抗核抗体检测和抗核抗体谱检测在复发性流产诊断中的应用分析

陆子贇 岳朝艳 应春妹

【摘要】目的：通过对复发性流产（RSA）患者抗核抗体（ANA）检测结果的分析，探讨 ANA 检测与 RSA 的相关性。方法：采用间接免疫荧光法（IIF）测定2020年7～12月收集的1432例 RSA 患者（观察组）与同时期无不良孕产史的134例正常孕妇（对照组）的 ANA，采用免疫印迹法（LIA）测定其 ANA 谱。比较两个组别检测结果，并分析其与 RSA 关系。结果：观察组中检出 ANA阳性292例（20.39%）。对照组检出 ANA阳性9例（6.72%）。观察组常见 ANA 核型为颗粒型（36.32%）和致密型（32.89%）。观察组 ANA 谱检测，各类抗体均有检出，其中抗 Ro-52抗体（24.55%）和抗 SS-A 抗体（24.19%）检出率最高， ANA 阴性者也有 ANA 谱检出。ANA 与 ANA 谱联合检测，两种方法联合检测阳性率达到27.65%，两种方法联合检测总体符合率达到.79.40%，观察组 ANA 和 ANA 谱联合检测的灵敏度为 98.49%，特异度为99.61%;观察组联合检测阳性率显着高于对照组，差异有统计学意义（χ2=20.47， P<0.01）。结论： ANA及 ANA谱联合检测有助于 RSA 的临床诊断。

【关键词】复发性流产;抗核抗体;抗核抗体谱

【中图分类号】R446【文献标识码】A 【文章编号】2096-5249（2022）06-0135-05

Analysis of application of antinuclear antibody detection and an- tinuclear antibody spectrum detection in diagnosis of recurrent abortion

Lu Zi-yun， Yue Chao-yan， Ying Chun-mei△

Department of Laboratory Medicine， Obstetrics and Gynecology Hospital Affiliated to Fudan University， Shanghai 200011， China

【Abstract】Objective：To investigate the correlation between ANTinuclear antibody（ANA）and RSA in pa- tients with recurrent abortion（RSA）. Methods：Indirect immunofluorescence assay（IIF）was used to measure ANA in 1432 RSA patients（observation group）collected from July to December 2020 and 134 normal pregnant women（control group）without adverse pregnancy history during the same period. The results of the two groups were compared，and the relationship between RSA and the two groups was analyzed. Results：In the observa- tion group，292 cases（20.39%） were ANA positive. In the control group，9 cases（6.72%） were ANA positive. The common ANA karyotypes in the observation group were granular（36.32%）and dense（32.89%）. ANA spectrum detection showed that all kinds ofantibodies were detected in the observation group，among which anti-Ro-52 an- tibody（24.55%）and anti-SS-A antibody（24.19%）had the highest detection rates. ANA spectrum detection was also found in ANA negative patients. ANA and ANA spectrum combined detection，the positive rate of the com- bined detection of the two methods reached 27.65%，the overall coincidence rate of the combined detection of thetwo methods reached 79.40%，the sensitivity and speci?city ofthe combined detection of antinuclear antibody and antinuclear antibody spectrum of the observation group was 98.49%，99.61%. The positive rate of combined de- tection in observation group was significantly higher than that in control group，and the difference was statistically significant（χ2=20.47，P<0.01）. Conclusion：The combined detection of ANA and ANA spectrum is helpful forthe clinical diagnosis ofRSA.

【Key words】Recurrent spontaneous abortion;Antinuclear antibodies;Antinuclear antibody spectrum

复发性流产（recurrent spontaneous abortion，RSA）也称为习惯性流产，其定义为连续发生3次或3次以上的自然流产，通常发生的时间在妊娠20周前[1]。引起 RSA 的病因既复杂多又样，而且可能同时有多种因素异常而致其发病，其中能够被识别的病因包括染色体异常、生殖道异常、内分泌和免疫功能异常等约占全部病因的50%。进一步研究发现，夫妻染色体异常包括平衡易位、罗伯逊易位等可以影响 RSA 的染色体核型和基因多态性，从而表现为胚胎发育的基因出现病理性异常，影响免疫、内分泌等多种胚胎发育障碍，甚至引起胚胎死亡[2]。引起 RSA 的原因之一是免疫反应，而抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）则是免疫反应的常见指标，很多研究表明 ANA 与 RSA 有相关性。本研究旨在通过分析本院2020年7～12月1566例 RSA 患者和正常妊娠孕妇血清中的 ANA 及 ANA谱检测，分析导致 RSA 的相关指标，为临床 RSA 患者的诊断和治疗提供实验室依据。

