分析保护剂在农药残留检测中的应用

鹤壁市农产品检验检测中心 刘小丽 王风英 王丽娟 张艳丽 刘尚伟

水果、蔬菜中的农药残留量是衡量食品安全的一项重要指标，因此，研究水果、蔬菜中农药残留检测技术尤为重要。气相色谱法检测水果、蔬菜中农药残留具有快速、准确、灵敏度高，重现性好的优势，是农药残留分析应用中最普遍的技术。农药残留气相色谱法分析过程中通常存在很强的基质效应，从而影响检测结果的准确性。在纯溶剂标样溶液和待测样品溶液中加入相同数量的保护剂时，保护剂能同等程度地补偿标样溶液和样品溶液的基质效应。同一种保护剂在不同基质中，对不同类型农药的保护作用不同。在白菜、茄子、苹果、梨、橘子等5 种蔬菜水果用的有机磷农药的试验分析中加入L-古洛糖酸-γ-内酯和D-山梨糖醇，基质补偿效应明显。

一、材料与方法

（一）试验仪器、试剂

试验器材有Agilent GC 7890B 气相色谱仪（配有FPD 检测器、自动进样器、分流/不分流进样口），高速分散均质机，氮吹仪，快速混匀器，电子天平，均浆机，氮吹仪。试剂有乙腈（色谱纯）、丙酮（色谱纯）、氯化钠（分析纯）。

（二）标准溶液的配制

试验标准溶液由农业部环境保护科研监测所提供，试验标准溶液质量浓度均为100μg·mL-1。有机磷标液用丙酮稀释10μg·mL-1。

（三）分析保护剂的配制

1.配制L-古洛糖酸-γ-内酯储备液：称取L-古洛糖酸-γ-内酯500 mg，加入水4 mL，用乙腈定容至10 mL，冷冻保存。

2.配制D-山梨糖醇储备液：称取 D-山梨糖醇500 mg，加入水5 mL，用乙腈定容至10 mL，冷冻保存。

3.配制分析物保护剂溶液：吸取L-古洛糖酸-γ-内酯储备液4 mL 和D-山梨糖醇储备液2 mL，用乙腈定容至10 mL，冷冻保存。

（四）实验方法

根据《蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留检测方法》（NY/T 761-2008）进行检测。

二、试验条件和过程

（一）气相条件

气相检测条件。色谱柱VF-5MS（30 m×0.25 mm×0.25μm）；温度80 ℃保持1 min，以20 ℃·min-1的速度上升到130 ℃，再以5 ℃·min-1的速度上升到200 ℃，再以15 ℃·min-1的速度上升到250 ℃，保持11 min。进样体积1μL；进样口温度250℃，不分流进样；检测器温度300℃；进样口温度250℃；氮气流速30 mL·min-1；柱流速2 mL·min-1；空气流速17 mL·min-1；氢气流速14 mL·min-1。

（二）净化提取，加标

1.净化提取。试验样品破碎混匀后装入塑料盒内（样品中不含有加标农药），准确称取25.0 g,加入50 mL 乙腈,在匀浆机中高速匀浆2 min 后用滤纸过滤。过滤前用纯水湿润滤纸，过滤结束时用玻璃棒压滤纸挤净滤液。滤液收集到装有5～7 g 氯化钠的100 mL 具塞量筒中，盖上盖子，剧烈震荡1 min，在室温下静置30 min,使乙腈相和水相分层；用大肚管从100 mL 具塞量筒中分别吸取10.00 mL 乙腈溶液装入2 个小烧杯中,将烧杯放在温度80℃水浴锅上加热,氮吹近干；用丙酮定容至5 mL,在旋涡混合器上混匀,用一次性针管吸液，过滤膜后留用。

2.加标。未加入保护剂的加标样品：甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧化乐果、毒死蜱、马拉硫磷、甲拌磷亚砜、水胺硫磷、三唑磷、亚胺硫磷、伏杀磷、对硫磷、二嗪磷、乐果标液质量浓度均为10μg·mL-1。分别吸500μL到25.0 g 样品中，加标浓度为0.2μg·mL-1，分别吸1000μL 到25.0 g 样品中，加标浓度为0.4μg·mL-1，分别吸2000μL 到25.0 g 样品中，加标浓度为0.8μg·mL-1。净化提取后上机测定峰面积和保留时间。加入保护剂的加标样品：甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧化乐果、毒死蜱、马拉硫磷、甲拌磷亚砜、水胺硫磷、三唑磷、亚胺硫磷、伏杀磷、对硫磷、二嗪磷、乐果标液质量浓度均为10μg·mL-1。分别吸500μL 到25.0 g 样品中，加标浓度为0.2μg·mL-1，分别吸1000μL 到25.0 g 样品中，加标浓度为0.4μg·mL-1，分别吸2000μL 到25.0 g 样品中，加标浓度为0.8μg·mL-1。净化提取后后，加入80μL 分析物保护剂溶液，用丙酮定容至5 mL，上机测定峰面积和保留时间。

三、结果分析

（一）标准曲线相关性

下页表1 中的13 种有机磷农药溶剂标准工作曲线和基质标准工作曲线的相关系数在0.999 以上，线性关系非常好，符合《实验室质量控制规范 食品理化检测》(GB/T 27404-2008)标准要求。这就为样品加标色谱中比较农药残留量提供了较好的依据。溶剂为丙酮，基质溶液为混合基质丙酮溶液(为使基质具有一定的代表性,基质种类选择白菜、茄子、苹果、梨、橘子的等量混合基质)。

表1 检测结果比较（加标浓度0.20μg·mL-1）

(二)检测结果比较

从表1 中可以看出，添加保护剂后对于基质增强效应有很大程度的补偿作用,峰形及灵敏度都有极大改善。其中甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧化乐果、甲拌磷亚砜、亚胺硫磷、伏杀磷、甲基对硫磷等得到了很好的补偿。但添加保护剂对于显示有基质减弱效应的毒死蜱、马拉硫磷、水胺硫磷等并没有显示出补偿作用。同时从表中还可以看出，添加保护剂的溶剂标与基质配标响应一致，可以有效消除基质效应。

（三）回收试验的准确度与精密度

不加保护剂的13 种有机磷农药用溶剂标准曲线计算时，回收率为76%～139%。其中乙酰甲胺磷样品平行测定结果的重复性差。用溶剂标准曲线计算加保护剂的13 种有机磷农药时，回收率为88%～115%，回收率比不加保护剂计时好。其中乙酰甲胺磷样品平行测定结果的重复性不好。在6 次平行测定中，其峰面积随着测定次数的增加而增加，6 次测定值的RSD 达到14%。更换进样垫及衬管、老化色谱柱后再次测定，6 次测定值的RSD 为5%。用基质标准曲线计算不加保护剂的13 种有机磷农药时，回收率在89%～124%，与用溶剂标准曲线计算加保护剂的13 种有机磷农药时接近。

四、结果讨论

蔬菜、水果中的13 种有机磷农药的试验分析过程中添加分析保护剂对大多数农药能显著补偿由基质增强效应造成的定量误差，同时降低了检出限,改善了峰形，提高了灵敏度。相比利用空白基质标准曲线、频繁维护进样口等方法，添加分析保护剂这种方法的人工消耗少、经济成本低，效果显著。