妊娠期尖锐湿疣患者外周血Treg/Th17细胞平衡及对妊娠结局的影响

王鹿媛 杨莹珠

1.宁波市奉化区中医医院(315500)；2.宁波市妇女儿童医院

尖锐湿疣(CA)为传染性疾病，传染性强且治疗后易反复[1]。文献报道[2-3]，妊娠期女性中CA患病率为1.5%～2.5%，可引起母婴并发症，对母婴妊娠结局有一定影响。妊娠期CA的发生机制虽较复杂，但已有大量文献显示，机体细胞免疫与CA的发生、复发及治疗密切相关，其中CD4+T在这一过程中发挥关键作用[4-5]。而Th1、Th2和Th17、Treg细胞均为CD4+T淋巴细胞亚群的一种，且Th17、Treg及Th1、Th2均具有共同的分化前体，因此当机体Th1、Th2失衡时可造成Th17、Treg细胞变化。已有较多研究证实，Th17/Treg失衡参与艾滋病及乙型肝炎等感染性疾病的发生发展，而关于外周血Th17/Treg细胞平衡与CA之间的关系及对妊娠结局的影响报道尚少[6-7]。基于此，本研究探究妊娠期CA患者外周血Treg/Th17细胞含量，并分析Treg/Th17细胞平衡与妊娠结局。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年10月-2020年10月本院妇产科诊治的妊娠期CA患者为CA组，另选取以年龄、孕次为匹配原则同期正常妊娠孕妇为对照组。纳入标准：①年龄20～35岁；②临床资料完整且CA组确诊为妊娠合并CA；③常规产检显示孕产妇及胎儿均正常；④无他种妊娠合并症。排除标准：①CA组合并梅毒、艾滋病、乙肝等传染性疾病；②去疣治疗后失访；对照组孕20周前自行终止妊娠及双胎妊娠。本研究经本院伦理委员会审批。孕妇均签署知情同意书。

1.2 检测方法

采集受试孕妇外周静脉血5ml抗凝。①Treg细胞：分离外周血单个核细胞，按顺序加入CD25-PE抗体、CD4-FITC抗体及CD127-PECY5抗体(购自eBioscience公司)，孵育后离心，加入0.1%多聚甲醛固定液150μl重悬细胞，使用流式细胞仪(美国BD公司)检测，分析CD4+、CD25+及CD127lowTreg细胞比例。②Th17细胞：吸取250μl外周血接种于细胞培养孔中，加入同体积RPMI培养基，置37℃ 5% CO2培养箱中培养。培养后分别吸取200μl培养后的全血样本置于流式管中，依次加入CD3-eFluor 660、CD8-FITC抗体(购自eBioscience公司)，室温孵育30min，固定、破膜。于检测管中加入IL-7 PE抗体，孵育、洗涤及离心处理，加入0.1%多聚甲醛固定液150μl重悬细胞，使用流式细胞仪检测，分析CD3+、CD8-及IL17+Th17细胞比例。

1.3 妊娠结局

①分娩方式，自然分娩、剖宫产、产钳助产；②妊娠结局，足月产、早产、流产、围产儿死亡、低体质量、人乳头瘤病毒(HPV)阳性；③随访，6个月随访，统计新生儿有无HPV感染、呼吸道乳头状瘤发生。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 两组一般资料

CA组112例，年龄(27.95±4.07)岁(21～34岁)，孕次(1.2±0.4)次(1～3次)；对照组112例，年龄(27.50±4.45)岁(22～33岁)，孕次(1.1±0.4)次(1～3次)。两组年龄及孕次无差异(P>0.05)。

2.2 两组Treg/Th17细胞水平比较

CA组外周血Treg、Treg/Th17细胞水平均高于对照组(P<0.05)，Th17细胞水平低于对照组(P<0.05)。见表1。

2.3 Treg/Th17诊断CA价值

ROC曲线分析显示，外周血Treg、Th17及Treg/Th17细胞水平诊断CA均具有一定价值；最佳临界值时诊断CA的敏感度、特异度见表2。

表1 两组Treg、Th17细胞水平比较

表2 Treg、Th17 诊断CA价值

2.4 CA患者Treg/Th17细胞平衡与分娩及妊娠结局

以ROC最佳临界值进行分组，CA患者外周血Treg/Th17>2.84为失衡组。结果显示，CA患者Treg/Th17细胞失衡70例(62.5%)，未失衡42例(37.5%)。CA失衡者剖宫产及产钳助产率均高于未失衡者，自然分娩率低于未失衡者(均P<0.05)；足月产、早产、流产及围产儿死亡发生率Treg/Th17失衡与未失衡者间未见差异 (P>0.05)。见表3。

