基于网络药理学探讨当归芍药散治疗糖尿病肾病的作用机制

2022-04-28 08:16何晓翠周卓宁
大众科技 2022年3期
关键词:芍药药理学靶点

何晓翠 周卓宁 

基于网络药理学探讨当归芍药散治疗糖尿病肾病的作用机制

何晓翠1周卓宁2

(1.广西中医药大学,广西 南宁 530000;2.广西中医药大学附属瑞康医院,广西 南宁 530000)

目的:通过网络药理学方法探讨当归芍药散治疗糖尿病肾病(DKD)的机制。方法:使用TCMSP数据库检索当归芍药散的活性成分,并利用PubChem数据库与Swiss Target Prediction平台收集当归芍药散6味中药活性成分的作用靶点;通过OMIM、DrugBank、TTD、GeneCards数据库获取糖尿病肾病的靶点;使用STRING平台构建PPI网络图;基于Cytoscape3.7.0软件,构建当归芍药散-活性成分-DKD作用靶点网络图;运用DAVID 6.8数据库对当归芍药散-DKD共同靶点进行GO功能与KEGG通路富集分析。结果:筛选出当归芍药散治疗DKD的活性成分共20个,关键靶点361个,生物过程共694条,信号通路共128条。结论:当归芍药散通过多种成分、多靶点、多途径、多种通路发挥其对糖尿病肾病的治疗作用。

网络药理学;当归芍药散;糖尿病肾病;靶点预测

引言

糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)是常见的慢性肾脏病之一,由糖尿病导致的慢性肾脏结构改变引起[1]。糖尿病肾病随着病程的迁延,容易发展为死亡率较高的终末期肾病。根据2019年公布的统计研究数据,世界范围内的糖尿病患病人数已达到4.63亿,这一数据还在逐年快速增长,预计2045年将达到7亿[2]。随着糖尿病患病人数的逐年增加,DKD这个公共卫生问题将愈发严重。

西医对DKD的治疗包括对生活和饮食习惯的调整、对血糖与血压等基础疾病的调控,以及肾脏替代治疗等。祖国医学将DKD归属于“消渴”“水肿”“虚劳”“关格”等范畴,其基本病机为虚、瘀、浊,治法以补虚、活血通络、温阳泻浊为主[3]。当归芍药散出自《金匮要略》,原方以当归、芍药、川芎、茯苓、泽泻、白术6味中药组成,具有养血、祛瘀、利水的功效。近年来关于当归芍药散的动物试验研究表明,该方可能通过调节糖尿病大鼠的氧化应激水平,从而显著减轻其肾脏病理损伤程度[4]。此外,已有的临床研究表明,当归芍药散能有效改善DKD患者的水肿症状,减少尿蛋白,增加内生肌酐清除率,从而延缓DKD疾病的进展[5-7]。

尽管前期研究与实践已证实当归芍药散对治疗DKD确有疗效,但由于中药成分复杂,当归芍药散治疗DKD机制尚未明确。网络药理学是一门具有系统性、整体性特点的新兴学科[8],它与祖国医学整体观念和辨证论治的独特优势有相似之处。本研究使用网络药理学方法及相关数据库与软件,对当归芍药散治疗DKD的活性成分、作用靶点与作用通路进行分析,旨在探讨当归芍药散治疗糖尿病肾病的机制,为后期当归芍药散治疗DKD的基础研究与临床应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 当归芍药散活性成分及靶点的收集

将当归芍药散中的当归、白芍、川芎、茯苓、泽泻、白术6味中药上传至中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP,https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php)进行检索,筛选条件设置为口服生物利用度(Oral Bioavailability,OB)≥30%、类药性(Drug-Likeness,DL)≥0.18,获取当归芍药散6味中药的活性成分,将获取的成分名称输入PubChem数据库(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/),下载当归芍药散中活性成分分子结构的SDF结构式,并上传至Swiss Target Prediction平台(http://www.swisstargetprediction.ch/),获取各活性成分的潜在靶点信息。

1.2 糖尿病肾病作用靶点的收集

以“diabetic kidney disease”和“diabetic nephropathy”为检索词,分别在OMIM数据库(http://www.omim.org)、DrugBank数据库(https://go.drugbank.com/)、TTD数据库(http://db.idrblab.net/ttd/)、GeneCards数据库(https://www.Genecards.org)进行检索,其中,GeneCards数据库检索到的靶点以Score中位数作为临界值,筛选出score值大于临界值的疾病潜在靶点,再将以上4个数据库获取的作用靶点进行整合并去重,得到糖尿病肾病的作用靶点。

