红景天苷对3T3-L1脂肪细胞分化及糖代谢的影响

黄亿元?尹海鹰?卢孟密?邓玉风?石文文?周汉京

摘要：目的探究红景天苷对3T3-L1脂肪细胞分化及糖代谢的影响，对改善糖代谢的可能机制进行分析。方法1）采取比色法分析脂细胞分化程度;2）检测红景天苷干预的脂肪细胞对3H-葡萄糖的摄取情况;3）RT-PCR检测PPAR-γ与C/EBG-αmRNA的表达。结果1）OD值：红景天苷组（0.44±0.12）<对照组（0.54±0.14）<罗格列酮组（0.73±0.13）（P<0.05）。2）3H-葡萄糖摄取率：对照组（101.69%）<红景天苷组（112.35%）<罗格列酮组（185.86%）（P<0.05）。3）PPAR-γ表达：红景天苷组（0.27±0.07）<对照组（0.43±0.09）<罗格列酮组（0.71±0.12）;C/EBP-αmRNA表达：红景天苷组（0.38±0.10）<对照组（0.67±0.16）<罗格列酮组（1.09±0.23）（P<0.05）。结论红景天苷能抑制脂肪细胞分化和相关基因的表达，促进3H-葡萄糖的摄取。

关键词：红景天苷;3T3细胞;细胞分化;糖代谢

【中图分类号】R587.1 【文献标识码】A 【文章编号】1673-9026（2022）09--01

Abstract：Objective To explore the effect of salidroside on the differentiation and glucose metabolism of adipocytes，and to analyze the possible mechanisms of improving glucose metabolism.Methods 1）Lipocell differentiation was used to analyze by the colorimetric method;2）3H-glucose uptake of adipocytes affected by salidroside;3）The expression of PPAR-and C/EBG-αmRNA was determined by RT-PCR.Results 1）OD：salidroside group（0.44±0.12）

Key words：Salidroside;3T3 cells;Cell differentiation;Sugar metabolism

糖尿病的發生发展与糖脂代谢紊乱有关，10%-20%肥胖易出现糖尿病[1]，60%糖尿病者超重，50%被定义为肥胖[2]。因此，肥胖是能量代谢紊乱的必然结果。红景天苷具有抗氧化作用、保护心脑血管等作用，参与成熟脂肪细胞与环境间的物质交换[3]，具有调控脂肪细胞分化的能力，但其机制尚未阐明。本文探究红景天苷对脂肪细胞分化和糖脂代谢的作用。

1资料与方法

1.1材料

3T3-L1细胞株（American Type Culture Collection）、红景天苷（复旦大学药理研究室）、马来酸罗格列酮（浙江万马医药化工有限公司）、3H-葡萄糖（北京原子高科核技术应用股份有限公司）、DMEM（Gibco）、牛血清白蛋白（BSA;Gibco）、油红O（Sigma）、AMV第一链cDNA合成试剂盒（Bio Basic）和PCR扩增试剂盒（上海生工公司）。

1.2方法

（1）3T3-L1细胞培养及分化依照文献资料[4]进行3T3-L1前脂肪细胞培养和诱导分化。将分化成熟的脂肪细胞用含0.2%的BSA的DMEM培养基培养12h后，分别给予1mg/L红景天苷、5μmol/L罗格列酮进行干预，对照组未作任何干预。

（2）检测3T3-LI脂肪细胞3H-葡萄糖摄取干预24h后，根据试剂盒说明书检测3H-葡萄糖摄取率。葡萄糖摄取率=各组/正常对照%。

（3）油红O染色分析3T3-L1前脂肪细胞的分化情况干预第8天，行油红O染色：异丙醇处理，吸光度（CD）值：570nm波长检测，以定量分析分化程度。

（4）RT-CRP检测PPAR-γ、C/EBP-αmRNA表达干预第8天，抽提RNA。cDNA：AMV第一链cDNA合成试剂盒逆转录。基于小鼠PPAR-γ、C/EBP-α、β-action序列（Genebank公布），设计上下游引物（表1），PCR扩增后，2%琼脂糖凝胶电泳，经Synegen图像分析系统扫描，利用Gene Tool软件进行定量分析。

