采用多条溶出曲线评价诺氟沙星胶囊的内在质量

胡 珀，王 萍

(淮安市食品药品检验所，江苏 淮安 223000)

诺氟沙星亦称氟哌酸，是第三代喹诺酮类全合成抗菌药，为第一个上市的氟喹诺酮类药物[1]。具有抗菌作用强、抗菌谱广、不良反应发生率低等优点，主要用于治疗敏感菌所致的尿路感染、淋病、前列腺炎、肠道感染和伤寒及其他沙门菌感染。诺氟沙星口服制剂的原研产品为日本杏林制药株式会社生产的诺氟沙星片，1984年在日本批准上市，目前100 mg规格仍在临床中广泛应用，并且是日本《医疗用医药品品质情报集》(平成23年3月31日)收载的参比制剂 (96页)[2]。诺氟沙星胶囊在我国最初只有天津和太原两家企业生产，后发展迅速，获批的生产企业共有645家。

我们在检验过程中发现，诺氟沙星胶囊溶出度测定结果具有显著性差异，且同厂家多批样品存在不同程度的差异较大的现象。发现部分厂家样品胶囊壳溶解而内容物不能均匀分散，呈柱状沉在杯底，考虑到诺氟沙星胶囊的各生产厂家的工艺不同，使用的辅料不同，尤其辅料中的淀粉和羧甲基淀粉钠易吸潮粘连，遇到溶出介质后会迅速将内容物包裹，导致溶出量降低。

溶出度试验技术是评价口服固体制剂内在质量的一种重要手段，该试验不仅可为建立体内外相关性提供基础数据，而且有望成为通过体外试验评价口服固体制剂质量的简易、有效可行的方法[3]。在多种pH溶出介质中溶出曲线的测定是先进国家药物审评机构评价口服固体制剂内在质量的一种重要手段。该试验可用于评估不同来源的同一制剂内在质量差异[4-5]。

迄今为止，我国相关部门已经颁布了约20个有关仿制药一致性评价的政策与文件，这些文件基本明确了和一致性评价工作相关的问题[6]。开展仿制药一致性评价的主要目的是将已经批准上市的仿制药品在质量与疗效方面能够与原研药品达到一致，在临床应用时可以与原研药品相互替代，这样将会大幅提升药品疗效，节约药品费用，从而降低患者负担[6]。诺氟沙星胶囊生产厂家众多，目前仅有三家药企通过了仿制药一致性评价。故挑选了3个厂家各3批样品和通过一致性评价的1批样品进行溶出曲线测定。

1 仪器与试药

1.1 仪 器

FADT-1200RC智能溶出仪，上海富科思；C613 自动溶出仪，瑞士SOTAX；ZKT-7F 真空脱气仪，天津天大天发科技；KH7200DE型数控超声波清洗器，昆山禾创超声仪器有限公司；XS205DU电子天平,瑞士METTLER TOLEDO，Milli-Q超纯水机,美国Millipore。

1.2 药品与试剂

诺氟沙星对照品(99.6%；中国食品药品检定研究院；批号：1130450-201907)；诺氟沙星胶囊(A厂家，批号：191008、200406、200405；B厂家，批号：200602、200603、200604；C厂家，批号：WDCA2006、WDKA1919、WDLA1906；D厂家，批号：2002152)；原研药诺氟沙星片(日本杏林制药株式会社，批号：Y001A)；盐酸(国药集团；优级纯；批号： 20200519)；冰醋酸(国药集团；分析纯；批号： 20190716)；氢氧化钠(天津科密欧；优级纯；批号：20200110)；磷酸(阿拉丁；色谱级；批号：H2020219)；三乙胺(麦克林；分析纯；批号：C11440376)；纯化水。

2 方法与结果

2.1 《中国药典》测定方法[7]

溶出度 照溶出度与释放度测定法(通则0931第二法)测定。溶出条件 以醋酸盐缓冲液(取冰醋酸2.86 mL与50%氢氧化钠溶液1 mL，加水900 mL，振摇，用冰醋酸或50%氢氧化钠溶液调节pH值至4.0，加水至1000 mL)1000 mL为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，经30 min时取样。供试品溶液 取溶出液适量，滤过，精密量取续滤液适量，用溶出介质定量稀释制成每1 mL中约含诺氟沙星5 μg的溶液。对照品溶液 取诺氟沙星对照品适量，精密称定，加溶出介质溶解并定量稀释制成每1 mL中约含5 μg的溶液。测定法 取供试品溶液与对照品溶液，照紫外-可见分光光度法(通则0401)，在277 nm的波长处分别测定吸光度，计算每粒的溶出量。限度 标示量的75%，应符合规定。

2.2 溶出介质的选择

药物pKa小于3.0 的可看作酸性药物，大于或等于3.0的可看作中/碱性药物。中性/碱性药物溶出曲线选择的4种介质pH分别为1.0或1.2、3.0～5.0、6.8和水。测定数量为达到统计学要求，规定每个品种的测定皆应选取12 个样本[8]。

诺氟沙星pKa值为6.34，故选择pH 1.2盐酸溶液、pH 4.0醋酸盐缓冲液、pH 6.8磷酸盐缓冲液和水为溶出介质。溶出介质的配制：

(1)pH 1.2盐酸溶液：取8～9 mL 盐酸，用水稀释至1000 mL，摇匀，即得。

(2)pH 4.0醋酸盐缓冲液：取醋酸钠1.22 g，2 mol/L醋酸溶液 20.5 mL，用水溶解并稀释至1000 mL，摇匀，即得。

(3)pH 6.8磷酸盐缓冲液：取27.22 g 磷酸二氢钾，加水至1000 mL 制得 0.2 mol/L磷酸二氢钾溶液；取8.0 g氢氧化钠加水至1000 mL，制得0.2 mol/L 氢氧化钠溶液；取250 mL 0.2 mol/L磷酸二氢钾溶液与112 mL 0.2 mol/L氢氧化钠溶液混合，用水稀释至1000 mL，摇匀。

