2021年宁波市南美白对虾苗种病原携带情况调查

文/许昊川 葛明峰 徐开崇 夏武强 王雯琼 徐胜威

为了解宁波市南美白对虾苗种病原携带情况，于2021年在宁波市象山、宁海、奉化、余姚、慈溪、鄞州等区县主要南美白对虾养殖产区采集522批次虾苗样品，以PCR方法检测样品携带虾肝肠胞虫（EHP）、急性肝胰腺坏死病（AHPND）、十足目虹彩病毒1（DIV1）和白斑综合征病毒（WSSV）病原情况，结果表明近年来宁波市南美白对虾苗种病原携带状况日渐改善，并为下一步宁波市开展南美白对虾疾病防控工作提供参考。

南美白对虾作为一种生长迅速、广泛耐盐、适应性强的水产动物，自引入宁波市以来，在象山、宁海、慈溪、奉化、余姚、鄞州等地形成了一定养殖规模。目前宁波市南美白对虾养殖面积超过10万亩，每年产值超过10亿元。

与此同时，养殖病害问题日渐严重，虾肝肠胞虫病、白斑综合征、急性肝胰腺坏死病、十足目虹彩病毒病等疾病时有发生，导致养殖南美白对虾大量死亡，给养殖户造成巨大经济损失，对水产养殖造成较大影响。

为了摸清宁波市南美白对虾疾病情况，降低疾病发生概率，宁波市于2021年采集象山、宁海、奉化、余姚、慈溪、鄞州等地虾苗进行虾肝肠胞虫（EHP）、急性肝胰腺坏死病（AHPND）、十足目虹彩病毒1（DIV1）和白斑综合征病毒（WSSV）等病原检测，统计宁波市南美白对虾虾苗病原携带率，以期为宁波市南美白对虾疾病防控工作提供参考。

一、材料与方法

（一）试验材料

2021年从象山、宁海、奉化、余姚、慈溪、鄞州等地养殖区和南美白对虾苗种标粗场采集样品，共计522批次，每批次样品不少于400尾。样品置于充氧袋中或无水乙醇中固定后送至实验室，24h内进行检测。具体采样信息见表1。

表1 样品采集时间及数量信息（单位：批次）

（二）方法

1.样品处理

样品送达实验室后，沥干水分并以超纯水冲洗，随机取150尾左右虾苗混合后研磨均质待用，剩余虾样作为备份于-80℃保存。

2.DNA提取

利用DNA提取试剂盒提取样品总DNA，于-20℃保存备用。

3.病原PCR检测

采用套式PCR检测，引物序列及目的条带大小见表2。

表2 引物序列和产物片段大小

4.PCR扩增产物检测

取5μL PCR扩增产物，于1.5%琼脂糖凝胶中（含核酸染料）电泳检测，并记录检测结果。

5.数据处理

使用Origin9.1软件对采样检测数据进行数据分析及数据对比。其中阳性样品指携带任意一种或多种检测病原的虾苗样品，整体阳性数指来自同一区域的阳性样品总数。整体阳性率=整体阳性数/样品总数×100%。

二、结果与讨论

（一）病原检出结果

检测病原包括WSSV、DIV1、EHP、AHPND，522批次南美白对虾虾苗中共计检出21批次携带病原，整体阳性率为4.02%。其中，EHP阳性15批次，阳性率2.87%；AHPND阳性4批次，阳性率0.77%；DIV1阳性2批次，阳性率0.38%；WSSV未检出。具体各月份病原检出情况见表3。

表3 2021年度南美白对虾苗种病原阳性样品月度分布情况（单位：批次）

（二）虾苗整体质量评价

由图1可知，2016年以来，宁波市南美白对虾苗种病原携带率持续下降。2021年监测的522批次虾苗中，共计检出21批次携带病原，整体阳性率为4.02%，显著低于2020年15.30%的整体阳性率。WSSV实现清零，DIV1和AHPND检出率低于1%，EHP阳性检出率为2020年的32%。这说明宁波市南美白对虾苗种疾病防控工作取得了良好效果。

图1 近五年宁波市虾苗病原监测阳性率情况

（三）虾苗病原检出率与时间关系

从病原检出时间来看，AHPND、DIV1均只在某一个月检出，说明不同月份该类病原出现有一定的偏向性；EHP在3、4、6、7、8月间均有检出，且6月检出阳性率最高，EHP检出的普遍性说明宁波市虾苗EHP携带风险仍较高，且6月份育苗条件可能更适合EHP繁衍。这一结果与2020年检测结果相吻合，这表明6月是南美白对虾感染EHP的高峰期，须提高警惕。

（四）EHP的防控建议

从多年的监测数据来看，在苗种阶段，EHP为宁波市近几年南美白对虾阳性检出率最高的病原。EHP已成为制约宁波市南美白对虾养殖发展最重要和最为高发的疾病之一。

宁波市历年对虾苗种病原监测分析结果表明：6月份为南美白对虾虾苗EHP检出率最高的时段，而8月份为南美白对虾养成期对虾EHP检出率最高期。这一数据提示本地养殖条件下，被EHP感染的虾苗在养殖40天左右可能出现明显症状，需要养殖户密切观察。

目前EHP仍无有效治疗措施，EHP在环境中的传播机制尚不明确，但已有证据表明EHP可以在环境中经由养殖饵料、水体实现水平传播，还可由亲虾传染至子代实现垂直传播，传染能力较强。基层养殖户应重视每年养殖前的消毒工作，减少其环境传播的风险。养殖过程中，也应尽量做到养殖工具专池专用，降低养殖塘口之间的疾病传播概率。在购苗、选苗时应加强苗种病原检测，放养SPF苗种，在源头上把关病原的输入性传播。