苦参功劳颗粒对鸡大肠杆菌病治疗效果评价试验

潘贵珍，李召斌，冻杨美，周德刚

摘要：目的：本研究旨在观察苦参功劳颗粒对鸡大肠杆菌病的治疗效果。方法：患大肠杆菌病肉鸡，2栋，每栋16，000只，分为苦参功劳颗粒组（1g/L）和盐酸多西环素可溶性粉组（3g/L），于给药前和试验期间观察并记录鸡只采食量、粪便状况和死亡情况。结果：肉鸡给药后采食量和粪便基本恢复，可极显著降低动物的死亡率（P<0.01），表明苦参功劳颗粒对鸡的大肠杆菌病有效。结论：苦参功劳颗粒，1g/L，连用3d，对鸡大肠杆菌病有较好的治疗作用。

关键词：苦参功劳颗粒;大肠杆菌;蛋鸡腹泻;死亡率;耐药

鸡大肠杆菌病是一种由致病性大肠杆菌引起的急性或慢性传染病，具有发病率高、发病快、死亡率高的特点，给养殖业造成严重的经济损失[1，2]。目前，在饮水或饲料中添加抗生素是预防和治疗鸡大肠杆菌病的主要手段，然而由于抗菌药的长期不合理使用，导致细菌耐药性日益严重，临床上分离多重耐药菌的报道日益增多[3]。此外，由于长期在饲料中添加抗菌药物导致的动物源性食品药物残留威胁公众的生命健康安全，我国开始实施药物饲料添加剂退出计划，给大肠杆菌病防控带来新的挑战。苦参功劳颗粒是按传统中兽医理论开发的中兽药复方制剂，由十大功劳、苦参、木香3味药物组成，有清热解毒，燥湿止痢的功效，药效学研究表明苦参功劳颗粒对人工感染大肠杆菌的小鼠具有治疗作用[4]。为了考察苦参功劳颗粒对鸡大肠杆菌病的临床治疗效果，笔者采用自然感染病例进行临床效果评价。

1 试验材料

1.1 药品

苦参功劳颗粒，批号：20171101，洛阳惠中兽药有限公司，每1L水，鸡1g，规格为每1g相当于原生药3g。

盐酸多西环素可溶性粉，批号：2017030501，青岛康地恩动物药业有限公司，混饮，每1L水，鸡3g。

1.2 培养基及主要试剂

营养琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、伊红美蓝琼脂培养基、营养肉汤培养基、革兰氏染液，均购于青岛海博生物技术有限公司。葡萄糖生化管、乳糖生化管、麦芽糖生化管、蔗糖生化管、甘露醇生化管、硫化氢生化管、葡萄糖磷酸盐蛋白胨水、枸橼酸盐生化管，购于杭州微生物试剂有限公司。靛基质试剂、甲基红（MR）试验试剂、VP试验用试剂甲/乙液，杭州微生物试剂有限公司生产。

1.3 试验动物及試验地点

洛阳伊川县白沙镇肉鸡，16，000只/栋，共两栋，8日龄时免疫新流二联灭活疫苗后发病，前期使用过恩诺沙星溶液、硫酸新霉素可溶性粉、双黄连口服液。

2 试验方法

2.1 临床症状与解剖学观察

肉鸡临床症状表现为精神沉郁、腹泻、采食量下降，死亡率为0.5%;剖检主要症状为心包炎、肝周炎和气囊炎，次症为肾脏表现为花斑肾。因此，初步诊断为大肠杆菌病，肾脏损伤推测可能是由于使用较多药物所导致。

2.2 实验室检查

无菌采集病鸡心脏和肝脏于自封袋中标记，采用无菌操作程序，用刀片灼烧心脏和肝脏表面，暴露干净切面并涂麦康凯琼脂培养基平板，进行细菌鉴定，37℃恒温培养24h。判定标准：麦康凯琼脂平板上出现桃红色菌落为大肠杆菌阳性。参考大肠埃希菌检查方法进行IMVIC试验，进行确诊。

2.3 药物敏感试验

对于高死亡率肉鸡场，采集组织进行药敏试验。分别取心脏和肝脏，置于超净工作台中无菌平皿内，用热的刀片在肝脏和心脏表面灼烧，用无菌刀片切一面，镊子夹住组织后用切面涂布营养琼脂平皿，然后贴药敏片，培养24h后观察结果。

2.4 动物的分组处理与给药

2栋鸡舍共分为2组，一栋按照1g/L剂量给予苦参功劳颗粒，另一栋按照3g/L剂量给予盐酸多西环素可溶性粉，集中饮水，连用3d。

2.5 观察指标

1） 精神状况观察 观察鸡群精神状况并记录鸡只给药前后采食量。

2） 粪便状况观察 观察鸡只粪便，粪便观察方法：选5个区域（每个区域约0.64m2）进行粪便观察，记录粪便状况（黄白色、黄绿色稀便）。粪便评分情况见表1。

3） 死亡率 给药前和试验期间统计鸡群的死亡率。死亡率=死亡动物数/试验鸡只总数×100%

3 统计分析

死亡率用卡方检验进行显著性分析，各组之间显著性用P值表示，其中P<0.05为差异显著，P<0.01为差异极显著。

4 试验结果

4.1 实验室检查结果

肉鸡场剖检症状为心包炎、肝周炎，见图1。鉴别诊断在麦康凯琼脂平板上生长的菌落为粉红色，见图2;IMVIC结果显示，分离到的细菌可分解葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇，产酸产气，VP试验阴性，MR试验阳性，不利用枸橼酸盐，可初步确诊为大肠杆菌。

