牛病毒性腹泻疫苗的免疫效果观察

高祥军

摘要：目的：观察牛病毒性腹泻疫苗对牛病毒性腹泻病的免疫效果;方法：选取BVDV检测显示阴性的健康牛8头，用制备好的成品实验疫苗为8头健康牛注射，不同时间段采集血清进行抗体检测并观察其临床变化与抗体水平增减情况;结果：该疫苗具有安全可行性，免疫后不同阶段抗体水平都维持在有效保护范围内，保护率非常高，具有良好的免疫原性，可用于牛病毒性腹泻病的安全防控，为BVDV灭活疫苗自主研发提供了良好基础。

关键词：牛病毒性腹泻病毒;疫苗;抗体;免疫效果

牛病毒性腹泻病（ bovine viral diarrhea，BVD） 是由黄病毒科、瘟病毒属的牛病毒性腹泻病毒引起的，这种传染病极其复杂，临川表现繁复，多以腹泻、发热、呼吸道症状、流产、死胎或畸胎、黏膜溃烂等为主要表现，是一种会引起免疫机能障碍的急、热性传染病。牛病毒性腹泻病在我国流行很广泛[1]。这种病毒进入动物机体后会引起长期的持续性的感染，同时引起免疫抑制[2]，这种感染可以持续很长时间甚至终身携带并持续不断向外界排出可致病性的牛病毒性腹泻病病毒，致使本病的防治难度大大提高并造成了长期的危害[3]。连续几年，牛病毒性腹泻病毒都对我国养殖户特别是规模化养殖场造成了不小的影响，蔓延迅猛，造成的经济损失日益严重[4]。目前，对牛病毒性腹泻病的防控措施还主要是有效的疫苗接种，只是国内关于牛病毒性腹泻病的商品化疫苗缺口很大，因此，本研究旨在制备出具有有效免疫效力的牛病毒性腹泻病灭活疫苗，对牛病毒性腹泻病病毒检测阴性的牛进行接种并观察其是否具备安全性与免疫效果，希望可以为牛病毒性腹泻病的防治提供些许参考。

1  材料與方法

1.1  试验动物

青海民和县地区8头健康牛，试验组6头（1月龄2头、4月龄4头），对照组2头，牛病毒性腹泻病毒抗体检测都为阴性。

1.2  牛病毒性腹泻疫苗

南京某生物技术有限公司提供的牛病毒性腹泻疫苗Ⅰ型疫苗，所提供疫苗为试验后期成品。

1.3  安全性测试

1.3.1 免疫注射

选取1月龄健康犊牛2头，注射前，先将疫苗拿到室温下平衡温度，达到室温后充分摇匀，每头牛进行颈部肌肉注射疫苗2mL，首免注射后21日再进行第二次加强免疫注射，每头牛接种2mL。

1.3.2  临床观察

疫苗注射后，观察牛的精神状态、体温、采食饮水等情况，查看注射部位是否有异常变化。

1.3.3  采集血清

免疫后的第5天、第15天、第30天、第60天、第120天、第180天，分别用真空采血管进行颈静脉采血，分离血清后-20℃冻存待检。

1.3.4  抗体检测

采集的血清用ELISA方法检测抗体，直接使用牛病毒性腹泻病毒ELISA抗体检测试剂盒进行检测，记录结果。

1.4 免疫原性测试

1.4.1 免疫注射

选取4月龄健康牛4头，注射前，先将疫苗拿到室温下平衡温度，达到室温后充分摇匀，每头牛进行颈部肌肉注射疫苗2mL，首免注射后21日再进行第二次加强免疫注射，每头牛接种2mL。对照组2头健康牛不注射疫苗，正常饲养。