1 对象与方法

1.1研究对象

选取在本院2020年7～12月收集的1432例 RSA 患者作为观察组，选取同时期就诊于本院的正常妊娠妇女共134例作为对照组。观察组年龄22～47（34.4±4.3）岁，对照组年龄21～41（32.6±3.8）岁。

纳入标准： RSA 诊断符合世界卫生组织的相关标准：妊娠在20周以前终止，胎兒体重在500 g以下;均为自然受孕。

排除标准：合并有生殖器感染、畸形等相关病变;有自然流产史、死胎和死产史;精神异常不能配合研究。

1.2方法

1.2.1试剂

ANA 检测由德国欧蒙公司EUROBlotMasterⅡ全自动免疫印迹仪及相应配套试剂进行相关检测。

1.2.2试验方法

抽取静脉血2 mL，静置30 min后离心（3000r/ min，10 min）。血清操作过程严格按照仪器使用说明书进行并进行结果判定。

1.2.3原理

检测 ANA 采用猴肝片及HEP-2细胞作为抗原基质，应用间接免疫荧光法（IIF）检测位置抗原和抗体。

采用免疫印迹法（LIA）检测 ANA谱，将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合，首先进行 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），然后进行电转移和酶免疫定位，综合SDS-PAGE 的高分辨力和 ELISA法的高特异性和敏感性，根据抗原抗体的特异性结合检测样品中的某种蛋白。

1.3统计学方法

应用 SPSS 24.0进行数据统计和分析。计数资料用[ n（%）]表示，应用χ2检验;计量资料符合正态性分布，则选择独立性 t 检验进行分析，以（±s）表示。以 P<0.05认为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ANA检测结果对比

本研究中，观察组共1432例血清样本，检出ANA 阳性292例（20.39%）;对照组134例血清样本，检出 ANA 阳性9例（6.71%）。观察组与对照组的 ANA 检测结果阳性率比较，差异有统计学意义（P<0.0001），见表1。

2.2 ANA核型分布对比

通过荧光显微镜下的细胞形态以及荧光染色模型的特征对 ANA 核型进行分类。本研究患者血液样本中主要分离出颗粒型、胞浆型、致密型和核仁型，其中观察组颗粒型和致密型最常见，所占比例为36.30%和33.22%，对照组颗粒型和胞浆型更常见，所占比例为33.33%和33.33%。观察组和对照组 ANA 核型分布比例比较无显着统计学差异（P>0.05），见表2。

2.3 ANA谱检测结果对比

对观察组1432例血液样本进行 ANA谱检测结果得出， ANA谱阳性的有205例（14.32%），相较于对照组134例样本的 ANA谱检测阳性的7例（5.22%）明显增高，差异具有统计学意义（P<0.001），见表3。

2.4 ANA与ANA谱联合检测结果比较

观察组 ANA 的阳性率为20.39%（292/1432），ANA 谱的阳性率为14.32%（205/1432）。两种方法联合检测时，396例样本为阳性，阳性率达到27.65%，两种方法联合检测的总体符合率达到79.40%;对照组中 ANA 检测阳性率为6.72%（9/134），ANA谱检测阳性率为5.22%（7/134）。两种检测方法联合检测时阳性率为9.70%（13/134），总体符合率达到92.54%。两种方法联合检测时，观察组结果和对照组检测结果差异有统计学意义（P<0.001），见表4。

2.5 ANA谱抗体类型分布对比

ANA谱可检测15种特异性抗体，包括核糖核蛋白（nRNP）抗体、抗史密斯抗体（Sm）、抗组氨酰转运 RNA 合成酶（Jo-1）抗体、干燥综合征相关抗体SSA 和 SSB、 ROPM-Scl、CENPB、抗增殖细胞核抗原（PCNA）抗体、抗双链 DNA（dsDNA）抗体、抗核小体抗体（AnuA）等。

本研究中，观察组中有205例 ANA谱阳性，各种不同 ANA谱抗体共检出277例次，百分比居前2位的抗体分别是抗Ro-52抗体和抗SS-A抗体，所占比例分别是24.55%和24.19%，见表5。

