hnRNP A2/B1对乳腺癌细胞生物学行为影响的作用机制研究

艾红艳?黄彦

摘要：目的：探究hnRNP A2/B1对乳腺癌细胞生物学行为影响的作用机制。方法：将2020年1月-2021年1月接诊的100例乳腺癌分为空白对照组（未转染）、阴性对照组（转染阴性对照质粒）和hnRNP A2/B1下调组（转染shRNA-hnRNP A2/B1干扰质粒）。质粒转染细胞后，观察绿色荧光蛋白的表达，以鉴定转染效果。MTT法和FCM法分别检测各组细胞的增殖活力、周期分布和早期凋亡率，Transwell细胞迁移与侵袭实验。实时荧光定量PCR检测各组细胞hnRNP A2/B1、p-PI3K、p-AKT mRNA表达，Western Blot法检测各组细胞p-PI3K、p-AKT 蛋白表达。结果：细胞p-PI3K、p-AKT 蛋白表达结果表明，shRNA-hnRNPA2/B1质粒下调组低于阴性对照组与空白对照组，P<0.05。结论：hnRNP A2/B1对乳腺癌细胞生物学行为影响在于p-PI3K、p-AKT 蛋白。

关键词：hnRNP A2/B1;乳腺癌细胞;生物学行为;影响;作用机制

【中图分类号】R737.9 【文献标识码】A 【文章编号】1673-9026（2022）09--01

近期研究表明，乳腺癌的发展以及其对治疗的反应与大量特殊的剪切癌基因以及肿瘤抑制因子等相关。选择性剪切的过程在癌症中可产生明显的错误调控，并且有研究显示其对癌细胞亚型的转变具有明显作用。甚至，在许多癌症中一些剪接体突变的元件也被预测可以导致驱动突变，这为剪接因子在癌症发展过程中的重要作用提供了有力的依据。本文探究hnRNP A2/B1对乳腺癌细胞生物学行为影响的作用机制。以细胞培养、质粒转染、MTT法检测细胞活力、FCM法检测细胞周期分布和细胞凋亡情况、Transwell细胞迁移与侵袭实验、实时荧光定量PCR检测各组细胞hnRNP A2/B1、p-PI3K、p-AKT mRNA表达、Western Blot法检测各组细胞p-PI3K、p-AKT 蛋白表达为目标开展相应的研究。

1 资料与方法

1.1研究对象

选取本院2020年1月-2021年1月接诊的100例乳腺癌患者为研究对象，依照细胞复苏、培养与动存结果划分内未转染空白对照组、转染阴性质粒的阴性对照组、转染shRNA-hnRNPA2/B1质粒的下调组。

实验细胞、试剂：人乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞株购自中国科学院上海生命科学研究院细胞库，胎牛血清、MEM培养液、青霉素和链霉素均购自美国HyClone公司，RNA提取液、RNA反转录试剂盒、引物合成和DNA聚合酶均购自日本TaKaRa公司，兔抗人hnRNP A2/B1、p-Akt和p-PI3K单克隆抗体均购自美国Santa Cruz公司，辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔和山羊抗小鼠二抗均购自北京中杉金桥生物技术有限公司，RIPA蛋自裂解液、蛋自质印迹法配胶试剂盒和ECL液均购自上海碧云天生物技术有限公司。

1.2研究方法

MTT法检测细胞活力、FCM法检测细胞周期分布和细胞凋亡情况、实时荧光定量PCR检测各组细胞hnRNP A2/B1、p-PI3K、p-AKT mRNA表达、Western Blot法检测各组细胞p-PI3K、p-AKT 蛋白表达。

1.3统计学分析

采用SPSS21.0统计软件进行数据分析，计量资料以x±s表示，组间比较采用单因素方差分析，P<0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组细胞p-PI3K、p-AKT 蛋白表达情况

2.2 细胞迁移与侵袭实验

3 讨论

hnRNPA2B1是四跨膜蛋白超家族（ Tetraspanin， TM4SF）中的重要组成成员。TM4SF 是存在于真核细胞生物胞膜上的糖蛋白家族， 至少含有 33 个成员。编码的蛋白含有 200-350 个氨基酸，相对分子量为 21～28kd。该家族蛋白通常由 4个高度疏水的保守跨膜结构域（transmemberane domain， TM）、 1 个小胞外环、 1个大胞外环和 1 条胞内短氨基酸序列组成。小胞外环称作 EC1，由 13～31 个残基组成，大胞外环称作 EC2，其长度和氨基酸序列具有多样性。胞外区带有保守的氨基酸模体以及半胱氨酸残基，半胱氨酸残基对于 TM4SF 与整合素等结合形成的二硫键十分重要。TM4SF 区别于其他四次跨膜蛋白最显著的特征是 4 个 TM包含一些高度保守的氨基酸残基。在细胞上 TM4SF 蛋白以同型和异型二聚体共价 连 接 的 方 式 存 在 ， 并 以 此 为 基 础 形 成 跨 膜 四 超 分 子 富 集 区 域（tetraspanin-enriched membrane microdomains TEMs），招募伴侣蛋白形成不同功能的复合物，该家族蛋白可以与整合素，生长因子受体等在细胞表面相互鏈接，形成庞大的四次跨膜蛋白网络，在信号传导中发挥重要作用。 hnRNPA2B1是四次跨膜蛋白网络的核心分子。

综上所述，hnRNP A2/B1与众多疾病都存在一定的相关性，且对其作用机制在于蛋白质上。

参考文献：

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