1.3统计学分析

运用SPSS24.0软件进行分析，计数资料以（%）表示，采用方差进行检验;计量资料以均数±标准差表示，符合正态分布的计量资料采用t检验，不符合正态分布的采用秩和检验;α=0.05，P<0.05说明存在统计学差异性。

2结果

2.1紅景天苷对3T3-L1脂肪细胞3H-葡萄糖摄取的影响

3T3-L1脂肪细胞3H-葡萄糖摄取率：空白对照组101.69%<红景天苷组112.35%<罗格列酮对照组185.86%（P<0.05;表2），提示红景天苷能提高3T3-L1脂肪细胞3H-葡萄糖摄取情况。

2.2红景天苷对细胞分化的影响

OD值：红景天苷组（0.44±0.12）<空白对照组（0.54±0.14）<罗格列酮对照组（0.73±0.13）（P<0.05;表3），提示红景天苷能阻滞细胞内脂质积聚，抑制前脂肪细胞向成熟细胞分化，而罗格列酮能促进脂肪细胞分化。

2.3红景天苷对脂肪细胞PPAR-γ和C/EBP-αmRNA表达的影响

红景天苷对PPAR-γ、C/EBP-αmRNA表达无明显的促进作用，而罗格列酮具有明显的促进作用（P<0.05;表4）。

3讨论

人体中，脂肪组织属能量贮备系统，具有维持机体能量代谢稳定的作用。若脂肪组织堆积如分化异常，进而诱发肥胖、胰岛素抵抗等发生。药物可影响脂肪细胞分化，对糖尿病、高血压等与肥胖、胰岛素抵抗相关疾病和（或）代谢性疾病的防治具有重要的临床意义[5]。

罗格列酮为噻唑烷二酮类药物，具有促进脂肪细胞分化、PPAR-γ表达的作用，常用于胰岛素抵抗疾病的治疗。与前脂肪细胞相比，成熟脂肪细胞的表面广泛分布胰岛素受体，能表达葡萄糖转运载体Glut-4，促进葡萄糖转运，提高外周组织胰岛素的稳定性[6]。但是罗格列酮易加重脂肪积聚，进而增重，引起肥胖。然而，肥胖与胰岛素抵抗相矛盾。因此，探讨具能改善胰岛素功能且不增加体重的防治代谢性疾病的药物具有重要意义。

脂肪细胞分化是一个复杂的过程，其中有分化转录因子的作用[7]。PPARs、C/EBPs是调控脂肪细胞分化的主要转录因子，其表达与肥胖、糖尿病等疾病的发生发展具有重要的作用[8]。PPARs由3个亚型（不同基因编码）组成，分别是PPAR-α、PPAR-δ和PPAR-γ。C/EBPs包括C/EBP-α、C/EBP-γ等，其中EBP-α是促进脂肪细胞分化的关键因子，促进PPAR-γ高水平表达，维持分化细胞的表型。

红景天具有抗炎、强心、抗过氧化、降血糖等作用，促进脂肪细胞葡萄糖的摄取和利用，对糖尿病、脑缺血再灌注时自由基损伤等疾病具有显著的治疗效果。本研究显示红景天苷能抑制脂肪细胞内脂质积聚，遏制脂肪细胞分化，促进葡萄糖摄取。这可能是脂肪细胞通过抑制RRAR-γ和C/EBP-αmRNA的表达，从而抑制脂肪细胞分化，促进Glut-4转运，增强糖代谢。

综上所述，红景天苷既能提高3T3-L1细胞葡萄糖摄取，又能维持体重稳定，适用于肥胖、胰岛素抵抗等相关疾病的治疗。

参考文献：

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[6]吴冬梅，张晓东.荷叶水提物对3T3-L1前体脂肪细胞增殖、凋亡及前体脂肪细胞、成熟脂肪细胞IL-6 mRNA、TNF-αmRNA的影响[J].中医研究，2020，33（09）：57-60.

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基金项目：2018年度广西高校中青年教师基础能力提升项目（2018KY0441）