苹果中啶虫脒残留量快检测定及方法评估

◎ 张健伟，高 华，牛贵洋，谭慧林

（阿克苏地区食品安全检测中心，新疆 阿克苏 843000）

啶虫脒别名吡虫清，是一类新烟碱类高效杀虫剂，因具有广谱、内吸、速效、低毒、活性高、用量少和持效期长等特性，在全球范围内应用广泛[1-2]。此类杀虫剂在瓜果蔬菜等农作物中使用范围广，其在水体和土壤中的积累量逐年增加。常见的检测啶虫脒的方法包括超高液相色谱-串联质谱法[3]、气相色谱法[4]、超高效液相色谱法[5]等。此类方法选择性好、灵敏度及准确度高，但操作复杂，耗时较长。而快检技术的可操作性较强，能在短时间内快速出具检验结果。

本研究以《水果、蔬菜中啶虫脒残留的测定 液相色谱-串联质谱法》（GB/T 23584—2009）为参比方法，根据《食品快速检测方法评价技术规范》，对快速检测试剂盒产品进行适用性评估，对3家公司生产的啶虫脒快检试剂盒的特异性、灵敏度、假阴性率及假阳性率等相关指标进行评价，为苹果中啶虫脒的快速筛查工作提供技术借鉴。

1 材料与方法

1.1 材料

苹果样品，均采购自阿克苏市销售场所的地产苹果；啶虫脒标准物质（浓度为100 μg·mL-1）；甲醇；甲酸；乙腈；乙酸；啶虫脒快检试剂盒，均采用竞争法免疫胶体金检测技术，为避免评价结果成为厂家的宣传工具，简称为试剂盒1、试剂盒2、试剂盒3。

1.2 试剂与仪器

Waters UPLC/TQD液相色谱-质谱仪；电子天平；高速匀浆机；涡旋仪；振荡器；超声波清洗器。

1.3 方法

1.3.1 样品制备

取苹果样品2.5 kg经缩分后将其切碎，充分混匀后粉碎，制成待测样，放入分装容器中，于-20 ℃下保存，实验备用。

1.3.2 液相色谱-质谱法测定

按照《水果、蔬菜中啶虫脒残留的测定 液相色谱-串联质谱法》（GB/T 23584—2009）对待测样品进行提取、净化，并采用配有电喷雾电离源的液相色谱-质谱仪进行啶虫脒含量的测定。检测条件：流动相A为甲醇、B为0.1%的甲酸水溶液；流速0.30 mL·min-1；柱温 40 ℃；进样量 10 μL。

1.3.3 快检试剂盒测定

（1）试剂盒1。称取（1±0.1）g待测样本表皮于样品杯中（1 cm2左右，切勿将表皮切太碎，以免影响检测结果），加入2 mL配套啶虫脒稀释液，手摇混匀（禁止剧烈振荡），放置于水平实验台上，充分提取5 min，此样品杯内混合液体即为前处理液。从包装袋中取出检测卡，水平放置于桌面上，取450 μL啶虫脒稀释液到1.5 mL离心管中，加入前处理液50 μL混匀，再取540 μL啶虫脒稀释液到1.5 mL离心管中，然后依次加入前处理待测液60 μL混匀此液体即为待测液。用移液器吸取80 μL的待测液，垂直缓慢地滴加到检测卡加样孔中，液体流动时开始计时，反应5～6 min，根据示意图判定结果，其他时间判定无效。

（2）试剂盒2。冲洗掉样品表面的泥土，剪成1 cm2左右的碎片，称取1.0 g于30 mL透明瓶中，加入5 mL啶虫脒提取液，上下翻转振荡摇匀50次以上，静置2 min，待测。使用前将检测卡和待测样本溶液恢复至室温。从包装袋中取出试纸条，水平放置，用移液枪移取100 μL待测液于微孔中，反复吹打3～5次，混合均匀，静置3 min，用一次性吸管将微孔待测液滴于加样孔中，加样后开始计时，5～8 min即可观察结果，超过8 min后判读无效。

（3）试剂盒3。称取1 g待测样品于5 mL刻度离心管中，加入1 mL啶虫脒稀释液，充分振荡混匀2 min。使用前将检测卡和待测样本溶液恢复至室温。从包装袋中取出金标微孔，垂直加入4滴待测液，2 min后用滴管将微孔中的待测液混匀。从包装袋中取出检测卡，将检测卡平放，用一次性吸管将微孔待测液全部滴加到检测卡加样孔中，加样后开始计时，8～10 min即可观察结果，10 min后判读无效。

1.4 数据处理

依据《食品快速检测方法评价技术规范》计算实验所用试剂盒的灵敏度、特异性、假阴性率、假阳性率、显著性差异和相对准确度，使用Mcirosoft Excel 2010对数据进行整理分析。

