基于TMT的定量蛋白质组学技术解析盐胁迫提高库德毕赤酵母耐热性机制

刘秋影，李春生*，杨贤庆*，王悦齐，吴燕燕，马海霞

（1.中国海洋大学食品科学与工程学院，山东 青岛 266003；2.中国水产科学研究院南海水产研究所，农业农村部水产品加工重点实验室，国家水产品加工技术研发中心，广东 广州 510300）

发酵食品是一类利用微生物作用赋予食品营养与独特风味并可延长食品保存期的加工食品，在中国有着悠久历史和丰富内涵，是我国食品行业的特色产业之一。酵母菌是发酵食品中最常用的微生物之一，其乙醇发酵作用在白酒、啤酒、黄酒、葡萄酒、食醋等发酵食品的酿造过程中发挥重要功能。传统酵母菌对乙醇发酵的温度要求较高，其最适发酵温度为28～33 ℃，一般不超过36 ℃，然而发酵过程中不断释放的热量会造成发酵体系温度升高，使酵母菌活性降低，最终导致乙醇产量下降。库德毕赤酵母（），原称东方伊萨酵母（），是食品中常见的酵母菌，已从多种发酵食品体系中分离鉴定，在中国白酒、红酒、龙舌兰酒、ogi饮料、togwa等发酵食品的风味形成上发挥着重要作用。库德毕赤酵母是多耐性微生物，能够耐受多种胁迫条件，如热、高盐、高浓度乙醇、高渗透压、强酸、高浓度重金属等，可以适应复杂的食品加工环境，在食品工业领域具有广阔的应用前景。库德毕赤酵母在高温条件下（34～42 ℃）具有良好的乙醇生产能力。然而，当发酵温度超过45 ℃，库德毕赤酵母的生长及乙醇产量受到极大抑制。

在对耐性微生物应激防御机制的研究中发现，多种胁迫共同作用会对微生物产生交互保护作用，即当微生物对某一种逆境因子启动防御保护时，会激发多种与压力胁迫相关基因的表达，促使微生物对其他逆境因子的抵抗能力也得到增强。据报道，盐酸胁迫能够显著提高干酪乳杆菌的交互胁迫抗性，其引发的生理应答效应使细胞在应对热致死和氧致死胁迫下的存活率显著提高。氧化应激胁迫增加了荧光假单胞菌SN15-2细胞内氧化应激反应相关蛋白和其他对细胞有保护作用蛋白的表达，从而提高了菌株的耐热性。前期研究发现，无机盐胁迫能够显著提高库德毕赤酵母的热耐性以及在高温条件下的乙醇发酵能力，然而盐胁迫下库德毕赤酵母耐热性提高机制还未明确。

近年来，蛋白质组学研究方法发展迅速，基于串联质谱标签（tandem mass tags，TMT）的定量蛋白质组学技术是目前差异表达蛋白（differentially expressed proteins，DEPs）定量分析方法中通量最高、系统误差最小、功能最强大的分析方法之一，具有高灵敏度、高分离能力、高通量等特点。本研究以多耐性库德毕赤酵母A16为研究对象，利用TMT定量蛋白质组学技术分析单独热胁迫组和热-盐共胁迫组之间的蛋白质组差异，筛选与耐热性提高相关的关键蛋白，在蛋白质组水平阐明盐胁迫提高库德毕赤酵母耐热性的分子机制，以期为耐热酵母菌的基因工程改造提供重要技术基础，对提高酵母菌的高温乙醇发酵能力具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

库德毕赤酵母A16分离自中国高温白酒酒曲。

酵母浸出粉胨葡萄糖（yeast extract peptone dextrose，YEPD）斜面培养基：1%酵母浸粉、2%蛋白胨、2%葡萄糖、2%琼脂，pH 5.0；YEPD液体培养基：1%酵母浸粉、2%蛋白胨、2%葡萄糖，pH 5.0。

蛋白质羰基含量测试盒、微量丙二醛（malondialdehyde，MDA）测试盒 中国生物工程南京建成生物工程研究所；TMT试剂、Pierce BCA试剂盒美国Thermo Fisher Scientific公司。

1.2 仪器与设备

C色谱柱、高效液相色谱仪、串联质谱仪 美国Thermo Fisher Scientific公司；超声波细胞破碎仪 江苏波场智能科技股份有限公司；数显式稳压稳流电泳仪上海天能科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 酵母菌活化

