QuEChERS-GC-MS/MS测定茶叶中吡唑醚菌酯、嘧菌酯的残留量

梁少东，伍国怡，张 铨

(北海市食品药品检验所，广西 北海 536000)

吡唑醚菌酯、嘧菌酯属于甲氧基丙烯酸类杀菌剂，其主要作用于真菌的线粒体呼吸，从而抑制真菌生长或杀死。因其具有高效、低毒的特点，其使用量在全球逐渐增长[1]，在我国茶叶种植中也有使用。我国对茶叶中的吡唑醚菌酯最大允许残留量为10 mg/kg，但对茶叶中嘧菌酯的最大允许残留量却没有规定[2]。日本肯定列表制度中嘧菌酯在茶叶中的最大允许残留量为10 mg/kg，欧盟对茶叶中的嘧菌酯最大允许残留量为0.1 mg/kg。目前我国气质联用法检测茶叶的国标中[3-4]，其检测的农药并没有包括吡唑醚菌酯和嘧菌酯。因此，本研究在借鉴检测甲氧基丙烯酸类杀菌剂[5-9]以及茶叶中检测农残文献方法[10-13]的基础上，建立了一种利用QuEChERS净化技术，快速测定茶叶中的吡唑醚菌酯和嘧菌酯的方法。

1 实 验

1.1 仪器、试剂与材料

TQ-8040NX气相色谱-串联质谱仪，日本岛津公司；XSE205电子天平，瑞士METTLER TOLEDO公司；ST40R高速冷冻离心机，Thermo scientific。

乙腈，美国Fisher公司；乙酸，上海安谱公司；吡唑醚菌酯(100 μg/mL，1.2 mL)、嘧菌酯(100 μg/mL，1.2 mL)标准物质，坛墨质检科技股份有限公司；水为娃哈哈纯净水。

样品来源市场抽检茶叶15份。

1.2 标准溶液的配制

取吡唑醚菌酯、嘧菌酯标准物质各1.0 mL置于10 mL棕色容量瓶中，乙腈定容至刻度，配成浓度为10 μg/mL的标准储备液；取适量吡唑醚菌酯、嘧菌酯标准混合液，用乙腈稀释，配制成0.01,0.02,0.05,0.10,0.20 μg/mL系列浓度。取1 mL空白基质溶液氮气吹干，加入1 mL相应浓度的混合标准溶液复溶，过0.22 μm微孔滤膜。基质混合标准溶液应现用现配。

1.3 样品处理

称取2.00 g试样于50 mL塑料离心管中，加10 mL水涡旋混匀，静置10 min。加入10 mL乙腈-乙酸(99:1)，6 g无水硫酸镁、1.5 g醋酸钠及1颗陶瓷均质子，剧烈振荡1 min，4200 r/min离心5 min。吸取8 mL上清液加到含1.2 g硫酸镁、400 mg PSA、400 mg C18及400 mg GCB的塑料离心管中，涡旋混匀1 min。4200 r/min离心5 min，取上清液0.22 μm过微孔滤膜，上GC-MS/MS测试。

1.4 色谱条件

(1)SH-Rxi-5Sil MS 色谱柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm)；进样口温度280 ℃；载气为高纯氦气，流速1.0 mL/min;恒流模式；不分流进样；进样量1 μL。色谱柱升温温度：初始温度100 ℃，以30 ℃/min升至200 ℃，10 ℃/min升至300 ℃，保持10 min。

(2)质谱条件:将吡唑醚菌酯，嘧菌酯进行全扫描，确定母离子，再给予一定的碰撞能量，扫描二级子离子，选取丰度较高的2个子离子分别为定量离子对和定性离子对，最后以MRM模式优化最佳碰撞能量。优化后的质谱参数及保留时间见表1。

表1 质谱参数

(3)吡唑醚菌酯、嘧菌酯基质标准溶液色谱图见图1。

图1 吡唑醚菌酯、嘧菌酯基质标准溶液色谱图(0.10 μg /mL)