表3 CA 患者Treg/Th17细胞平衡与分娩及妊娠结局[例(%)]

2.5 CA患者Treg/Th17细胞平衡与新生儿

CA患者新生儿不良结局总发生率Treg/Th17失衡者高于未失衡者(P>0.05)；随访6个月，CA失衡者新生儿HPV感染、呼吸道乳头状瘤的发生率均高于未失衡者(P>0.05)。见表4。

表4 CA患者Treg/Th17细胞平衡与新生儿[例(%)]

3 讨论

CA为HPV感染所致，感染后大部分无临床症状，仅少部分可出现临床或组织病理的损害。已有研究指出，CA患者存在局部或全身细胞免疫异常且随着病情反复及病程延长，细胞免疫抑制更加明显[8-9]。提示细胞免疫功能抑制与CA的发生发展密切相关，而在这一过程中CD4+T发挥关键作用。

Treg为CD4+T细胞的新亚群，具有维持机体免疫平衡作用。研究显示，Treg不仅可对机体过度免疫造成的损伤产生抑制作用，而且可对宿主的免疫性保护作用进行抑制，影响机体对病原体的清除[10-11]。CD127为Treg的生物标志物，可对外周血CD4+CD25+调节性T细胞进行有效识别，提高CD4+CD25+Treg细胞的检出数量，因此可作为CD4+CD25+Treg细胞的理想反映指标。已有研究指出，Treg细胞可分泌大量IL-4、IL-10及TGF-β等细胞因子，进一步参与机体炎症反应及免疫应答[12-13]。本研究中，CA患者Treg细胞水平显著升高，提示存在一定的细胞免疫功能抑制。原因可能：妊娠期HPV感染后可促进Treg细胞的增殖及活化，影响宿主对HPV特异性免疫反应。Th17亦为CD4+T细胞亚群的一种，可分泌IL-17、IL-21、IL-22等炎性因子。研究指出，Th17细胞可分泌大量炎性细胞因子，进而促进中性粒细胞的活化及聚集，介导炎症级联反应放大，因此可参与感染性疾病、自身免疫性疾病及恶性肿瘤等疾病的发生发展。本研究中，CA患者Th17细胞水平显著降低，该结果与肖卫棉[14]研究结果相符。提示Th17低表达可影响机体正常的细胞免疫功能，进而造成CA。

Treg及Th17均源自于共同的细胞分化前体，正常情况下二者相互拮抗维持机体免疫平衡稳定；但当机体感染时，炎性细胞因子可促进Th17细胞分化，造成机体Treg/Th17失衡[15-16]。本研究中，CA患者外周血Treg/Th17高于对照组，提示Treg/Th17失衡且偏向Treg细胞。已有文献指出，Treg细胞水平升高是造成机体免疫抑制及免疫无能的重要原因，其可抑制Th1及Th2的分化，对Th1及Th2介导的细胞毒性T细胞的炎症反应及免疫应答产生负向调节作用[17]。且随着Th17细胞水平降低，机体对炎症及趋化因子的反应被削弱，延长HPV感染时间，进而造成CA发生[18]。

妊娠期对CA疣体损害严重，可造成巨大CA进而阻塞产道，影响产妇分娩结局。研究显示，妊娠期CA受HPV感染影响，可进一步造成母婴垂直传播或产道感染发生，导致新生儿HPV感染及呼吸道乳头状瘤发生，但临床尚无关于妊娠期CA造产妇流产、围产儿死亡的报道[19-20]。本研究中，CA失衡患者剖宫产及产钳助产率均高于未失衡者，自然分娩率低于未失衡者，但CA失衡患者新生儿窒息、HPV阳性、低体重、HPV感染及呼吸道乳头状瘤的发生率与未失衡者未见统计学差异；本文CA患者均未有流产及围产儿死亡发生。提示，妊娠期CA可一定程度影响产妇分娩结局，但对不良妊娠结局无明显影响。

综上所述，妊娠期CA患者存在外周血Treg/Th17细胞失衡，一定程度影响分娩结局，但对母婴不良妊娠结局无明显影响，临床应进行积极治疗。