本研究中，对照组中有3例 ANA 阳性和 ANA谱同时阳性的样本，8例样本 ANA 阴性而 ANA谱呈阳性，共计检出11例次 ANA谱阳性抗体。观察组与对照组 ANA谱抗体类型分布无统计学差异（P>0.05），见表5。

2.6抗核抗体和抗核抗体谱联合检测的准确性

将观察组1432例 RSA 患者的血清样本进行Wsetern-Blot 检测抗核抗体，将结果与ANA 和 ANA 谱联合检测方法进行比较， ANA 和 ANA谱联合检测的灵敏度为98.49%，特异度为99.61%，见表6。

3 讨论

当今社会女性生育问题得到了一定重视，不过由于过快的生活节奏、人工流产手术、辅助生殖技术增加等各种原因的出现，生育期妇女复发性流产的比例也在提高，引起了人们的注意。引发 RSA 的病因其实十分复杂，结合目前国内外相关研究，可能同时有多种因素异常而致其发病，其中能够被识别的病因包括染色体异常、生殖道异常、母体内分泌和免疫功能异常等约占全部病因的50%，其中染色体畸形异常是主要病因，早期 RSA 大多数均由胚胎的染色体畸变导致[3]。进一步流行病学相关研究表明，黄体功能不全可能伴发于23%～60%的 RSA患者，分析可能与黄体功能不全导致黄体酮水平过低，子宫内膜剥脱和转换障碍，导致RSA。追根溯源，如果患者体内雄激素增高、催乳素增高等能够引起黄体功能障碍的危险因素也能导致流产和RSA的发生[4]。以上引发RSA因素中，免疫因素相关调查研究结果在近年逐渐被引起重视。母体受孕过程中的胚胎着床过程本质从免疫学角度来说是一种同种异体移植过程，这个过程中母体的免疫系统对于胚胎抗原不会识别为一体抗原，也不会产生自身免疫反应，即母-胎免疫耐受自身免疫病所致[5]。自身免疫相关抗体检测中发现存在ANA 阳性者发生 RSA 的风险较正常人明显升高但机制尚未完全阐明。

本研究通过相关免疫检测，显示观察组的 ANA 和 ANA谱检测结果阳性率均高于对照组，证明这两项检测结果对于预测 RSA 的发生有显着的价值，与以往相关文献报道结果一致。文献指出， RSA 主要由自身抗体异常导致，目前相关研究标表明主要相关抗体有 ANA、抗磷脂抗体、抗甲状腺抗体等，这些抗体的检测也能为 RSA 的确诊和相关病因的筛查提供重要依据，尤其是上述抗体的联合检测更进一步提高诊断的灵敏度和特异性[6]。Veglia等[7]发现 RSA 患者的 ANA+血清注射进小鼠腹部体外研究发现小鼠妊娠丢失率显着增加，并且发现小鼠胎盘中补体C3沉积增加，分析 RNS 发生可能与 ANA+所致免疫反应补体增加致胎盘损伤有关。 Girardi 等[8]在 APS 小鼠模型上也证实了 ANA 通过介导补体因子的激活导致妊娠丢失事件发生。进一步探究其机制发现，妊娠女性对胚胎半抗原有天然的免疫耐受，而 ANA 相关的免疫复合物则会被母体免疫系统识别并释放炎症因子，发生体液免疫应答，反之更加加剧了炎症因子和 ANA 的产生，更促进了免疫复合物沉积和补体的过度激活，造成血管壁破裂，子宫收缩引起流产的发生[9-10]。 ANA 对体内的自身免疫过程反应的敏感性很高， ANA 阳性则能明确免疫反应发生在母体内并且干预了胎盘的发育，免疫反应复合物极易沉着于胎盘血管内壁，造成管壁损伤和 RSA 的发生[11]。此外研究发现母体凝血异常也与 ANA抗体密切相关， ANA 阳性影响血流动力学，导致胎盘血管内微血栓形成，严重的可导致胎盘梗死，胎儿发生缺氧窒息[12]。