(4)水即脱气纯化水。

2.3 时间点筛选

根据以上溶出介质，同药典测定方法，测定诺氟沙星胶囊参比制剂诺氟沙星片(100 mg；日本杏林制药株式会社；批号：Y001A)溶出曲线，各条件下的溶出量数值如表1所示。

根据参比制剂在以上4种介质中溶出曲线情况，pH 1.2、pH 4.0 15 min均能达到85%以上；水中在120 min不能达到85%，根据《普通口服固体制剂溶出曲线测定与比较指导原则》，水不能选做诺氟沙星胶囊的溶出介质。

表1 日本杏林制药株式会社诺氟沙星片在pH 1.2，4.0，6.8和水中溶出量数值(n=12片)Table 1 Dissolution values of norfloxacin tablets from JapanXinglin Pharmaceutical Co., Ltd. measured by pH 1.2, 4.0, 6.8 and water (n=12 tablets)

2.4 样品测定

在pH 1.2溶出介质条件下，全部样品15 min溶出量>85%；在pH 4.0溶出介质条件下，C和D厂家样品15 min溶出量>85%，而A和B 厂家样品15 min溶出量<85%，需做f2相似因子计算；在pH 6.8溶出介质条件下，B和C厂家样品 120 min溶出量<85%，故不再进行此条件下的均一性考察，A和D厂家样品需做f2相似因子计算。

2.5 批内均一性考察批间均一性考察

考察不同厂家诺氟沙星胶囊紫外-可见分光光度法在3种介质中进行批内和批间均一性考察，结果显示，通过一次性评价的D厂家样品在pH 1.2盐酸溶液、pH 4.0醋酸盐缓冲液和pH 6.8磷酸盐缓冲液3种介质中各时间点的RSD均小于10%，批内均一性良好，其他三个厂家在5～10 min内的RSD均有部分大于10。

2.6 溶出曲线相似性比较结果

溶出曲线相似性的比较，多采用非模型依赖法中的相似因子 (f2) 法。该法溶出曲线相似性的比较是将受试样品的平均溶出量与参比样品的平均溶出量进行比较。平均溶出量应为 12片(粒)的均值。计算公式如下：

式中：Rt为t时间参比样品平均溶出量；Tt为t时间受试样品平均溶出量；n为取样时间点的个数。

根据《普通口服固体制剂溶出曲线测定与比较指导原则》，当受试制剂和参比制剂在15 min的溶出量均不低于85%时，可认为二者溶出行为相似，否则可比较f2相似因子，当f2值高于50时，可认为两条曲线相似，受试与参比产品具有等效性。计算2因子时，选取的时间点间隔无需相等，但两制剂所取各时间点必须一致，且时间点不少于3个；在溶出率85%以上的时间点应不多于1个，否则便会使2因子变大。

按照拟定的溶出曲线测定方法，参比制剂在pH 1.2盐酸溶液和pH 4.0醋酸盐缓冲液中，15 min时溶出量达到85%以上，在pH 6.8磷酸盐缓冲液中，15 min溶出量未达85%。在pH 1.2盐酸溶液中4个厂家样品15分钟时溶出量达到85%以上；pH 4.0醋酸盐缓冲液中，A和B 厂家样品15 min溶出量数值均达到85%，C和D厂家样品15 min溶出量数值均未达到85%；在pH 6.8磷酸盐缓冲液中，A和D厂家样品15 min溶出量数值均未达到85%，B和C厂家样品120 min溶出量数值均未达到85%。溶出曲线见图1所示。

图1 诺氟沙星胶囊和参比制剂的溶出曲线图Fig.1 Dissolution curve of norfloxacin capsule and reference preparation

因此，诺氟沙星胶囊与参比制剂的溶出曲线相似性判断标准为：在pH 1.2盐酸溶液和pH 4.0醋酸盐缓冲液中，15 min溶出量数值均达到85%以上，溶出曲线相似；在pH 4.0醋酸盐缓冲液和pH 6.8磷酸盐缓冲液中，诺氟沙星胶囊与参比制剂比较f2相似因子，f2>50，溶出曲线均相似。相似因子统计结果见表2所示。

表2 相似因子统计(紫外-可见分光光度法)Table 2 Statistics of similarity factors(UV)

在pH 1.2盐酸溶液中，各厂家样品与参比制剂溶出行为相似；在pH 4.0醋酸盐缓冲液中，C和D厂家诺氟沙星胶囊与参比制剂溶出行为相似，其他厂家不相似；在pH 6.8磷酸盐缓冲液中，仅D厂家诺氟沙星胶囊与参比制剂溶出行为相似，其他厂家不相似。

3 结 论

综合上述分析，此次诺氟沙星胶囊制剂的抽验情况总体较好，所有抽验样品检查溶出度项均符合《中国药典》规定，但质量评价结果仍暴露出目前诺氟沙星胶囊在质量方面存在的问题，如各企业间胶囊的装填水平存在一定差距，溶出度测定结果差距较大，厂家应选择合适的辅料和空心胶囊，提高生产工艺，部分厂家也要关注投料准确性，体外溶出做到与原研制剂一致。