2 结果与分析

2.1 苹果中啶虫脒农药残留的测定结果

参考《水果、蔬菜中啶虫脒残留的测定 液相色谱-串联质谱法》（GB/T 23584—2009）对样品进行啶虫脒残留的测定，结果显示未检出，说明在市场销售环节的苹果没有啶虫脒残留。

采用3个不同公司生产的快检试剂盒对阿克苏市市面销售的苹果样品进行啶虫脒残留量的检测。结果显示，3种啶虫脒快检试剂盒检测结果均为阴性，该结果与啶虫脒国家标准检测方法结果一致。

2.2 快检试剂盒的评估

2.2.1 试剂盒1的适应性评估

用空白作为阴性对照，将检测卡平放在桌面上，吸取啶虫脒待测液，缓慢滴加80 μL（约3滴）于加样孔中，开始计时，在5～6 min时读取结果。样品进行加标，浓度梯度分别为 0 mg·kg-1、0.25 mg·kg-1、0.30 mg·kg-1、0.50 mg·kg-1和 1.00 mg·kg-1。此试剂盒的检出限为0.5 mg·kg-1，≥0.5 mg·kg-1为阳性样品，＜0.5 mg·kg-1为阴性样品，对同一浓度样品进行10次检验。

由表1可知，通过对苹果样品添加系列啶虫脒标准溶液，试剂盒的检出限为0.5 mg·kg-1，样品在0.3 mg·kg-1时就开始显色。依据《食品快速检测方法评价技术规范》计算此试剂盒的假阳性率、假阴性率、灵敏度、特异性和显著性差异，此试剂盒灵敏度100%，特异性66.67%，假阴性率0，假阳性率33.33%，显著性差异8.1，相对准确度80%。

表1 试剂盒1苹果中添加啶虫脒的显色情况表

2.2.2 试剂盒2的适应性评估

以空白作为对阴性对照，用移液枪移取100 μL待测液于微孔中，反复吹打3～5次。混合均匀，静置3 min，用一次性吸管将微孔待测液滴于加样孔中，加样后开始计时，5～8 min后观察结果。样品进行加标，浓度梯度分别为 0 mg·kg-1、0.1 mg·kg-1、0.2 mg·kg-1、0.4 mg·kg-1和 1.0 mg·kg-1。 此 试 剂 盒 的 检 出 限 为0.2 mg·kg-1，≥ 0.2 mg·kg-1即为阳性样品。对同一浓度进行10次检验。

由表2可知，通过对苹果样品添加系列啶虫脒标准溶液，试剂盒的检出限为0.2 mg·kg-1，样品在0.2 mg·kg-1开始显色。依据《食品快速检测方法评价技术规范》计算此试剂盒的假阳性率、假阴性率、灵敏度、特异性和显著性差异，结果为此试剂盒的假阳性率0、假阴性率0、灵敏度100%、特异性100%、显著性差异0及相对准确度为100%。

表2 试剂盒2苹果中添加啶虫脒的显色情况表

2.2.3 试剂盒3的适应性评估

以空白作为阴性对照，从包装袋中取出检测卡，将检测卡平放，用一次性吸管垂直滴加3滴于加样孔中，加样后开始计时，10 min可观察结果。样品进行加标，浓度梯度分别为 0 mg·kg-1、0.25 mg·kg-1、0.50 mg·kg-1、0.80 mg·kg-1和 1.00 mg·kg-1。此试剂盒的检出限为0.5 mg·kg-1，≥0.5 mg·kg-1为阳性样品，＜0.5 mg·kg-1为阴性样品，对同一浓度样品进行10次检验。

由表3可知，试剂盒的检出限为0.5 mg·kg-1，样品在0.25 mg·kg-1时开始显色，依据《食品快速检测方法评价技术规范》计算此试剂盒的假阳性率、假阴性率、灵敏度、特异性及显著性差异，结果为假阳性率50%、假阴性率0、灵敏度100%、特异性50%、显著性差异8.1及相对准确度80%。

表3 试剂盒3苹果中添加啶虫脒的显色情况表

3 结论与讨论

通过采用啶虫脒的国家标准检测方法和啶虫脒的的快检试剂盒对阿克苏市售苹果样品进行检测，检测结果均为未检出。对苹果样品添加不同浓度的啶虫脒标准物质，以试剂盒的检出限区分阴性样品、阳性样品，按《食品快速检测方法评价技术规范》评估啶虫脒快检试剂盒的灵敏度、特异性、假阴性率、假阳性率、显著性差异和相对准确度，结果表明试剂盒2的相对准确度较高，灵敏度、特异性较强。

根据《食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量》（GB 2763—2021），啶虫脒在苹果中的限量要求是0.8 mg·kg-1，试剂盒1及试剂盒2的检出限为0.2 mg·kg-1，试剂盒 3 的检出限为 0.5 mg·kg-1，3 种试剂盒的检出限均在国家标准要求之下，且3种试剂盒在检出限以上均呈阳性，因此此3种啶虫脒快检试剂盒均适用于开展苹果中啶虫脒的快速筛查。