中药头花蓼分析方法的研究概况

顾曼曼　孙媛　秦琼

摘要：头花蓼是少数民族地区的常用药，具有清热利湿、解毒止痛、活血散瘀和利尿通淋的功能。为了深入研究开发该植物，通过查阅近几年相关文献，本文对其分析方法的研究进展进行了综述。

关键词：头花蓼;分析方法

头花蓼（Polygonum capitatatum） 又名太阳草、石莽草、水绣球等，为蓼科植物头花蓼的干燥全草或地上部分，是少数民族地区的常用药。具有清热利湿、解毒止痛、活血散瘀、利尿通淋的功效，收载于《贵州省中药材、民族药材质量标准》（2003年版）。主要用于清热解毒、利尿通淋、肾盂肾炎、尿路结石、膀胱炎、风湿痛、跌打损伤、尿道感染、疮疡湿疹等症。早在20世纪80年代就对头花蓼开展了大量研究，对其化学成分已有较多的文献报道，现今头花蓼及其制剂热淋清颗粒主要应用于治疗泌尿系统感染等疾病。随着分离技术和分析技术的进步，已有许多新的化学成分出现，为深入研究开发该植物，进一步阐明其药效物质基础，本文通过检索近几年的相关文献，将头花蓼的分析方法进行综述。

目前，有关头花蓼质量分析的研究主要包括药材的定性鉴别，药材中总黄酮的含量测定，药材及其制剂中有效成分的含量测定以及活性成分在动物模型中的代谢等。采用的分析方法包括薄层色谱法、紫外分光光度法、高效液相色谱法、核磁共振法、高效液相色谱-质谱联用法、薄层扫描法和毛细管电泳法等。其中，高效液相色谱法因具有分辨率高、重现性好、分析速度快、使用范围广等优点最为常用。

1定性鉴别

1.1 卿娟^[人对头花蓼药材薄层色谱指纹图谱进行了研究，精密吸取各样品供试品溶液、对照品溶液各4ml，用半自动点样仪成点状点于距聚酰胺 薄层板底边10mm处。展开系统：正己烷-乙酸乙酯-丁酮-甲酸 （7：6.5：2.5：3） 。控制室内温度20℃。预平衡15min后，上行展开8cm，取出薄层板，晾干，再用展开剂正己烷-乙酸乙酯-丁酮-甲酸（7：6.5：2.5：3）二次展开，取出晾干。检测条件：喷以AICI试液显色，挥尽薄层板上的残留溶剂后置紫外光灯（320nm）下检视荧光薄层色谱，并将扫描图导入Chromafinger2005色谱指纹图谱解决方案软件，生成灰度扫描图并积分，验对12批同一产地CAP种植头花蓼和11批不同产地野生头花蓼药材进行了薄层色谱指纹图谱研究，通过荧光斑点色谱图，可快速、直观地与伪品进行区分。将头花蓼药材的薄层色谱指纹图谱运用于药材的收集采购及质量监控，成本低廉，便于推广，具有良好的实用价值及参考意义。

2 化学成分的制备、分析鉴定

2.1 周雯等应用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用对苗药头花蓼醇提物与水提物的化学成分进行分析与鉴定。采用Waters ACQUITY UPLC BEH C 色谱柱（2.1mm×100mm，1.7m）; 以0.10%甲酸水溶液（A）-0.10%甲酸乙腈溶液（B）为流动相梯度洗脱;流速为0.35mL/min;ESI-Ms检测采用负离子模式。根据精确相对分子质量，结合数据库匹配进行结构鉴定。结果显示醇提物及水提物皆以黄酮类、多酚类及木脂素类成分为主，但醇提物与水提物化学成分具有明显差异，具体为：醇提物中的可水解类鞣质成分明显减少，鞣花酸的缺失，花青素类化合物的新增等。该研究为阐明头花蓼醇提物与水提物中的药效物质基础提供了重要依据。而且可以为基于“有效组分”的中药新药研制提供基础。