用接种环将YEPD斜面保存的酵母菌接种到新鲜的YEPD斜面上。30 ℃培养24 h后，用接种环轻轻刮取菌体接种到YEPD液体培养基中，30 ℃、180 r/min摇床培养24 h。

1.3.2 盐胁迫对酵母菌耐热性和氧化损伤的影响

将活化培养的酵母菌接种到含有不同NaCl浓度（0～500 mmol/L）的YEPD液体培养基中，控制初始生物量为0.1 g/L（干质量）。45 ℃、180 r/min水浴振荡培养24 h后，发酵液5 000 r/min离心10 min，去上清液，菌体用超纯水洗涤2 次，然后在105 ℃烘干至质量恒定，计算酵母菌的生物量（g/L）。

将在不同胁迫条件下培养的酵母细胞离心，用磷酸盐缓冲液洗涤2 次，菌体用500 W超声破碎仪破壁30 min（10 s/10 s），4 ℃、12 000 r/min离心15 min取上清液，分别采用微量丙二醛测试盒和蛋白质羰基含量测试盒测定细胞内MDA含量（nmol/mg）和蛋白质羰基含量（nmol/mg）。

1.3.3 基于TMT的定量蛋白质组学分析

1.3.3.1 蛋白质提取

将活化培养的酵母菌分别接种到含有0 mmol/L NaCl（T45组）、100 mmol/L NaCl（T45S100组）和300 mmol/L NaCl（T45S300组）的YEPD液体培养基中，45 ℃、180 r/min水浴振荡培养24 h后，发酵液5 000 r/min离心10 min，菌体用磷酸盐缓冲液洗涤2 次后，加入适量的蛋白质裂解液（8 mol/L尿素、1%十二烷基硫酸钠，含蛋白酶抑制剂），冰上超声2 min后裂解30 min，4 ℃、12 000h离心30 min，取蛋白质上清液。使用Thermo Scientific Pierce BCA试剂盒进行蛋白定量，并用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳检验蛋白完整性。

1.3.3.2 酶解烷基化以及TMT标记

取蛋白样品100 μg，用裂解液补充体积到90 μL。加入终浓度10 mmol/L三(2-羧乙基)膦还原剂，37 ℃反应60 min。加入终浓度40 mmol/L碘乙酰胺，室温下避光反应40 min。每管各加入预冷的丙酮（丙酮-样品体积比6∶1），－20 ℃沉淀4 h，10 000h离心20 min，取沉淀。用50 mmol/L三乙基碳酸氢铵缓冲液充分溶解样品，按照酶-蛋白质量比1∶50加入胰蛋白酶在37 ℃酶解过夜。TMT试剂加入乙腈解冻重组，并加入多肽溶液中进行标记，室温孵育2 h；加入羟胺，室温反应15 min，将等量标记产物混合于一管中，真空浓缩仪抽干。

1.3.3.3 液相色谱-串联质谱（liquid chromatographytandem mass spectrometry，LC-MS/MS）检测

采用纳升级LC-MS/MS技术（Easy-nLC 1200结合Q Exactive质谱仪）进行分析。肽段用质谱上样缓冲液溶解，上样后经C色谱柱（75 μmh25 cm）分离120 min，体积流量为300 μL/min。EASY-nLC液相梯度洗脱，流动相A为0.1%甲酸-2%乙腈，B为0.1%甲酸-80%乙腈。按照以下程序进行梯度洗脱：0～1 min，100%～95% A、0%～5% B；1～63 min，95%～77% A、5%～23% B；63～88 min，77%～52% A、23%～48% B；88～89 min，52%～0% A、48%～100% B；89～95 min，0% A、100% B。MS和MS/MS采集之间自动切换，质谱分辨率分别是70 000和35 000。MS扫描范围为/350～1 300，选择top20的母离子进行二级碎裂，动态排除时间为18 s。

1.3.3.4 蛋白质比对及DEPs筛选

以库德毕赤酵母129的蛋白质组（GCF_001983325.1）作为参考蛋白质组，对质谱下机的原始文件经Proteome Discoverer进行分析。肽段鉴定的错误发现率（false discovery rate，FDR）设置为FDR≤0.01。使用R语言中的test函数计算样本间差异显著性，同时计算组间蛋白质表达差异倍数（fold change，FC）。以1.5 倍差异表达，即|logFC|＞0.58且＜0.05作为DEPs的筛选标准。

