胃癌患者血清miR-20a-5p、miR let-7a表达及其临床意义

胃癌是威胁人类生命健康的主要疾病，在世界恶性肿瘤中发病率居第5位，死亡率居第3位

。近年来，我国已成为全球胃癌高发国家，胃癌的发病率居高不下，目前对于胃癌的治疗方式主要是通过手术切除病灶或化疗，但预后往往较差

。目前临床认为D2淋巴结清扫可以作为胃癌的标准术式

。而肿瘤的大小、位置、分化程度及组织学分型也会影响胃癌患者的预后

。随着分子生物学研究的发展，有研究指出分子机制的改变可以影响胃癌预后，如癌基因的激活、miRNA、肿瘤干细胞表达等

。miRNA是非编码的小核糖核酸，在众多细胞活动中起调节作用，参与细胞的增殖

。有研究

指出，miR-20a-5p能调节正常细胞的生长发育，可参与胃癌的发生和发展，miR let-7a在胃癌中呈低表达，但其具体功能机制尚不清楚。为了进一步深入探讨miR-20a-5p、miR let-7a表达在胃癌患者中的变化情况，以及上述血清表达对胃癌患者1年内死亡的预测价值，本研究选取180例胃癌患者进行探讨，以期指导临床治疗，现报道如下。

1 资料与方法

选取我院2019年1月至2021年5月收治的180例初诊胃癌患者记为癌症组，另招募同时间段153名健康志愿者记为对照组。癌症组中男95例，女85例，年龄(60.05±10.11)岁(41～86岁)；管状腺癌83例，黏液腺癌97例；肠型胃癌78例，弥漫型胃癌102例；膨胀型胃癌104例，浸润性胃癌76例；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期62例，Ⅲ～Ⅳ期118例；未/低分化88例，中/高分化92例；有淋巴结转移83例；有远处转移65例；手术切除病灶100例，化疗80例。对照组中男78名，女75名，年龄(59.75±9.92)岁(40～85岁)。两组一般资料比较，差异无统计学意义(

>0.05)。本研究经我院医院伦理委员会审批通过(审批号：201812-002)。

纳入标准：(1)癌症组符合胃癌诊断标准

，且均为初诊患者；(2)对照组均为体检健康者；(3)均对本研究知情并签署同意书。

排除标准：(1)有其他可能影响miR-20a-5p、miR let-7a表达的疾病者，如乳腺癌、睾丸恶性肿瘤、食管癌、鼻咽癌等；(2)合并有心、肺、肝、肾等疾病者；(3)患有感染性疾病者，如肺炎、肝炎、流感等；(4)患有慢性病者，如糖尿病、高血压等；(5)自身免疫性疾病，如风湿性关节炎等；(6)合并其他部位恶性肿瘤者；(7)合并严重心脑血管等重大疾病者，如脑动脉硬化症、脑梗塞、脑栓塞等；(8)已接受治疗或复发病例者。

声乐是一门集艺术性、知识性、技术性和实践性于一体的艺术门类，是人类用于抒发情感，交流情感的一种自然而普遍的形式。唱天唱地唱人物，唱哭唱笑唱愤怒，都是唱情。它是一门音乐与语言相结合的艺术，通过悦耳的声音和清晰的语言表达内心丰富的感受。无情不唱，不唱无情。这是我们对歌唱的真实感悟。大诗人白居易说：“感人之心，莫先于情。”演唱者唱心和观众感心的艺术加工过程。歌唱者通过歌唱及表演来将作品中的每一个音符表达出来，也是理解情感——获得情感——表达情感的过程。由此可见，情感是演唱的灵魂。

癌症组Ⅲ～Ⅳ期、未/低分化、有淋巴结转移、有远处转移患者血清miR-20a-5p表达均高于Ⅰ～Ⅱ期、中/高分化、无淋巴结转移、无远处转移的患者(

<0.05)；癌症组Ⅲ～Ⅳ期、未/低分化、有淋巴结转移、有远处转移患者血清miR let-7a表达均低于Ⅰ～Ⅱ期、中/高分化、无淋巴结转移、无远处转移的患者(

<0.05)(见表2)。

根据规范和教科书来看，岩矿石标本电性参数的测量方法主要分为两种：一是露头法，二是标本法。露头法测量一般多采用露头小四极法或小极距测深法[2]；标本法测量常用的测量方法主要为蜡封法、双盆边架法、标本架法、泥(面)团法[3]。野外生产中多采用标本架法和泥(面)团法。