1.3 当归芍药散药物-活性成分-DKD靶点的网络构建

将当归(DG)、白芍(BS)、川芎(CX)、茯苓(FL)、泽泻(ZX)、白术(BZ)6味中药的活性成分以及与DKD的共同作用靶点信息导入至Cytoscape 3.7.0软件,构建并导出当归芍药散药物-活性成分-DKD靶点网络图,探究当归芍药散与DKD作用靶点之间的联系。

1.4 蛋白质相互作用网络构建(PPI)

将当归芍药散的活性成分靶点信息与DKD作用靶点信息取交集,获取当归芍药散药物与DKD的共同作用靶点信息,据此绘制韦恩图。将获取的共同作用靶点信息上传至STRING平台(https://string-db.org/),选择物种来源为人,并选择最高置信度(0.900),其余参数保持默认值,获得当归芍药散治疗DKD的PPI网络图。使用Cytoscape3.7.0对PPI网络的tsv文件进行分析,将靶点以degree值由大到小排序,获取排名前10的靶点。

1.5 GO功能与KEGG通路富集分析

使用生物学信息注释数据库DAVID 6.8(https://david.ncifcrf.gov/)对当归芍药散治疗DKD的361个作用靶点进行基因本体论(Gene Ontology,GO)功能富集分析与京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析,并将当归芍药散治疗DKD的富集分析结果根据P值由小到大排序,绘制成表格。

2 结果

2.1 当归芍药散的活性成分及药物作用靶点

剔除6味中药中重复的活性成分,共获得当归芍药散的活性成分51个。其中,治疗DKD的活性成分共20个,包括β-谷固醇、茯苓酸、豆甾醇等(见表1)。在Swiss Target Prediction平台获得有效靶点共764个,去重后得到有效靶点400个。

表1 当归芍药散治疗DKD活性成分基本信息

续表1

FL3MOL000290Poricoic acid A(茯苓酸A)30.610.76 FL4MOL000287Eburicoic acid(齿孔酸)38.700.81 FL5MOL000282Stellasterol(星鱼甾醇)43.510.72 FL6MOL000279Cerevisterol(啤酒甾醇)37.960.77 FL7MOL00027316alpha-Hydroxydehydrotrametenolic acid(16α-羟基脱氢戊烯酸)30.930.81 FL8MOL000280Dehydrotumulosic acid(去氢土莫酸)31.070.82 FL9MOL000285Polyporenic acid C(猪苓酸C)38.260.82 泽泻ZX1MOL000862[(1S,3R)-1-[(2R)-3,3-dimethyloxiran-2-yl]-3-[(5R,8S,9S,10S,11S,14R)-11-hydroxy-4,4,8,10,14-pentamethyl-3-oxo-1,2,5,6,7,9,11,12,15,16-decahydrocyclopenta[a]phenanthren-17-yl]butyl]acetate35.580.81 ZX2MOL002464alpha-Glyceryllinoleate(单亚油酸甘油酯)37.180.30

2.2 糖尿病肾病相关靶点的收集

将检索的结果取并集后共获得DKD的相关靶点7579个。将当归芍药散的活性成分作用靶点与DKD的疾病靶点取交集,获得当归芍药散治疗DKD的作用靶点共361个(见图1)。

图1 当归芍药散活性成分作用靶点与DKD疾病靶点交集

2.3 当归芍药散-活性成分-DKD靶点的网络构建与分析

通过Cytoscape 3.7.0软件构建当归芍药散药物-活性成分-DKD靶点的网络图(见图2),图中,当归芍药散中6味中药用红色的圆形表示;当归芍药散治疗DKD的20个活性成分用绿色的六边形表示;361个当归芍药散与DKD的共同靶点用蓝色的菱形表示。通过对当归芍药散治疗DKD的作用靶点进行分析,结果表明,degree值排名前10的靶点为AR、CYP19A1、PTPN1、HSD11B1、ESR1、CYP17A1、SHBG、ESR2、NR1H3、CES2,推测这些靶点可能是当归芍药散治疗DKD的主要作用靶点。

DG:当归;BS:白芍;CX:川芎;BZ:白术;ZX:泽泻;FL:茯苓

2.4 PPI网络构建与分析

在STRING平台构建PPI网络并进行分析,其包含361个节点、1023条边,平均degree值为5.67,PPI富集P值小于1.0e-16。排名前10的靶点分别为SRC、HSP90AA1、MAPK3、PIK3R1、MAPK1、PIK3CA、AKT1、JAK2、EGFR、PLCG1(见表2),推测这些靶点可能是当归芍药散治疗DKD的关键靶点。