1.4.2  临床观察

疫苗注射后，观察牛的精神状态、体温、采食饮水等情况，查看注射部位是否有异常变化。

1.4.3  采集血清

免疫后的第5天、第15天、第30天、第60天、第120天、第180天，分别用真空采血管进行颈静脉采血，分离血清后-20℃冻存待检。

1.4.4  抗体检测

采集的血清用ELISA方法检测抗体，直接使用牛病毒性腹泻病毒ELISA抗体检测试剂盒进行检测，记录结果。

2 结果

2.1 安全性测试结果

2.1.1 疫苗注射后临床观察

注射疫苗后，2头1月龄牛采食、饮水一切正常，体温无明显升高，精神良好，临床表现未见异常。可证明疫苗的安全性很好。

2.1.2 抗体检测

疫苗免疫后的第5天、第15天、第30天、第60天、第120天、第180天，2头1月龄牛的血清ELISA抗体检测都为阳性，2头牛在各个时间段的OD280值检测结果可见图1。由图1可以看出，疫苗免疫后的第5天开始产生抗体，抗体形成是在第15天达到最高，随后抗体水平缓慢下降，但一直维持在一定高度，疫苗免疫后180天还可以检测出牛病毒性腹泻病毒抗体。

2.2 免疫原性测试结果

2.2.1 疫苗注射后临床观察

注射疫苗后，4头4月龄牛采食、饮水一切正常，体温无明显升高，精神良好，临床表现未见异常。与对照组无异。

2.2.2 抗体检测

疫苗免疫后的第5天、第15天、第30天、第60天、第120天、第180天，4头4月龄牛的血清ELISA抗体检测都为阳性，2头对照组4月龄牛的血清ELISA抗体检测仍为阴性，4头实验组牛在各个时间段的OD280值检测结果可见图2。由图2可以看出，疫苗免疫后的第5天开始产生抗体，抗体形成是在第15天达到最高，随后抗体水平缓慢下降，但一直维持在一定高度，疫苗免疫后180天还可以检测出牛病毒性腹泻病毒抗体。

3 讨论

牛病毒性腹泻病具有高度传染性，防控困难，早年间的传播速度惊人，国内、国外多地都有相关报道，集约化养殖场发病率居高不下，调研表明此病长期存在于我国各地大中型牛场，在养牛业中造成的经济及其他损失不计其数[5-6]。目前，牛病毒性腹泻病的防控措施还主要是有效的疫苗接种，但有效且长期具有保护效力的疫苗屈指可数，需要疫苗在刺激机体的细胞免疫的同时又可以剌激机体产生体液免疫，牛在注射疫苗后可以快速产生抗体，并且抗体可以持续较长时间的免疫保护[7]。目前，我国多地区都在努力研发有效的BVDV疫苗，本文所用疫苗为试验后期成品，我们对其进行了安全性测试及免疫原性测试，结果表明，1月龄犊牛接种后各方面体征正常，无明显临床症状，表明其安全性有所保证;常规免疫4月龄易感染牛时，各方面体征正常，无明显临床症状，抗体检测水平结果良好，正常剂量即可正常产生抗体且保护时间长达半年。可作为防控牛病毒性腹泻病的优质候选疫苗。

参考文献：

[1]黄慧文，刘芳芳，张学成，李真光，武华.2型牛病毒性腹泻/黏膜病流行病学及其疫苗的研究进展[J].中国兽医学报，2018，38（10）：2025-2027.

[2]陶洁，洪天旗，王亨，张信军，刘惠莉，朱国强.我国牛病毒性腹泻流行现状与防控策略[J].微生物学通报，2019，46（07）：1850-1858.

[3]姜玲玲，周思旋，徐洪忠.牛病毒性腹泻-黏膜病核酸疫苗的研究现状[J].黑龙江畜牧兽医，2015（15）：86-88.

[4]张国华，吴丹丹，周玉龙，范春玲，任亚超，朴范泽.牛病毒性腹泻病毒黑龙江分离株的分离鉴定[J].中国预防兽医学报，2015，37（10）：805-807.

[5]刘芳芳，师新川，孟相秋，赵建增.牛病毒性腹泻的准确诊断及预防[J].中国乳业，2016（03）：42-45.

[6]兰宇，孟相秋，赵建增.牛病毒性腹泻的免疫预防[J].中国动物保健，2016，18（02）：29-31.

[7]陈云波.牛病毒性腹泻及其防控措施[J].中国畜牧兽医文摘，2015，31（12）：94-95.