1.2.1 检测方法：癌症组于入院时、对照组于体检当天，均采集静脉血3 ml，采用RT-PCR法检测血清miR-20a-5p、miR let-7a表达，将患者静脉血置于离心管中，混匀，在4 ℃条件下，3 000 r/min离心10 min，在-108 ℃的冰箱中保存备用。在4 ℃条件下，以5 000 r/min进行离心，10 min后取清液，取出血清解冻，溶解，试管中放入300 μl血清，采用北京雷根生物技术有限公司的Trizol试剂，货号为R21086-100，提取总RNA，使用由江苏科晶生物科技有限公司提供的RT-PCR试剂盒，货号为SD102，将RNA逆转录为cDNA，在-108 ℃的冰箱中保存。根据生物分类数据库确定miR-20a-5p、miR let-7a的引物序列，内参为U6，miR-20a-5p上游序列：5′-ACGTTGTCTAGCTTATCAGACTG-3′，下游序列：5′-AATGGTTGTTCTCCACACTCTC-3′；miR let-7a上游序列：5′-AGTGAACATTCAACGCTGTCGCT-3′，下游序列：5′-CCCATAGGGTACAATCAACGGTCG-3′；U6上游序列：5′-CTGAGATCGGATAGCTA-3′，下游序列：5′-CTGAGATATGCGATAGC-3′。反应条件如下：95 ℃预变性10 min，74 ℃变性15 s，60 ℃退火，进行38个循环。通过2

法计算血清miR-20a-5p、miR let-7a的相对表达量。

1.2.3 治疗和随访：参照《胃癌规范化诊疗指南(试行)》对患者实施常规抗肿瘤治疗，包括新辅助化疗、手术、行术后化疗放疗、维持治疗、中医药治疗等

。随访：通过电话和复诊方式对胃癌患者进行随访，每3个月随访1次，随访1年。

癌症组1年内死亡率为17.78%，Ⅲ～Ⅳ期、未/低分化、有淋巴结转移、有远处转移、血清miR-20a-5p表达、未遵医嘱治疗均是影响癌症组1年内死亡的危险因素(

=4.076、4.100、4.845、4.968、5.924、4.768，

<0.05)，血清miR let-7a表达是其保护因素(

=0.587，

<0.05)(如表3～4)。

(1)比较癌症组与对照组血清miR-20a-5p、miR let-7a表达。(2)比较癌症组不同临床病理特征患者血清miR-20a-5p、miR let-7a表达，包括性别、年龄、临床分期、分化程度、是否有淋巴结转移、是否有远处转移。(3)记录癌症组1年内死亡的影响因素及各影响因素的系数(

)、标准误(

)、统计值(

值)、

值、

值及其95%

。(4)分析血清miR-20a-5p、miR let-7a表达对癌症组1年内死亡的预测价值，其中任何一项指标预测癌症组1年内死亡即认为联合预测阳性，记录各指标预测癌症组1年内死亡的灵敏度、特异度、曲线下面积(

)及其95%

。

2 结果

血清miR-20a-5p、miR let-7a表达联合预测癌症组1年内死亡的灵敏度、

均高于单独预测，特异度与单独预测对比差异均无统计学意义(见表5、图1)。

1.2.2 临床病理特征采集：标本采集主要包括患者的性别、年龄、临床分期、分化程度、是否有淋巴结转移、是否有远处转移。具体如下：统计患者的性别、年龄等一般资料；根据2016年10月国际抗癌联盟及美国肿瘤联合会颁布的第8版胃癌TNM分期系统

，统计患者的临床分期资料；结合患者的临床表现、内镜及组织病理学、影像学检查等进行胃癌的分化程度和鉴别诊断；根据患者的疼痛及其他临床特征诊断淋巴结转移以及远处转移。

2）设备破损丢失。学生天天守着一台台的设备，思维活跃的学生很容易产生过度动手操作的欲望，进行非正常操作，很容易导致设备损坏，甚至配件丢失。

(1)胡家庄碳酸岩型稀土矿流体包裹体以气液两相H2O包裹体为主，均一温度和盐度变化范围与微山稀土矿极具相似性，表明与其具有相似的成矿物理环境。

癌症组血清miR-20a-5p表达均高于对照组(

<0.05)，而血清miR let-7a表达低于对照组(

<0.05)(见表1)。

2.1.2 对照药材溶液的制备 分别取茅苍术和北苍术对照药材各0.8g，加甲醇10mL，超声处理15min，滤过，滤液作为对照药材溶液。

3 讨论

近年来，胃癌诊断及治疗方面取得了巨大进展，但进展期患者术后转移、复发的风险高。本研究中癌症组1年内死亡率为17.78%，与既往相关报道

中胃癌1年内死亡率17.92%基本相符，提示胃癌1年内死亡率高。因此，探讨胃癌患者病情进展、预后的生物学分子具有重要的临床意义。

本研究中，癌症组血清miR-20a-5p表达高于对照组，提示胃癌患者中血清miR-20a-5p表达高。有研究

指出，miR-20a-5p在肝癌、结肠癌、肺癌肿瘤组织中表达上调，血浆中均发现miR-20a-5p的表达升高，并且miR-20a-5p参与肿瘤的发生和发展。本研究发现Ⅲ～Ⅳ期、未/低分化、有淋巴结转移、有远处转移的癌症患者血清miR-20a-5p表达均高于Ⅰ～Ⅱ期、中/高分化、无淋巴结转移、无远处转移的患者，提示血清miR-20a-5p表达与胃癌患者临床分期、分化程度、淋巴结转移和远处转移相关。有研究