表2 当归芍药散治疗DKD的PPI网络中Degree值排名前10的靶点

2.5 GO功能与KEGG通路富集分析

通过进行GO功能富集分析,获得当归芍药散治疗DKD的GO条目共1008条,其中包括生物过程(BP)694条,细胞组成(CC)104条,分子功能(MF)210条。结果表明:当归芍药散治疗DKD相关性最大的生物过程有信号转导、蛋白质磷酸化、炎症反应、凋亡过程的负调节,细胞增殖的正向调控等,排名前10的条目见表3;当归芍药散治疗DKD相关性最大的细胞组成有质膜、质膜的组成部分、胞质溶胶、细胞表面、膜筏等;当归芍药散治疗DKD相关性最大的分子功能有蛋白激酶活性、药物结合、类固醇激素受体活性、酶结合等。推测当归芍药散治疗DKD可能与影响上述生物功能密切相关。通过KEGG通路富集分析得到当归芍药散治疗DKD的KEGG条目共128条,排名前20的条目见表4。结果表明,当归芍药散治疗DKD最显著的通路有神经活性配体-受体相互作用、肿瘤信号通路、前列腺癌、PI3K-Akt信号通路、胰岛素抵抗、cAMP信号通路等,推测当归芍药散可能通过上述通路治疗DKD。

表3 当归芍药散治疗DKD的GO功能富集分析BP结果

表4 当归芍药散治疗DKD的KEGG通路富集分析结果

3 讨论

糖尿病的微血管并发症众多,DKD作为并发症之一,其患病率不容小觑。根据已有的研究显示,DKD在病程较长的糖尿病患者中患病率为20%~40%[9,10]。在中医学中虽无DKD的病名,但历代医家早已对DKD的发病机理有所阐释,例如在《圣济总录》中提到:“消渴病久,肾气受伤,肾主水,肾气虚衰,气化失常,开阖不利,能为水肿。”此外,清代杰出的医家叶天士在《临证指南医案》中提出“初为气结在经,久则血伤入络”的论述,说明瘀血在DKD的发生发展中发挥着关键作用。因此,运用当归芍药散活血化瘀,健脾利湿的功效治疗DKD具有重要的研究意义。

本研究发现当归芍药散治疗DKD的关键成分有β-谷甾醇、谷甾醇、豆甾醇、丁子香萜、山柰酚、阿魏酸、茯苓酸、亚油酸乙酯等。现代药理学研究表明,β-谷甾醇、谷甾醇和豆甾醇均为活性植物甾醇,具有改善血糖和抗氧化的良好作用,在DKD的治疗中可显著降低尿素和肌酐水平[11-13]。山柰酚为天然黄酮类化合物,不仅可以抑制高血糖诱导的RhoA活化[14],而且可以防止异位脂质沉积和内质网应激,从而通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)介导的脂噬作用恢复胰腺β细胞的功能[15]。阿魏酸作为一种酚类化合物,具有调节血糖、血脂、抗氧化和抗炎等多种功效,并且通过提高超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、过氧化氢酶(CAT)活性,可以显著减轻肾组织病理损伤,起到肾脏保护作用[16]。Ran Choi等[17]实验发现阿魏酸通过减轻氧化应激和炎症反应对DKD起到一定的治疗作用,其不仅能有效改善糖尿病大鼠的血糖水平,还可显著降低大鼠的尿白蛋白与尿肌酐的比值。Dan-Qian Chen等[18]实验发现茯苓酸A通过激活AMPK和抑制Smad3,从而抑制肾纤维化,改善肾功能。综上所述,当归芍药散治疗DKD是由多种成分发挥作用的。

通过PPI网络分析结果可知当归芍药散治疗DKD的关键受体可能是SRC、HSP90AA1、MAPK3、PIK3R1、MAPK1、PIK3CA、AKT1、JAK2、EGFR、PLCG1等。已有研究表明,SRC活化在肾损伤后纤维化的形成起着重要作用,通过抑制SRC可显著抑制体内输尿管梗阻诱导的损伤肾脏巨噬细胞-肌成纤维细胞的转化[19]。Iolanda Lazaro等[20]证明通过抑制HSP90可以减弱NF-κB和STAT信号通路调节的细胞过程,从而改善糖尿病相关的肾损伤。PIK3CA,PIK3R1属于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3Ks)的脂酶家族,而PI3K/Akt信号通路与肾小管上皮细胞转分化和系膜细胞增生密切相关,通过激活PI3K/Akt信号通路,可减轻DKD小鼠足细胞凋亡所致的肾损伤[21]。王蕊等[22]通过动物研究发现,川芎嗪通过下调JAK2蛋白的表达,可抑制JAK2/STAT3信号通路的激活,从而减轻DKD大鼠的炎症反应。黄恬等[23]证实通过降低DKD大鼠肾组织的EGFR活化,进而抑制EGFR/ TGFβ1-Smad2/3信号通路激活,从而达到抑制DKD肾纤维化和氧化反应的作用。因此,推测当归芍药散治疗DKD是通过激活多个靶点来实现的。

