天地慈寡肽汉草冻干粉适用于提升皮肤多种效果的观察报告

范亨林 吴骞 张晓霞 欧阳远鹏

关键词： 角质层含水量;修复嫩肤;天地慈寡肽汉草冻干粉;疗效观察

【中图分类号】  R283【文献标识码】A 【文章编号】1673-9026（2022）15--01

人皮肤成纤维细胞是皮肤真皮网织层中最重要的细胞，是皮肤衰老和细胞受损后的主要修复细胞之一[1]。它不但能够促进表皮细胞的迁移、增殖 和分化，还能分泌大量的胶原蛋白、弹性纤维蛋白及多种细胞修复因子，具有强大的自我更新能力[2]，从而修复老化的皮肤。成纤维细胞是维持皮肤弹性和韧性的重要细胞[3]，其特有的生物学特性.在抗皮肤衰老中起着重要的作用。

本文就天地慈寡肽汉草冻干粉用于提升皮肤多种效果的有效性和安全性展开观察研究，现报告如下。

1 对象与方法

1.1 对象 于东莞黄家圣幸中医医院选取有护肤需求的女性受试者35例，年龄18～50岁。所有受试者均已接受告知并签署知情同意书。

1.2 纳入标准

（1）皮肤光生物类型为Ⅱ型或Ⅲ型，以室内活动为主，能严格遵守实验要求，并签署志愿者知情同意书者。

（2）年龄18～50岁;

（3）面部无炎症、湿疹及银屑病等影响疗效观察的皮肤病者;

1.3 排除标准

（1）不符合上述纳入标准者;

（2）对化妆品有过敏或者高度敏感风险者;

（3）近2个月内参加药物临床试验者或其他化妆品功效评价者;

（4）有严重内分泌疾病患者、重的心血管、肾、肝、造血系统等原发性疾病;

（5）妊娠或哺乳期妇女;

（6）有活动性传染病者;

（7）试验期间受试部位应用抗炎药物、全身应用糖皮质激素免疫抑制剂类药物;

（8）精神病患者及严重神经官能症而不能配合治疗者。

1.4 实验试剂 天地慈寡肽汉草冻干粉（天地慈生物科技有限公司）;DMEM培养基及胎牛血清（美国Gibco公司）;MTT（美国Sigma公司）;重组表皮生长因子（美国Gibco公司）;PDGF、VEGF、TGF-β1、MMP2、MMP9引物（上海生工）;PDGF、VEGF、TGF-β1、MMP2、MMP9抗体（美国CellSignalingTechnology公司）其他有机分析纯试剂（国药集团化学试剂有限公司）。

1.5 方法

（一）人皮肤成纤维细胞的培养与分组

复苏细胞，添加培养基（89%DMEM+10%胎牛血清+1%双抗）于37℃5%CO2培养箱培养，将第3次传代的细胞用于后续实验。实验分为4组：空白对照组（NC）、以及不同浓度（加无菌水稀释）的天地慈寡肽汉草冻干粉（1/4浓度、1/2浓度、1/1浓度（即为不稀释））。

（二）MTT法检测人皮肤成纤维细胞活性

将细胞悬液接种于96孔细胞培养板，密度为1×105个细胞/孔，培养24h后，空白对照组不做处理，其余组加入含不同浓度（加无菌水稀释）的天地慈寡肽汉草冻干粉（1/4浓度、1/2浓度、1/1浓度（即为不稀释））的细胞培养基，实验重复3次。置于细胞培养箱中孵育24h后，根据MTT试剂盒说明书操作步骤，计算细胞存活率。

公式如下：细胞存活率（%）=（实验组A值-空白孔A值）/（对照组A值-空白孔A值）×100%。

（三）流式细胞仪检测人皮肤成纤维细胞增殖能力

将细胞悬液接种于12孔细胞培养板，密度为1.5×104个细胞/孔，孵育6h后，加入37℃预热的预混液[磷酸盐缓冲液（PBS）稀释CFSE浓度至2.5μmol/L]，置于细胞培养箱中孵育20min后用含有2%牛血清白蛋白（BSA）的培养基潤洗3遍，更换为新鲜的培养基孵育15min。空白对照组不做处理，其余组加入含不同浓度（加无菌水稀释）的天地慈寡肽汉草冻干粉（1/4浓度、1/2浓度、1/1浓度（即为不稀释））的细胞培养基。孵育36h后，细胞经胰蛋白酶消化离心，PBS洗3次，重悬，流式细胞仪上样检测，实验重复3次。