2.2 方炜等应用高速逆流色谱法对头花蓼水提喷雾干燥粉末的乙酸乙酯粗提物的化学成分进行了半制备性分离研究，通过对分离方法和溶剂系统的筛选，寻找到最佳的溶剂系统（正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水=1：5：1：5），上相为固定相，转速840r/min，流速2.0mL/min，进样量756mg，检测波长272nm。结果显示，在该条件下经一步分离可同时得到质量为148.5mg和9.2mg的两种产物，纯度为99.8%和97.4%，经紫外、红外、质谱及核磁共振等方法进行结构分析，确定分别为没食子酸和原儿茶酸。

2.3 张丽娟等：應用硅胶、sephadex LH-20、MCI、RP-18及半制备HPLC等各种色谱技术对头花蓼富含黄酮活性组分进行分离纯化，根据化合物的理化常数和波谱数据鉴定其结构;廖高尚等通过各种柱色谱技术对头花蓼进行分离纯化，根据理化性质、色谱性质和波谱数据进行头花蓼酚酸类化学成分研究。叶全知等采用硅胶柱层析、反相ODS柱色谱、SephadexLH20等分离手段对头花蓼降糖活性部位进行分离纯化，通过波谱数据分析进行结构鉴定。从头花蓼中共分离出7个木脂素类成分，分别鉴定为：（+）-异落叶松脂醇（1）、（-）-南烛木树脂酚-2a-O-[6-O-（4-羟基-3，5-二甲氧基）-苯甲酰基]-β-D-葡萄糖苷（2）、（-）-异落叶松脂素-2a-O-β-D-木吡喃糖苷（3）、（+）-5’-甲氧基异落叶松脂素9-O-β-D-木吡喃糖苷（4）、（-）-异落叶松脂素-3a-O-β-D-葡萄糖苷（5）、nudiposide（6）、lyoniside（7）。

3 有效成分的含量测定

3.1李雨生等HPLC法同时测定头花蓼中槲皮素与山奈酚的含量，采用Alltima C18柱（5um，4.6mm×250mm），流动相为甲醇-0.4%磷酸（50：50），流速0.8mL/min，检测波长360nm。结果：槲皮素在0.0216ug～0.389ug浓度范围内线性关系良好，r=0.9998。平均回收率为97.37%，RSD为1.88%;山奈酚在0.0051ug～0.0918ug浓度范围内线性关系良好，r=0.9993，平均回收率为97.09%，RSD为1.19%。

3.2 刘跃等建立头花蓼药材中没食子酸、原儿茶酸、陆地棉苷、槲皮苷、儿茶素、槲皮素3-O-（2”-没食子酰基）-鼠李糖苷及槲皮素的UPLC-MRM-MS检测方法。色谱采用WatersBEHC（2.1mm×50mm，1.7um）色谱柱，以0.1%甲酸乙腈0.1%甲酸水溶液为流动相，梯度洗脱，质谱采用多反应离子监测（MRM）检测。没食子酸、原儿茶酸、陆地棉苷、槲皮苷、儿茶素、槲皮素3-O-（2”-没食子酰基）-鼠李糖苷及槲皮索分别在0.136-32.965、0.031-7.481、0.022-5.300、0.076-18.433、0.085-20.737、0.017-4.147、0.128-31.029ug/mL浓度范围线性关系良好，平均回收率为91.23%～105.33%，RSD<3%，精密度、重复性和稳定性良好。此方法操作简便，快速，灵敏度高，可用于头花蓼药材中主要活性成分的含量测定，并为头花蓼药材质量控制提供了新方法。

