山东省部分养殖场点马属动物主要病毒疫病调查

姜 伟，徐 聪，楚遵锋，陈 伟，邢林林，孔祥华，刘 存，孙圣福

（1.龙口市动物疫病预防控制中心，山东龙口 265701；2.山东省动物疫病预防与控制中心，山东济南 250100；3.济南市动物疫病预防与控制中心，山东济南 250102）

马属动物主要由家马、驴、骡和斑马组成[1]。我国养马历史悠久，长期以来，马是重要的畜力和交通工具。随着经济社会的发展，近年来马的传统役用和交通功能被机械逐步取代，养殖量逐渐减少，而与马产业紧密相关的体育运动、休闲骑乘、文化旅游、专业化马产品开发等新业态开始蓬勃发展[2]。驴产业是我国畜牧业中的重要产业之一。近年来驴役用价值也在不断萎缩，而其商用价值快速上升，驴皮、驴肉等产品的市场需求快速增长，尤其是阿胶产品给驴产业带来了新的活力[3]。山东省是养驴大省，规模化驴场超过200 个，存栏量超过100 万头。

马传染性贫血（equine infectious anemia，EIA），简称马传贫，是由反转录病毒科慢病毒属马传贫病毒引起的一种持续感染性疫病，可以感染马、驴、骡等马属动物，临床症状主要为发热、贫血、黄疸、浮肿和消瘦[4]。世界动物卫生组织（OIE）将其列为须通报动物疫病，我国将其列为二类动物疫病。非洲马瘟（African horse sickness，AHS），是由非洲马瘟病毒引起的一种急性或亚急性传染病，主要表现为呼吸困难、体温升高，病死率可达95%[5]，OIE 将其列为须通报动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。马流行性感冒（equine influenza，EI），简称马流感，是由正黏病毒科流感病毒属马A 型流感病毒引起的一种病毒性呼吸道传染病，马、驴、骡等马属动物对其均易感，主要表现为发烧、咳嗽、流鼻液和母畜流产，目前以H3N8 亚型为主[6]，OIE 将其列为须通报动物疫病，我国将其列为三类动物疫病。为了解山东省马属动物中上述3 种病毒疫病的流行状况，2020 年对山东省部分马属动物养殖场进行了病原或抗体检测，以期为山东省马属动物疫病防控提供技术支撑。

1 材料与方法

1.1 样品

2020 年11 月，选择马属动物养殖比较密集的济南、青岛、聊城和德州等地市的养殖场，场群内按照发现疫病的策略进行抽样，设置信区间95%、试验敏感性100%、预期流行率2%。在青岛市的2个马场（每场存栏约100 匹），每场随机采75 匹马的血清和全血样品，共采集马血清和全血样品各150 份；在驴存栏数量较多的济南、聊城和德州等地市，选择存栏约1 000 头的4 个场点，每个场点随机选择136 只，同时采集血清和全血样品，共采集驴血清和全血样品各544 份。

1.2 试剂

H3N8 亚型EI 血凝抗原、EIA 抗体ELISA 检测试剂盒、AHS 病原荧光PCR 检测试剂盒，均由动物用生物制品国家工程研究中心提供；核酸提取试剂盒，由Roche 公司提供；0.016 mol/L 的过碘酸钾，由本实验室配制。

1.3 检测与结果判定

1.3.1 EIA 采用ELISA 方法检测抗体，按照试剂盒说明书进行。检测为阳性，判定该份样品为阳性，有1 份及以上阳性样品的场，判定为阳性场。

1.3.2 AHS 采用荧光PCR 方法进行病原检测。将全血样品，采用核酸提取试剂盒提取核酸，然后用AHS 病原荧光PCR 检测试剂盒进行扩增和检测。检测为阳性，判定该份样品为阳性，有1 份及以上阳性样品的场，判定为阳性场。

1.3.3 H3N8 亚型EI 采用HI 方法进行H3N8 亚型抗体检测。向待检血清中加入2 倍体积新配制的0.016 mol/L 过碘酸钾溶液，置于（22±2）℃作用15 min；之后加入与血清等体积的含3%甘油的PBS，以中和过剩的过碘酸溶液，混合后置于（22 ±2）℃作用15 min；最后，在56 ℃水浴中灭活30 min，采用1%鸡红细胞进行HI 试验。被检样品HI 效价≤3log2，判为阴性；HI 效价=4log2，判为可疑，进行重检，若重检效价≥4log2，判为阳性，≤3log2，判为阴性；HI 效价≥5log2，判为阳性。有1份及以上阳性样品的场，判定为阳性场。

2 结果

对采集的694 份血清样品进行EIA 抗体检测，结果全部为阴性。对采集的694 份全血样品进行AHS 病原检测，结果全部为阴性。

对采集的639 份样品（去除不合格样品55 份）进行H3N8 亚型EI 抗体检测，结果在6 个场点均检测到阳性样品，场群阳性率为100%；检出520份血清阳性样品，样品阳性率为81.38%（520/639）。其中：147 份马血清样品中检出126 份阳性，样品阳性率为85.71%；492 份驴血清样品中检出394份阳性，样品阳性率为80.08%。详见表1。

表1 H3N8 亚型EI 抗体检测结果

3 分析与讨论

本次马属动物主要病毒性疫病调查涉及6 个场点，采样动物均未接种过所调查疫病的疫苗，因此检出阳性即为感染。检测结果显示，EIA 和AHS 均为阴性，而H3N8 亚型EI 群体阳性率和样品阳性率分别为100%和81.38%，说明H3N8 亚型EI 在这些场点流行普遍，感染率高。

EIA 曾遍及全世界，给养马业造成了巨大经济损失。近年来，在国外尤其是欧美国家有流行范围扩大的趋势，我国周边的日本、蒙古国和印度，也有发生EIA 的报道[7]。虽然目前我国已经接近消灭该病，但国外日趋严峻的疫情形势和频繁的国际交流给该病防控提出了更高的要求。

2020 年3 月底，泰国多次向OIE 通报发生AHS 疫情，最近的疫点距离我国边境不足800 km，再加上该病可经蚊虫叮咬传播，使我国防控压力增大。目前该病无有效治疗药物，主要通过染疫马匹扑杀、同群马匹紧急免疫和蚊虫杀灭等策略进行综合防控，同时进行马属动物AHS 监测。

EI 在世界许多国家广泛存在，我国许多地区也存在着不同程度的感染[8-9]。从本次调查的结果看，所有的场点均监测到抗体阳性，样品阳性率在80%以上，说明EI 流行比较严重，流行较为普遍。

由于项目采样的局限性，仅采集了6 个场点，场点数量偏低，检测结果不能代表全省马属动物疫病的实际状况，仅能从侧面了解全省的基本情况。今后应结合国内外马属动物疫情形势，在全省加强马属动物疫病监测，尤其是要加强H3N8 亚型EI的监测与防控。