发现，胃癌组织中miR-20a-5p的低表达与淋巴结转移、TNM分期、肿瘤复发相关。Zhi等

研究表明，miR-20a-5p高表达与胃癌的临床分期有关。本研究与该文献报道一致。罗林等

研究表明，有远处转移的癌症患者血清miR-20a-5p表达高。上述研究结果说明miR-20a-5p的表达可以影响恶性肿瘤患者的病理特征。

本研究还发现，癌症组血清miR let-7a表达低于对照组，且Ⅲ～Ⅳ期、未/低分化、有淋巴结转移、有远处转移患者血清miR let-7a表达均低于Ⅰ～Ⅱ期、中/高分化、无淋巴结转移、无远处转移的患者，提示胃癌患者中血清miR let-7a表达低，且与胃癌患者临床分期、分化程度、淋巴结转移、远处转移相关。miR let-7a作为应用最广泛的miRNA，在肿瘤的多种病理中发挥重要作用。在非小细胞肺癌中，miR let-7a可通过靶向作用多个具有促癌作用的基因，在肿瘤的发生发展过程中起到关键作用

。miR let-7a能够抑制内皮细胞的活性，阻碍癌组织生长

。有研究

指出，miR let-7a的表达与患者的年龄、性别及肿瘤大小无明显相关性，而与胃癌的分化程度、临床分期及淋巴结转移密切相关，且在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者血清miR let-7a的表达显著高于Ⅰ期。以上研究表明，血清miR let-7a的改变是胃癌发生的早期事件，可能用于胃癌早期诊断，并有望成为胃癌早期诊断的分子标志物。

本研究还发现，血清miR-20a-5p、miR let-7a表达联合预测癌症组1年内死亡的灵敏度高于单独预测，

也高于单独预测，提示血清miR-20a-5p、miR let-7a表达对胃癌近期生存率具有一定的评估价值，临床上，通过监测血清miR-20a-5p、miR let-7a水平，有助于对胃癌患者1年内死亡的情况进行早期评估，以便于指导临床工作者及时制定相关预防对策，以控制病情进展，促进患者恢复。有研究

显示，胃癌组织中血清miR-20a-5p、miR let-7a表达均可影响患者复发率和1年生存率等预后情况。因此，对胃癌组织中miR-20a-5p、miR let-7a表达的检测有助于其预后情况判断，及时进行干预以改善胃癌患者的预后情况。miR let-7a表达影响预后可能是由于血管位蛋白样2可促进肿瘤血管生成，进而促进胃癌的发展和转移，而miR-20a-5p可通过调控雌激素表达而促进肿瘤侵袭转移，进而影响患者的生存期。

点E运动的路径长取决于两个方面：第一是点E的大致路线.点A是定点，PC=PA是不变的关系，∠PAC=45°是不变的量，所以点C的路线在“以A为端点、在AB左侧、且与AB成45°角的一条射线”上.根据“平移过程中所有对应点的连线一定平行(或在同一直线上)且相等”这一性质，点E的运动路径长转化为点C的运动路径长；第二是点C的运动范围，即点C的起点和终点.显然，点C的起点是点P与点A重合的位置，终点是点P与点B重合的位置.由此最终确定点C的运动路线.

本研究经多因素Cox回归分析显示，Ⅲ～Ⅳ期、未/低分化、有淋巴结转移、有远处转移、未遵医嘱治疗均是胃癌1年内死亡的影响因素，提示上述因素均可增加胃癌患者近期死亡的风险。与既往大量研究

报道结果一致。胃癌患者血清miR-20a-5p水平与胃癌组织分化程度相关，胃癌患者病理分化程度受血清癌胚抗原影响，分化程度越低，胃癌恶性潜能越高，患者病情发展越迅速，且临床抗肿瘤治疗的难度越大，因此患者死亡的风险越高；而早期胃癌淋巴结转移与肿瘤大小、浸润深度等有关，也会进一步加强死亡风险；存在远处转移患者胃癌组织表皮生长因子受体会异常表达，影响胃癌的发生与发展。未遵医嘱治疗也会加重患者病情，增加死亡风险。

综上所述，在胃癌患者中血清miR-20a-5p表达明显升高，miR let-7a表达低，且与临床分期、分化程度、淋巴结转移、远处转移均有关。血清miR-20a-5p、miR let-7a表达联合对胃癌患者1年内死亡有预测价值。

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