1.3.3.5 生物信息学分析

将鉴定到的蛋白质序列与基因本体论（Gene Ontology，GO）、直系同源群集（Cluster of Orthologous Group，COG）、京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）、Pfam、亚细胞定位等数据库进行比对，获得蛋白在各数据库的注释信息。

1.4 统计学分析

生物量结果采用SPSS 18.0软件对数据进行单因素方差分析（ANOVA），应用多重比较Tukey检测对数据之间的差异性进行检验，＜0.05，差异显著。采用主成分分析（principal component analysis，PCA）评价不同处理下库德毕赤酵母蛋白质组的相似性。利用TBtools构建不同比较组DEPs热图。

2 结果与分析

2.1 盐胁迫对酵母菌耐热性和热胁迫诱导的氧化损伤的影响

如图1A所示，不同NaCl浓度（100～500 mmol/L）作用下，库德毕赤酵母在45 ℃热胁迫下的生物量显著提高，表明盐胁迫对库德毕赤酵母的热胁迫具有明显的交互保护作用。特别是当NaCl浓度为300 mmol/L时，盐胁迫的交互保护作用最为显著，此时库德毕赤酵母的生物量较无盐胁迫时提高了2.6 倍。细胞中多不饱和脂肪酸极易受到活性氧（reactive oxygen species，ROS）攻击，使其发生过氧化反应，产物MDA常作为脂质过氧化的指标，而蛋白质羰基化是蛋白质氧化损伤最主要表现之一，蛋白质羰基含量可以反映细胞蛋白质氧化损伤程度。由图1B可见，与正常培养（30 ℃）相比，热胁迫下（45 ℃）库德毕赤酵母细胞内MDA含量和蛋白质羰基含量显著增加。盐胁迫后，库德毕赤酵母在热胁迫下

图1 盐胁迫对库德毕赤酵母菌株耐热性（A）和氧化损伤（B）的影响Fig.1 Effect of salt stress on thermotolerance (A) and oxidative damage (B) of P.kudriavzevii

2.2 不同胁迫处理下酵母菌全蛋白功能注释

为了揭示盐胁迫提高库德毕赤酵母耐热性的作用机制，利用TMT定量蛋白质组学技术研究库德毕赤酵母在单独热胁迫组（T45组）和热-盐共胁迫组（T45S100组和T45S300组）之间的蛋白质组差异。3 个处理组共鉴定到3 875 个蛋白质，基于每个处理组中蛋白质种类及含量，利用Pearson相关性分析和PCA对3 个处理组全蛋白的相似度进行研究。Pearson相关性越接近于1表明样本间的蛋白组成相似度越高，图2A结果显示，平行样品间的相似度最高，T45组与T45S100组全蛋白的差异性较小，而与T45S300组的差异性较大。图2B PCA结果显示，PC1和PC2可以反映全部信息的73.80%，提取较为完全，这说明这2 个PC能够替代原始成分反映样品信息。其中PC1对整体结果影响最大，代表了全部信息的56.40%，PC1结果显示，平行样品间距离最近，T45组与T45S100组距离较近，而与T45S300组较远，说明T45组与T45S100组全蛋白的相似度较高，而与T45S300组的相似度较小。结果表明，高盐胁迫能显著改变库德毕赤酵母在热胁迫下的蛋白质表达。

将鉴定到的蛋白序列与GO、KEGG、COG、Pfam、亚细胞定位等数据库进行比对，获得蛋白质在各数据库的注释信息（图2C）。共有2 073 个蛋白获得COG功能注释（图2D），其中注释到最多个蛋白质的功能，包括功能未知（687 个），翻译、核糖体结构和生物发生（207 个），翻译后修饰、蛋白质转换、伴侣蛋白（192 个），细胞内运输、分泌和囊泡运输（168 个），翻译（164 个），氨基酸的转运和代谢（88 个），复制、重组和修复（78 个）等。共有2 738 个蛋白获得KEGG通路注释，其中重要通路有核糖体（108 个），RNA转运（80 个），酵母细胞周期（78 个），氧化磷酸化（76 个），内质网中的蛋白质加工（74 个）等（图2E）。的MDA含量和蛋白质羰基含量均显著下降，与正常培养下的含量无显著差异，特别是当NaCl浓度为300 mmol/L时，MDA和蛋白质羰基含量最低。

