GPX-1基因Pro198Leu多态性与缺血性脑卒中相关性研究

徐秀芝　祝鸿雁

摘要：目的：探讨谷胱甘肽过氧化物酶（GPX-1）基因Pro198Leu多态性与缺血性脑卒中的相关性。方法：选取我院神经内科2020年6月～2021年6月收治的缺血性脑卒中患者100例作为观察组，依据是否合并糖尿病分为合并糖尿病组（合并组）与未合并糖尿病组（未合并组），选取入院体检的健康人群60例作为对照组，采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-HFLP）技术检测其GPX-1基因Pro198Leu多态性并对比各组Pro198Leu多态性基因型与等位基因分布情况。结果：观察组与对照组Pro198Leu 多态性基因型频率和等位基因频率差异均有统计学意义（P<0.05）。合并组、未合并组间Pro198Leu 多态性基因型频率和等位基因频率差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：缺血性脑卒中发病风险与GPX-1基因Pro198Leu多态性相关，与是否合并糖尿病无关。

关键词：谷胱甘肽过氧化物酶;基因Pro198Leu多态性;缺血性脑卒中;糖尿病

缺血性脑卒中（acute ischemic stroke，AIS） 是临床常见卒中类型，其发病率、致死率和致残率在世界范围内均处于较高水平，严重危害人类生命安全。近年来，受饮食习惯改变、生活压力增大和人口老龄化加剧等诸多因素影响，AIS的患病率呈明显升高态势，防控形势日益严峻。如何有效降低AIS的发病率，改善患者生存质量是当前研究的热点问题。氧化应激是AIS发生发展的重要环节，其中谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase-1，GPX-1）是一种重要的抗氧酶，可催化脂质过氧化物、氨基酸氢过氧化物、蛋白质的还原反应发挥抗氧化作用。既往研究证实GPX-1的活性与多种心血管疾病密切相关，且受多种因素调节，GPX-1基因Pro198Leu多态性能通过影响红细胞内硒含量最终改变氧化应激水平。但目前GPX-1基因Pro198Leu多态性与AIS的关系仍不明确。本研究旨在探讨GPX-1基因Pro198Leu多态性与缺血性脑卒中的相关性，以期为为研究缺血性脑卒中的遗传学发病机制提供更多依据。

1 资料与方法

1.1一般资料  选取我院神经内科2020年6月～2021年6月收治的缺血性脑卒中患者100例作为观察组，其中男52例，女56例，年龄42～80岁，平均（54.69±9.48）岁。依据是否合并糖尿病分为合并糖尿病组（合并组，32例）与未合并糖尿病组（未合并组，68例），糖尿病诊断标准依据1999年WHO发布的相关标准。纳入标准：①符合《中国急性缺血性脑卒中诊治指南2018》中诊断标准，且有明确AIS临床症状或体征;②入院时均意识清楚，入院时间均发病至入院2周内;③经头颅CT排除脑出血。排除标准：①合并其他神经系统疾病者;②病情危重、伴失语或存在严重认知障碍者;③既往或当前伴精神疾病（抑郁症、精神分裂症、癫痫等）者。选取入院体检的健康人群60例作为对照组，其中男32例，女28例，年龄45～80岁，平均（53.98±9.62）岁。该研究经医学研究伦理委员会审核同意，入选者签署知情同意书。

1.2 研究方法  采用PCR-HFLP技术检测各组GPX-1基因Pro198Leu多態性并对比Pro198Leu多态性基因型与等位基因分布情况。实验步骤：制备基因组DNA→PCR扩增目的基因片→扩增产物限制性内切酶→酶切产物电泳测序（将酶切结果显示为不同基因型并各取2分，行PCR扩增，每份总体系20μl，共6份，后联同引物测序）。

1.3  统计学方法  采用SPSS20.0分析，计量资料呈正态分布时以（）表示，组间采用t检验，不符合正态分布时采用中位数和四分位数表示，组间比较采用MannWhitney U检验，分类计数资料以例数及百分比表示，采用χ检验，P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1GPX-1基因Pro198Leu测序结果  GPX-1基因Pro198Leu测序结果显示在观察组中检出CC基因型56例，CT基因型33例，TT基因型11例，在对照组中检出CC基因型46例，CT基因型9例，TT基因型5例。

2.2观察组与对照组基因型及等位基因频率比较观察组与对照组Pro198Leu 多态性基因型频率和等位基因频率差异均有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2.3合并组与未合并组基因型及等位基因频率比较合并组、未合并组间Pro198Leu 多态性基因型频率和等位基因频率差异均无统计学意义（P>0.05），见表2。

3 讨论

AIS发病与多种因素有关，其具体发病机制仍未完全阐明。结合临床实践我们发现，部分病程较长病情较差者未并发并发症，但病程较短且病情较好者却在早期出现相关并发症，提示基因调控可能在AIS发病过程中发挥作用。现有研究认为遗传、环境等因素可能在AIS发病中发挥重要作用，其中氧化应激可能与AIS发病密切相关，对抗氧化相关基因的研究可能为AIS的治疗中提供新的方向。

目前人类已发现5种GPX同工酶，其中GPX-1（细胞质GPX）、GPX-4被证实与多种慢性疾病的发生发展有关。GPX-1是一种关键的抗氧化酶，在同工酶超家族中分布最为广泛。正常情况下人体内氧化代谢会产生一定量的活性氧自由基，GPX等抗氧化酶系统能通过清除活性氧自由基使其处于相对较低水平。但在特定病理状态下会破坏体内氧化与抗氧化平衡，诱发硬化应激反应，造成机体组织及细胞损伤，提高GPX-1活性可有效抑制细胞凋亡，减轻DNA损伤。GPX-1基因处于3号染色体断臂上，包括1个内含子与2个外显子，目前发现该基因存在多个多态性位点，其中有关Pro198Leu的研究相对较多，198位点上包括CC、CT、TT三种等位基因型。本研究发现，观察组（AIS患者）与对照组GPX-1基因Pro198Leu多态性基因型与等位基因分布有明显差异，其中观察组CT、TT基因型和T等位基因频率均明显高于对照组，提示上述个体可能存在较高的AIS发生风险。本研究还发现，GPX-1基因Pro198Leu多态性与AIS患者是否合并糖尿病无关，GPX-1基因Pro198Leu测序可能在评估AIS是否并发糖尿病中无明显作用，其原因可能与GPX-1基因Pro198Leu多态性受多种因素影响有关。

综上所述，缺血性脑卒中发病风险与GPX-1基因Pro198Leu多态性相关，即GPX-1基因Pro198LeuCT、TT基因型个体者较其他人群更易发生缺血性卒中，而与是否合并糖尿病无关。

基金项目：黑龙江省卫生健康委课题：课题编号2019-151

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