2 结果与讨论

2.1 提取净化方法

2.1.1 基质效应

基质效应的定义：“样品中除目标分析物以外的其他成分对待测物测定值的影响”。基质效应可以是基质抑制，也可以是基质增强。在GC-MS/MS中，由于基质的影响，容易产生基质增强效应[14]。茶叶基质复杂，增加净化步骤容易造成待测农药的损失。因此本实验采用茶叶空白样品提取液，配制基质曲线，外标法定量。

2.1.2 样品提取溶液

茶叶中农药残留的提取，提取液种类较多，主要有乙腈、丙酮、乙酸乙酯、正己烷等。乙腈作为提取剂时，相对其它溶剂，基质本底比较干净，净化后的溶液也较少色素残留。而国标提取处理中，有用乙腈直接提取，也有用乙腈-乙酸(99:1)直接提取。因此，本文主要研究乙腈直接提取与乙腈-乙酸(99:1)提取对回收率的影响作比较。经实验表明，吡唑嘧菌酯、嘧菌酯在乙腈和乙腈-乙酸(99:1)两种提取体系中，两种农药总体回收率都不高，尤其吡唑醚菌酯回收率不到20%，嘧菌酯回收率在65%左右。但吡唑嘧菌酯在乙腈-乙酸(99:1)体系中回收率比乙腈体系中回收率高，嘧菌酯回收率相差不大，故提取溶剂选择了乙腈-乙酸(99:1)。

2.1.3 样品加水浸泡时间

现行国标中对茶叶前处理过程中，有选择加水浸泡乙腈提取，也有不加水浸泡乙腈直接提取。因此，本文仅就吡唑醚菌酯、嘧菌酯是否加水浸泡，以及加水浸泡时间提取对回收率的影响作研究。经实验表明，加水浸泡后，回收率比不加水回收率明显要高。尤其是吡唑醚菌酯加水浸泡后，回收率明显提高。故本研究前处理过程选择加水浸泡后乙腈-乙酸(99:1)提取。为选择最佳的浸泡时间，本实验将茶叶样品在同样的蒸馏水浸泡，分别在10,20,30 min作检测。比较发现，浸泡10 min，20 min，30 min提取，回收率没有统计学上的显著差异。综合提取时间和回收率的影响，故选择样品在提取前加水浸泡10 min。

因为茶叶成品通常是干样，加水浸泡可以使茶叶充分润湿，加大了样品与水的接触面积，增加提取溶剂乙腈的亲和度，更加容易形成分层。乙腈加入醋酸，可以和乙酸钠形成弱酸性缓冲体系，弱酸性提取对某些农药不容易造成分解，故最终前处理方法选择样品加水浸泡10 min后，乙腈-乙酸(99:1)提取。

2.2 方法的线性、检出限、定量限、回收率和精密度

以浓度为横坐标，定量离子对的峰面积为纵坐标绘制标准曲线，结果显示在相应浓度范围内，定量离子对的峰面积于质量浓度呈良好的线性关系，相关系数R2均在0.997以上。以S/N=3计算检出限，S/N=10计算定量限，结果见表2。在阴性茶叶中分别添加3个水平的待测物，每个水平平行测定6次，考察方法的回收率和精密度。结果显示，方法回收率为75.2%～91.0%，RSD为2.12%～7.14%(n=6)。结果见表2。

表2 线性范围、线性方程、相关系数(R2)、检出限和定量限

表3 阴性茶叶样品中加标回收率及相对标准偏差(RSD,n=6)

2.3 样品监测情况

在市区随机抽取的15份茶叶中，有红茶、绿茶、乌龙茶等。经检测，15份样品中吡唑醚菌酯、嘧菌酯均没有检出。

3 结 论

本研究建立了QuEChERS-GC-MS/MS测定茶叶中的吡唑醚菌酯、嘧菌酯的分析方法。考察了茶叶提取溶剂和茶叶浸泡时间对测定结果的影响，线性，回收率，精密度均符合实验要求。本方法前处理简单，快速，可批量操作，可用于茶叶中吡唑醚菌酯、嘧菌酯残留量快速筛查和检测。