图2 库德毕赤酵母在不同胁迫下全蛋白功能注释Fig.2 Functional annotations of whole proteins in P.kudriavzevii under various stresses

共有3 382 个蛋白获得GO功能注释，主要分为生物学过程、细胞组分、分子功能3 大类，其中生物学过程类别主要涉及细胞过程、代谢过程、生物调控、定位等功能；细胞组分类别主要涉及细胞结构体和含蛋白质复合物；分子功能类别主要涉及催化活性、绑定等功能（图2F）。共有3 320 个蛋白获得功能域注释，其中注释到最多个蛋白质的功能域为WD40（178 个）和Pkinase（83 个）（图2G）。所有蛋白质（3 875 个）都得到了亚细胞定位预测，这些蛋白主要分布在细胞质（2 206 个）、细胞核（761 个）、线粒体（327 个）和高尔基体（228 个）（图2H）。

2.3 盐胁迫对酵母菌热胁迫蛋白表达的影响

以|logFC|＞0.58且＜0.05作为DEPs的筛选阈值，结果如图3A所示。T45S100 vs T45的DEPs较少，只有14 个，与T45组相比，T45S100组上调DEPs有8 个，下调DEPs有6 个。T45S300 vs T45的DEPs较多，共130 个，T45S300组上调DEPs有68 个，下调DEPs有62 个。T45S100 vs T45和T45 vs T45S300两个比较组共有的DEPs有12 个，T45 vs T45S100和T45S300 vs T45独有的DEPs分别有2 个和118 个（图3B）。对DEPs进行GO、COG 、KEGG功能注释。全蛋白功能注释结果一致，T45S100 vs T45和T45S300 vs T45两个比较组DEPs的GO功能主要涉及细胞过程（3和34）、代谢过程（3和32）、细胞结构体（4和32）、含蛋白质复合物（0和10）、催化活性（3和37）和绑定（2和30）（图3C）。将两个比较组DEPs与COG数据库进行比对，结果发现，除了功能未知（2和22）外，COG功能主要集中在碳水化合物运输和代谢（0和11），翻译后修饰、蛋白质转换、伴侣蛋白（1和6），氨基酸运输与代谢（0和3）等（图3D）。两个比较组DEPs的KEGG代谢通路主要集中在物质的运输与代谢中，其中T45S300 vs T45的DEPs较多，主要包括碳水化合物代谢（1和5）、氨基酸代谢（3和11）、脂质代谢（0和10）、核苷酸代谢（0和6）、能量代谢（0和8）和膜转运（2和25）（图3E）。

图3 T45S100 vs T45和T45S300 vs T45比较组DEPs筛选及功能注释Fig.3 Screening and functional annotations of DEPs in T45S100 vs T45 and T45S300 vs T45

基于KEGG代谢通路注释，对上调和下调的DEPs进行分析，结果图4所示。上调和下调的DEPs在T45S100组和T45S300组中基本表现出一致性，而且各个DEPs表达量的变化与盐胁迫浓度密切相关：大部分上调的DEPs在T45S300组的上调倍数大于T45S100组，而下调的DEPs在T45S300组的下调程度大于T45S100组。在碳水化合物代谢中，高盐胁迫（T45S300组）显著提高了糖酵解/糖异生代谢通路中蛋白的表达，其中T45S300组上调DEPs有12 个，下调DEPs只有2 个；淀粉和蔗糖代谢（葡萄糖-6-磷酸异构酶、己糖激酶（hexokinase，HK）、HK2）和磷酸戊糖途径（乙醇脱氢酶（alcohol dehydrogenase，ADHP）4、果糖二磷酸醛缩酶（fructose-bisphosphate aldolase，FBA））代谢通路中的DEPs全部上调。在氨基酸代谢中，盐胁迫显著降低了与氨基酸降解相关的酶的表达，如色氨酸、组氨酸、精氨酸等。在能量代谢中，涉及到氧化磷酸化（V型质子ATP酶亚基c’（V-type proton ATPase subunit c’，ATP6L）、细胞色素c氧化酶亚基6A（cytochrome c oxidase subunit 6A，COX6A））和硫代谢（蛋白质APA1）代谢通路的DEPs在T45S300组全部上调。在脂质代谢中，DEPs主要参与甘油磷脂代谢、甘油脂代谢、类固醇生物合成，其中涉及到甘油磷脂合成（二酰基甘油焦磷酸磷酸酶1）和类固醇合成（甲基固醇单加氧酶）的DEPs在T45S300组中全部上调。在膜运输中，DEPs主要为糖、钠离子和多肽的转运蛋白，其中涉及到糖（糖转运蛋白STL1）和离子转运（钠转运ATP酶5（sodium transport ATPase 5，ENA））的DEPs在盐胁迫后表达量显著提高。