4.2 肉鸡场药物敏感试验结果

药敏试验结果表明粘菌素属于高敏，多西环素属于中敏，本试验中根据药敏试验结果选择多西环素作为阳性对照药物。

4.3 苦参功劳颗粒对鸡群粪便和采食量影响

肉鸡5个区域粪便，给药前每个区域中个别几堆黄白色或黄绿色稀便，给药3d后稀便恢复正常。肉鸡采食量逐步上升，给药结束时采食量基本恢复正常。

4.4 苦参功劳颗粒对肉鸡死亡率的影响

苦参功劳颗粒对肉鸡死亡率的影响见表2、图3。

由表2可知，不同给药组在给药2d、给药3d、给药结束后1d分别与给药前相比死亡率极显著降低（P<0.01），同一时间点两组相比，差异不显著。

5 分析与讨论

临床上由于饲养管理不当和疫苗免疫失败，造成鸡大肠杆菌病的暴发，以及抗菌药物的不合理使用导致细菌耐药菌株增加、治疗失去效果，因此探索替代抗菌药物治疗鸡大肠杆菌病的复方中药，将为兽医临床找到有效替代抗菌药物防治鸡大肠杆菌病具有重要指导意义。由肉鸡药敏试验可知，目前大肠杆菌类疾病难以控制的根本原因为其对药物已经产生了耐药性。宋海霞等[5]对河南致鸡腹泻病原的药敏试验表明，病原菌对14种药物耐药性很严重，以耐10～13种药居多，且有严重的交叉耐药现象，因此迫切需要根据中兽药对其进行治疗，苦参功劳颗粒对耐药大肠杆菌所造成的鸡只死亡，有极显著的降低作用，且苦参功劳颗粒与多西环素可溶性粉药物对照组相比，差异不显著。

国家对食品安全的监管越来越严格，肉鸡出售前用于治疗大肠杆菌病引起的腹泻类的抗生素均不能使用，临床上可用于治疗的中兽药并不多，本研究结果证明苦参功劳颗粒对肉鸡的大肠杆菌病具有较好治疗效果，为解决该类问题提供一种新的方案。腹泻具有极强传染性的疾病，索朗扎西、王亚芳、张耀东等[6-8]报道大肠杆菌多表现为热证或以热为主兼湿，或以湿为主兼热，治则主要以清热解毒为主。苦参功劳颗粒中含有木香，木香具有行气止痛、健脾和胃，可用于治疗脾胃气滞等诸症。晏磊等[9]把苦参功劳颗粒按0.1、0.2和0.4g/kg体重的剂量灌胃给药，连续5d，治愈率分别为67.5%、77.5%和80.0%，体重增重率分别为56.91%、63.56%和61.36%。

本试验中黄色稀便是热为主兼湿，因此治则以清热解毒为主，本试验报告中苦参功劳颗粒主要功能为清热解毒、兼具有行气作用，因此符合症状，死亡率由0.49%降至0.01%，能极显著的降低肉鸡的死亡率，并且与多西环素药物对照组效果相当;给药结束时肉鸡采食量恢复正常水平，鸡的粪便恢复正常状态。采食量、粪便、鸡只死亡率是評价药物效果重要指标，因此从这三个方面进行评价，苦参功劳颗粒对治疗鸡的大肠杆菌病有较好的治疗作用。

6 小结

苦参功劳颗粒，1g/L，连用3d，对鸡大肠杆菌病有较好的治疗作用。

参考文献：

[1] 甘孟侯.中国禽病学[M].北京：中国农业出版社，2003：167-171.

[2] SAIF Y M.禽病学[M].11版.苏敬良，高福，索勋，译.北京：中国农业出版社，2011：712-726.

[3] SUN H， LI S S， XIE Z J， et al. A novel multidrug resistance plasmid isolated from an Escherichia coli strain resistant to aminoglycosides[J]. J Antimi-crobial Chemother， 2012， 67（7）：1635-1638.

[4] 高艳艳，潘贵珍，李召斌，等.苦参功劳颗粒的体内抗菌试验研究[J].中兽医医药杂志，2019，38（1）：38-42.

[5] 宋海霞.河南省鸡腹泻重要病原菌的分离鉴定与耐药性及PCR检测方法的研究[D].河南农业大学，2010.

[6] 索朗扎西.中药锦珠草颗粒对鸡大肠杆菌病的防治试验[D].西北农林科技大学，2014.

[7] 王亚芳，贾召锋，秦俊杰，等.中西医结合治疗鸡大肠杆菌病[J].当代畜牧，2014（6）：17-18.

[8] 张耀东，朱伟山，凌征廉，等.中草药防治鸡大肠杆菌病的用药程序[J].农村养殖技术，2013（3）：63-64.

[9] 晏磊，高艳艳，潘贵珍，等.苦参功劳颗粒对人工感染鸡大肠杆菌病的临床疗效研究[J].安徽农业科学，2019，47（10）：82-85.