（四）受试者主观评价

选取35名有护肤需求的女性受试者，在早晚面部清洁完后，全脸使用天地慈寡肽汉草冻干粉（粤G妆网备字2020279009;天地慈 （东莞）生物科技有限公司）2次/d，连续使用28d后进行疗效主观评价，内容包含紧致度、平滑度、泛红、干燥粗糙、肌肤不适感5个方面的改善情况。评价标准分为明显改善、有所改善、无改善三个等级。

1.6 产品安全性评价 对受试者进行不良反应评价，询问受试者面部是否出现红斑、刺痛等症状，如出现上述症状，则行斑贴试验评估与受试产品相关性。

1.7 统计分析 应用SPSS19.0软件分析分析以上指标，采用t检验，并以（x±s）表示检测结果，以率（%）表示比例，P<0.05为差异显著，有统计学意义。

2 结果

2.1 天地慈寡肽汉草冻干粉对人皮肤成纤维细胞活性的影响

MTT结果显示，地慈寡肽汉草冻干粉作用于皮肤成纤维细胞24h后，在1/4浓度、1/2浓度、1/1浓度（即为不稀释）的范围内随着浓度增大，皮肤成纤维细胞活性逐渐增加，与空白对照组相比（NC），差异有统计学意义（P<0.05图1）。详见图1。

通过荧光标记探究天地慈寡肽汉草冻干粉对人皮肤成纤维细胞增殖的影响，采用平均荧光强度（MFI）进行定量分析，结果显示，MFI数值随着天地慈寡肽汉草冻干粉浓度升高而降低，表明细胞增殖数量随着天地慈寡肽汉草冻干粉浓度升高而增多。与空白对照组相比（NC），1/4～1/1天地慈寡肽汉草冻干粉处理组的细胞增殖数量显著增加（P<0.05，图2）。流式细胞实验与MTT结果吻合，进一步证明天地慈寡肽汉草冻干粉能够促进人皮肤成纤维细胞增殖，详见图2

3 讨论

本研究以人皮肤成纤维细胞为研究对象，通过 MTT 实验评价天地慈寡肽汉草冻干粉对细胞活性的影响，结果显示，天地慈寡肽汉草冻干粉处理组随着浓度的增加，细胞活性显著增加，表明能够显著增加人皮肤成纤维细胞活性。流式细胞仪检测CFSE标记的人皮肤成纤维细胞，结果显示，成纤维细胞增殖数量随着天地慈寡肽汉草冻干粉浓度升高而增多;使用28d后，根据受试者对自身皮肤状态、自我感受的判断调查报告显示，71.4%受试者認为皮肤紧致度提高，62.9%的受试者认为皮肤平滑度提高，68.6%的受试者认为泛红改善，85.7%受试者认为皮肤干燥粗糙得到改善，88.6%的受试者认为肌肤不适感得到缓解。治疗过程中，35名受试者均未出现不良反应。

综上所述，天地慈寡肽汉草冻干粉对于皮肤成纤维细胞增殖和活性有促进作用，由成纤维细胞分泌的胶原蛋白的促进也有一定的帮助，后期根据受试者主观评价得出天地慈寡肽汉草冻干粉可以帮助皮肤提高紧致嫩滑的程度，对于皮肤粗糙和敏感有改善的作用。

参考文献：

[1] 丛敬，吴景东.老化皮肤成纤维细胞的研究进展[J].中国美容医学.2009，（5）.736-738.

[2] 赵娟，李相军，于晓艳，等.自体皮肤成纤维细胞在医学美容中的应用研究[J].中国美容医学.2008，（2）.225-228..

[3] 李利，王曦，刘蔚，等.女性面部皮肤皱纹相关因素研究--1004例成都地区汉族女性调查[J].中国实用美容整形外科杂志.2004，（3）.126-128.