图4 基于KEGG通路注释的T45S100 vs T45和T45S300 vs T45比较组中DEPs热图Fig.4 Heat map of DEPs in T45S100 vs T45 and T45S300 vs T45 based on KEGG pathway annotation

2.4 盐胁迫提高库德毕赤酵母耐热性机制

酵母菌在高温条件下的乙醇发酵能力与其耐热性密切相关，耐热性的提高有助于提升其在高温条件下的乙醇产量。本研究发现，盐胁迫对库德毕赤酵母热胁迫产生交互保护作用，显著提高其耐热性。进一步采用TMT定量蛋白质组学技术研究了库德毕赤酵母在单独热胁迫组和热-盐共胁迫组之间的蛋白质组差异，筛选了关键的DEPs，结果如表1所示。根据不同胁迫条件下蛋白质组的比较结果，在蛋白质组水平初步揭示了盐胁迫对库德毕赤酵母热胁迫交互保护机制（图5）。

图5 盐胁迫提高库德毕赤酵母耐热性机制示意图Fig.5 Schematic representation of the proposed mechanisms of improved thermotolerance by salt stress in P.kudriavzevii

表1 盐胁迫下与库德毕赤酵母热耐性提高相关的关键DEPsTable 1 Key DEPs related to the improved thermotolerance of P.kudriavzevii by salt stress

热休克蛋白（heat shock protein，HSP）是一类受到外源刺激产生的具有高度保守性的非特异性保护蛋白。在热胁迫下，HSP主要作为分子伴侣，预防和修复变性或错误折叠的蛋白质。小热休克蛋白（small HSP，sHSP）的种类繁多，是HSP家族中最多样化的群体。作为sHSP家族的一员，HSP12在盐胁迫后其基因表达量显著增加，对库德毕赤酵母镉胁迫产生了明显的交互保护作用。研究比较蛋白质组结果显示，盐胁迫显著增强了热胁迫下库德毕赤酵母HSP12的表达水平，特别是T45S300组，其细胞内HSP12含量较单独热胁迫下（T45组）提高了1.5 倍，有利于酵母菌维持热胁迫下细胞内蛋白质的稳定，增强其耐热性。麦角甾醇作为一种重要的酵母甾醇，参与维持细胞膜的流动性、完整性和通透性。有研究表明，麦角甾醇产量的增加明显提高了的耐热性。本研究发现，与麦角固醇合成相关的酶，包括麦角固醇生物合成蛋白28（ergosterol biosynthetic protein 28，ERG28）和甲基固醇单加氧酶（ERG25）在盐胁迫后显著增强，对于稳定热胁迫下库德毕赤酵母细胞膜的正常生理功能，提高其耐热性具有重要作用。

热胁迫可诱导细胞内超氧阴离子自由基、HO等ROS的产生，而过量ROS积累将引起细胞内脂质、蛋白质等生物大分子的氧化损伤。本研究也观察到了相似的结果，热胁迫下库德毕赤酵母细胞内MDA含量和蛋白质羰基含量明显增加，表明细胞脂质和蛋白质在热胁迫下产生了明显的氧化损伤，导致生物量显著下降（图1）。盐胁迫后，库德毕赤酵母在热胁迫下的脂质和蛋白质氧化损伤得到了显著改善。谷胱甘肽S-转移酶（glutathione S-transferase，GST）是催化亲电子基团与还原型谷胱甘肽的巯基偶联重要的酶，在细胞内起到异源物质代谢和解毒作用。GST具有类似过氧化物酶的作用，能够清除细胞内ROS。前期研究发现，盐胁迫能显著提高库德毕赤酵母在镉胁迫下GST基因的表达。本研究通过定量蛋白质组学技术也发现了类似的结果，盐胁迫（300 mmol/L NaCl）显著增强了库德毕赤酵母热胁迫下GST的表达水平，这对于降低热胁迫诱导的氧化损伤、提高酵母的耐热性发挥着重要作用。