此外，本研究采用 ANA 和 ANA谱两种方法联合检测时，两种方法的总体符合率都较高分别为79.40%和92.54%。联合检测的灵敏度为98.49%，特异度为99.61%;联合检测时，观察组阳性率也显着高于对照组，提示 ANA 和 ANA谱联合检测更有助于提高 RSA的临床诊断能力。既往研究发现[13]，ANA 和 ANA谱联合检测时， ANA 的阳性检出率可高达96.7%，且减少假阴性，选择一个敏感度较高的检测组合显得得十分必要。 IIF 和 LIA是临床上最常用的两种检测方法，其中IIF优势在于检测位置抗原和抗体，但是存在假阴性[14]，LIA 的优势在于包被抗原是纯化的抗原，不仅能提高检测敏感性，還能保证测定抗原的准确性和特异性[15]，但目前许多自身抗体的确切抗原尚不明确，许多抗原不易被纯化，故仅有少部分抗原有纯化的产品能用于特异性检测。另外，在本研究中发现， RSA 患者和普通孕产妇的 ANA 核型分布中以颗粒型和致密型的分布比例较高，但两者间无显着差异。本研究未发现 ANA 核型分布与 RSA 发病机制的关系，既往研究亦尚未给出明确结论，有待进一步研究。

综上所述， RSA 的发生与 ANA 和 ANA谱阳性有密切联系， ANA、ANA谱检测阳性率有助于 RSA 临床诊断;当两种方法联合检测时，阳性率相对更高，为临床提供更有效诊断依据，让患者能得到准确诊断和及时治疗。

参考文献

[1] 冯煜，刘博，杨一华，等.抗核抗体阳性与复发性流产关系的 Meta 分析[J].广西医学，2019（14）：1808-1812.

[2]  胡予婷.小剂量阿司匹林结合肝素与地屈孕酮片治疗复发性流产效果及对妊娠结局的影响[J].医学食疗与健康，2021，19（4）：76-77.

[3]  中华医学会妇产科学分会产科学组.复发性流产诊治的专家共识[J].中华妇产科杂志，2016，51（1）：3-9.

[4]  陈文娟.低分子肝素联合阿司匹林治疗抗磷脂抗体引起的复发性流产的临床效果观察[J].医学食疗与健康，2021，19（2）：65-66.

[5]  Toth B ，W ürfe l W ，Bohl m a nn M ，e t a l . Re currentmiscarriage：diagnostic and therapeutic procedures. Guideline  ofthe DGGG，OEGGG and SGGG （ S2k-Level，AWMF  Registry Number 015/050）[J]. GeburtshilfeFrauenheilkd，2018，78（4）：364-381.

[6] 周燕，罗孟军，陈莉农，等.抗精子抗体、抗子宫内膜抗体、抗心磷脂抗体和抗核抗体检测在复发性流产诊断中的价值[J].中国计划生育和妇产科，2020，12（5）：25-28，51.

[7]  Veglia M ，D'Ippolito S ，Marana R ，et al.Human IgGantinuclear antibodies induce pregnancy loss in mice by increasing immune complex deposition in placental tissue：in vivo study[J].Am J Reprod Immunol，2015，74（6）：542-552.

[8] Girardi G，Redecha P，Salmon J.Heparin prevents antiphospholipid antibody induced fetal loss by inhibiting complement activation[J].Nat Med，2004，10（11）：1222-1226.

[9] Girardi G.Complement activation，a threat to pregnancy[J]. Semin Immunopathol，2018，40（1）：103-111.

[10] Hristova MH，Stoyanova VS.Autoantibodies against complement components in systemic lupus erythematosus - role in the pathogenesis and clinical manifestations[J].Lupus，2017，26（14）：1550-1555.

[11] 葛澤锋，陈秀娟 . 抗磷脂综合征导致复发性流产患者的免疫治疗效果分析 [J]. 医学食疗与健康，2019，17（11）：1，3.

[12] 闰姝，王克华 . 免疫性复发性流产的中西医诊疗进展 [J].现代中西医结合杂志，2021，30（10）：1249-1254.

[13] 方小娴，廖胡君，戎燕丽 . 两种方法联合检测抗核抗体结果分析 [J]. 国际检验医学杂志，2014，35（8）：1036-1038.

[14] 段必芬 . 抗核抗体检测在复发性流产病人中的检测价值分析 [J]. 医药前沿，2018，8（26）：175-176.

[15] 王文强，薛霖，钟田花，等 .1010 例复发性流产患者血清抗核抗体检测的临床分析 [J]. 国际检验医学志，2017，38（21）：3069-3070.

（收稿日期：2021-03-12）