微小RNA-17-5p在食管鳞癌中的表达及其对食管鳞癌细胞增殖和侵袭的影响

吴占辉　武慧杰　周宏杨　王锐　杨青山　郭新鹤　张一然

摘要：目的 分析微小RNA-17-5p在食管鳞癌中的表达及其对食管鳞癌细胞增殖和侵袭的影响。方法 选择实时荧光定量对ESCC组织以及细胞中miR-17-5p表达进行检测，采用双荧光素酶报告实验分析miR-17-5p与PBL2直接的相互作用，分析其在食管鳞癌细胞中表达。结果 食管鳞癌组织中miR-17-5p表达水平比正常食管上皮组织高（P<0.05）。结论 食管鳞癌发生与发展过程中miR-17-5p均有参与，有望成为食管鳞癌潜在的分子治疗靶点。

关键词：RNA-17-5p;食管鳞癌;增殖和侵袭

微小RNA属于内源性非编码RNA分子之一。每一个miRNA分子中存在的潜在靶基因数量较多，多数mRNA均具有一个被miRNA结合的进化保守序列。相关研究得出，多个生物学过程均由miRNA的参与，与疾病进展和发展之间关系密切，尤其是肿瘤疾病，大部分miRNA有望成为治疗和评估肿瘤预后的潜在分子靶点。近些年，临床越来越关注miR-17-5p作为癌性的miRNA分子，本次研究主要检测食管鳞癌组织与细胞当中miR-17-5p表达，对其相关细胞增殖和侵袭影响进行观察和分析。

1、材料与方法

1.1材料

（1）细胞系：食管鳞癌细胞KYSE520、KYSE70、KYSE450、TE1、Eca109以及EC9706。（2）临床资料：选取本院2021年1月-2021年11月在本院手术当中切除的食管鳞癌标本53例。入选患者手术之前均未接受过放化疗治疗，其中男性患者数量为35例，女性患者数量为18例，平均年龄（57.24±7.68）岁。

1.2方法

（1）培养：在含有10%胎牛血清的RPMI1640培养基中放置正常食管上皮细胞和食管鳞癌细胞，将其置于37℃、5%CO2条件下培养。（2）转染：根据相关说明书将其转染为TE1与EC9706细胞。（3）实时反应：采用试剂盒提取食管鳞癌细胞和组织RNA，利用试剂盒进行逆转录，检测miR-17-5p表达水平。（4）检测：使用细胞裂解液对TE1、EC9706细胞总蛋白进行提取，通过相应技术分离蛋白。（5）检测细胞增殖：将转染的TE1、EC9706细胞制成单细胞悬液，在96孔板中接种，每孔2000细胞，采用酶标仪对吸光度（A）测定，然后采用相应软件绘制细胞生长曲线。（6）染色：收集细胞之后姐终于96孔板中，每孔4000细胞，按照1000：1进行稀释，然后在其中加入TritonX-100、甘氨酸以及细胞固定液，30min之后除去反应液，漂洗，通过显微镜观察染色结果。（7）预测靶点：利用miRDB、starBase以及TargetScan等预测软件预测miR-17-5p可能靶基因。

1.3统计学分析

采用GraphPad Prism 6.0统计学软件分析数据，计量资料用（`x±s）表示，组间比较方差用独立样本的t检验，以P<0.05表示差异具有统计学意义。

2.结果

2.1miR-17-5p在ESCC细胞和组织中的表达

食管鳞癌组织中miR-17-5p表达水平比正常食管上皮组织高，比较具有显著差异（P<0.05）。详见表1。

3.结论

miRNA异常表达参与肿瘤的发展和转移，与患者生存存在非常密切的关系。在不同肿瘤当中miRNA可能发挥抑癌基因或者癌基因功能，临床研究中存在应用潜力较大。相关研究得出，miR-17-5p与人乳腺癌转移和进展之间存在非常密切的关系，通过相关靶向信号途径发挥相应的作用。

miRNA作为治疗制剂的最主要特点为具有靶向多于1个基因的潜能，而且特定的miRNA可能因为靶向调控基因不同所发挥的生物学功能也存在一定差异，所以需要注意调控miRNA靶向基因的意义十分重要。本次研究采用相关软件预测靶基因，发展miR-17-5p中RBL2是一个非常重要的调控靶点，根据报告显示转染后其荧光素酶活性得到有效降低。除此之外，为进一步证实miR-17-5p中RBL2是直接作用靶点，本次研究采用回复实验，联合应用miR-17-5p和RBL2 siRNA抑制剂，结果得出RBL2 siRNA可部分逆转miR-17-5p所引发的食管鳞癌细胞侵襲和增殖能力降低，得出食管鳞癌的发生和发展过程中miR-17-5p与RBL2可能共同参加。

综上所述，在食管鳞癌细胞和组织当中miR-17-5p呈高表达，其与食管鳞癌的TNM高分期、淋巴结转移以及患者预后不良存在一定关系。miR-17-5p抑制剂显著下调食管鳞癌细胞当中的miR-17-5p表达，表达下调使食管鳞癌细胞侵袭和增殖能力得到显著抑制。

参考文献：

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[2]许瀚，孟祥瑞，周悦，王峰.微小RNA-17-5p在食管鳞癌中的表达及其对食管鳞癌细胞增殖和侵袭的影响[J].中华肿瘤杂志，2020（02）：105-106-107-108-109-110-111-112-113.

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项目来源于：2021年承德市科学技术研究与发展计划项目（项目编号：202109A182）