碳水化合物代谢和能量代谢为酵母的正常生长和繁殖提供必要的能量。本研究中，盐胁迫显著提高多种碳水化合物代谢通路相关酶的表达，其中糖酵解相关的酶有HK、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）、磷酸甘油酸变位酶（phosphoglycerate mutase，PGAM）、磷酸甘油酸激酶（phosphoglycerate kinase，PGK）和丙酮酸激酶（pyruvate kinase，PK）；参与磷酸戊糖途径的酶有FBA和ADHP。这些酶表达量的提高促进了库德毕赤酵母在热胁迫下产生更多的NADH，这些NADH随后进入线粒体的氧化磷酸化过程中用以进行ATP合成。与此同时，能量代谢途径中涉及氧化磷酸化的多种关键酶在盐胁迫后表达量显著增加，主要包括COX6A和ATP6L，有利于库德毕赤酵母在热胁迫下的ATP合成。有研究表明，酵母细胞在热胁迫下ATP水平明显降低，ATP合成的改善有利于酵母耐热性的提高。因此，本研究中盐胁迫后糖酵解途径、磷酸戊糖途径、氧化磷酸化途径等多种酶表达量的提高，有利于细胞产生更多的ATP，为热胁迫下细胞的正常新陈代谢提供必要的能量，在酵母耐热性提高过程中发挥着重要作用。

此外，与膜转运相关的蛋白，ENA、糖转运蛋白STL1表达水平在盐胁迫后显著提高。ENA具有结合ATP和ATP偶联阳离子跨膜转运体活性的功能，在维持细胞内Na的生理浓度方面起着关键作用，在正常生长条件下ENA在细胞中处于相对较低的水平。本研究中，随着盐胁迫浓度增加，ENA表达量逐渐上升，这可以防止细胞内Na含量过高，降低盐胁迫对细胞造成的不利影响。STL1主要酵母细胞碳水化合物和甘油的运输。前期研究发现，盐胁迫能够显著提高库德毕赤酵母发酵液中的甘油含量。STL1表达水平的提高对于维持酵母细胞内外甘油平衡、保障热胁迫下细胞正常生理功能有重要意义。此外，前期的研究表明，盐胁迫主要通过提高库德毕赤酵母的耐热性提高其在高温条件下的乙醇产量。本研究发现，盐胁迫后库德毕赤酵母细胞内ADHP的表达量显著提高，有利于将糖酵解产物乙醛进一步催化生成乙醇。本研究表明，盐胁迫后ADHP表达量的提升是库德毕赤酵母在高温条件下乙醇产量提升的另一个重要原因。

3 结 论

盐胁迫（100～500 mmol/L NaCl）能够对库德毕赤酵母热胁迫产生交互保护作用，显著提高其耐热性。基于TMT技术的定量蛋白质组学研究发现，盐胁迫特别是高盐胁迫显著影响库德毕赤酵母在热胁迫下的蛋白质表达。盐胁迫显著增强了库德毕赤酵母细胞内HSP12，以及ERG28、ERG25等麦角固醇合成相关酶的表达，有利于维持热胁迫下细胞内生物大分子结构和功能的稳定。盐胁迫显著抑制热诱导的MDA和蛋白质羰基的产生，这可能与GST大量表达对ROS的清除作用有关。同时，热胁迫下库德毕赤酵母细胞内与碳水化合物代谢和能量代谢的多种酶（HK、GAPDH、PGAM1、PGAM2、PGK、ADHP、COX6A、ATP6L）在盐胁迫后表达量显著提高，有利于细胞内ATP合成，维持热胁迫下细胞的正常新陈代谢。本研究不仅为耐热酵母菌的基因工程改造提供重要技术基础，同时还为其他耐性微生物交互保护的研究提供重要参考。