GO功能富集分析结果表明,当归芍药散通过在不同程度上影响多种生物学进程,从而达到治疗DKD的目的,如信号转导、炎症反应、蛋白质磷酸化、凋亡过程的负调节、细胞增殖的正向调控等。已有研究表明,细胞内存在多种信号转导方式与途径,例如MAPK信号转导通路与DAG/PKC信号转导通路等均与DKD的发生与发展有着密切关联[24-26]此外,DKD的发生和发展与炎症反应密切相关,这其中不但有炎症介质的密切参与、炎症信号通路的激活,而且趋化因子的释放又促进了免疫细胞的进一步的浸润,从而加剧了肾损伤[27,28]。

KEGG通路富集分析结果表明,当归芍药散治疗DKD最显著富集的通路是:PI3K-Akt信号通路、神经活性配体-受体相互作用、胰岛素抵抗、cAMP信号通路、肿瘤信号通路、前列腺癌等。已有的研究表明,Mei Xue等[29]通过激活PI3K-Akt信号通路能明显抑制DKD患者肾小管上皮间质的转化。此外,肾小管间质细胞外基质的积聚可能是通过激活PI3K-Akt信号通路来介导的,这一机制在DKD的发生发展中起着重要作用[30]。Undurti N Das等[31]研究发现,在神经活性配体-受体相互作用等通路的相关基因表达方面,糖尿病患者与正常人相比存在显著差异。此外,这些通路相关基因的表达通过抑制炎症对2型糖尿病的治疗发挥着重要作用。黄倩等[32]发现通过激活cAMP信号通路,对DKD的肾纤维化和肾小管上皮细胞的增殖活化具有抑制作用,从而延缓疾病的进展。

本研究基于网络药理学技术研究显示当归芍药散可能是以β-谷固醇、豆甾醇、茯苓酸等活性成分调控SRC、HSP90AA1、MAPK3、PIK3R1、PIK3CA等靶点,以及调控PI3K-Akt信号通路、前列腺癌、胰岛素抵抗等通路,达到降低血糖水平、减轻氧化应激、抑制肾纤维化,改善肾功能等作用,从而延缓DKD的发展。另外,本研究发现当归芍药散可能在高胆固醇血症、前列腺癌以及心血管疾病等方面有良好疗效,但该方面研究仍较少。因此,本研究不仅为当归芍药散干预DKD的进一步实验研究提供了参考依据,而且为当归芍药散在临床上治疗DKD也提供了理论依据。但本研究仍存在一定的不足,例如在数据的收集上主要依赖于已有的数据库,后期需要开展更多的动物实验研究以及临床试验进行进一步的验证。

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Study on the Mechanism of Danggui Shaoyao Powder in the Treatment of Diabetic Kidney Disease Based on Network Pharmacology

Objective: To explore the mechanism of Danggui Shaoyao Powder in the treatment of diabetic kidney disease (DKD) through network pharmacology. Methods: TCMSP database was used to search the active components of Danggui Shaoyao powder, and the action targets of 6 active components of Danggui Shaoyao powder were collected by PubChem database and Swiss Target Prediction platform; the targets of diabetic kidney disease were obtained through OMIM, DrugBank, TTD and GeneCards databases. Use STRING platform to build PPI network diagram; based on Cytoscape 3.7.0 software to construct the target network diagram of Danggui Shaoyao powder-active ingredient-DKD; David 6.8 database was used to analyze the go function and KEGG pathway enrichment of the common target of Danggui Shaoyao powder-DKD. Results: A total of 20 active components, 361 key targets, 694 biological processes, and 128 signal pathways of Danggui Shaoyao powder in the treatment of DKD were screened. Conclusion: Danggui Shaoyao powder can play a role in the treatment of diabetic kidney disease through multiple components, multiple targets, multiple channels and multiple pathways.

network pharmacology; Danggui Shaoyao powder; diabetic kidney disease; target prediction

R692

A

1008-1151(2022)03-0072-06

2022-01-14

广西中医药管理局项目(GZBZ21-5);广西卫健委重点课题(S201419_07)。

何晓翠(1996-),女,广西中医药大学在读硕士研究生,研究方向为内分泌代谢性疾病的临床治疗与研究。

周卓宁(1968-),女,广西中医药大学附属瑞康医院主任医师,教授,硕士研究生导师,研究方向为内分泌代谢性疾病的临床治疗与研究。

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