3.3 曹芳等采用高效液相色谱（HPLC）法测定头花蓼冻干粉中槲皮素、槲皮苷的含量，色谱柱条件：AgilentODSC18（250.0mm×4.6mm，5um）;迪马 DiamonsilODSC18（250.0mm×4.6mm，5um），流动相为0.3%醋酸溶液（A）-乙腈（B），梯度洗脱，0～5min，92%～90%A;5～20min，90%～75%A;2O～40min，75%～50%A，40～41min，50%～92%A，41～50min，92%A。检测波长254nm，进样量10ul，流速1.0ml/min，柱温30℃。理论板数以槲皮苷峰计算应不低于5000，槲皮素在0. 209～0.1570ug内呈良好的线性关系，r=1.0000，平均回收率为101.49%，RSD为1.93%，槲皮苷在0. 368～2.760ug内呈良好的线性关系，r=0.9999，101.49%，平均回收率为98.87%，RSD为2.46%，该方法测定头花蓼冻干粉中槲皮素、槲皮苷的含量，结果准确，重复性、稳定性较好。

3.4王爱民等2011年用80%甲醇超声10min，制备供试品，并建立HPLC法测定了10批次四季草颗粒中头花蓼药材的槲皮苷含量，结果槲皮苷含量在0.9～I. 3 （mg/g）之间。刘程程等2012年比较了6种黔产中草药（黄柏、射干、头花蓼、板蓝根、龙胆草、栀子）中总黄酮、多酚、多糖在水和乙醇提取液中的含量。结果显示：头花蓼水提取液黄酮含量高于乙醇提取液，故提取头花蓼中的黄酮时宜用水作提取溶剂。

4 代谢方面

4.1 迟明艳等通过UPLCQ-TOF/MS鉴别大鼠口服头花蓼提取物后尿液中的原型成分及代谢产物，以探索其体内代谢过程及直接作用物质。流动相0.1%甲酸水溶液（A）0. 1%甲酸乙腈溶液（B）梯度洗脱（0～10min，95%～55%A;10～14min，55%～5%A;14～15min，5%～0%A;15～16min，0%～95%A），柱温45℃，流速0.3mL/min，进样量2uL以电喷雾质谱检测，扫描范围m/z50～1000，在负离子模式下扫描，通过比较空白尿液、给药尿液和两者的差异图谱确认灌胃后大鼠尿液中原型成分及其代谢产物。利用TOF/MS得到的准确相对分子质量，对尿液中头花蓼原型成分及代谢物进行鉴别。结果：鉴别出尿液中3个原型成分及15个代谢产物，推测头花蓼直接作用物质可能为原儿茶酸、槲皮素和没食子酸，或其经肝脏代谢的产物。该方法可靠、有效，可用于口服头花蓼提取物后尿液中化学成分鉴别，为该药材后续的药效物质基础研究提供参考。

4.2 孙慧园等采用UHPLC-Q-TOF/M S聯用技术，结合MetaboliteTools™、质量亏损过滤（MDF）等代谢产物分析技术，对各成分暴露模式斑马鱼24h后的药液以及模式斑马鱼体内的代谢产物进行筛查分析。结果没食子酸、原儿茶酸经斑马鱼作用后，主要以甲基化、硫酸化反应为主。在斑马鱼体内外药液检测到没食子酸原形成分和2个甲基硫酸化产物，以及原儿茶酸原形成分、2个甲基硫酸化产物、2个硫酸化产物。头花寥有效组分中没食子酸、原儿茶酸经斑马鱼代谢后存在II相代谢产物，这与大鼠体内的代谢机制高度一致，提示斑马鱼对头花寥有效组分的代谢具有合理性，为阐明该药的药效物质基础提供了实验依据。

结语

头花蓼作为民族道地药材，从20世纪80年代就已开始研究，成方制剂有热淋清颗粒和热淋清胶囊，主要应用于尿频、尿急、尿痛、肾盂肾炎等症。主要有效成分有黄酮、酚酸（没食子酸为主要有效成分），近几年有文献报道木脂素类成分在降糖方面有疗效;现在HPLC-MS/TOF、HMR、HSCCC等仪器的应用也越来越成熟，在头花蓼化学成分的制备、分离、鉴定、含量测定以及提取物在动物模型中代谢的研究应用广泛，为更充分的研究开发该植物提供了有效支持。

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