡舍进行消毒,尤其是雏鸡要与不同日龄鸡分群饲养,这样可减少雏鸡鸡志贺氏菌病发病率和死亡率。

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