TP方案联合放射治疗对食管癌患者miR-802 Smad4及食管黏膜组织黏蛋白1表达的影响

周海文 程欣宇 魏 涛 郑 一 李鸣鹤

食管癌是恶性肿瘤中病死率较高的恶性肿瘤[1-2]。多西他赛+顺铂化疗方案(TP)是目前临床治疗食管癌的基础化疗方案[3-4]。放射治疗是食管癌的有效治疗方式之一，但单独采用放射治疗的效果不理想。目前有研究[5]提示，TP方案联合放疗能够有效提高食管癌疗效、延长患者寿命，减轻不良反应，但有关TP方案联合放疗提高食管癌疗效的可能机制少有报道。为此，本文以80例食管癌患者为研究对象，通过随机对照研究，探讨TP联合放射治疗食管癌的疗效及其对miR-802、Smad4及食管黏膜组织黏蛋白1表达的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年1月至2019年12月安阳市肿瘤医院收治的食管癌患者80例，其中男性39例，女性41例；年龄65～72岁，平均(67.00±2.50)岁；病程48～71周，平均(59.50±9.20)周；肿瘤发生部位：胸中段27例，颈段及胸上段30例，胸下段23例；临床分期[6]：Ⅲ期35例，Ⅳ期25例。按照随机数字表法，将患者随机分为对照组和观察组，各40例。两组患者的年龄、性别、病程、发病部位、临床分期等一般资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。纳入标准：①所有患者均符合《实用肿瘤内科学》[7]中食管癌的诊断标准；②未进行过TP和放射治疗者；③无病灶转移者；④患者均为成年人；⑤患者及家属对本研究均知情同意并签署知情同意书。排除标准：①合并有严重肾脏损伤者；②合并有自身免疫功能疾病者；③不能配合治疗者。本研究经医院伦理会批准通过[批准文号：(2018)伦审第(52)号]。

表1 两组患者一般资料比较

1.2 方法

1.2.1 常规治疗 两组患者治疗期间每周查血常规及肝肾功能，出现Ⅱ度及以上中性粒细胞下降时予重组人粒细胞集落刺激因子升白细胞，出现Ⅱ度及以上血小板减少时予重组人白细胞介素-11或重组人血小板生成素升血小板。给予患者常规利尿、水化、止吐、保护胃黏膜等对症处理。

1.2.2 对照组 对照组患者给予放射治疗。操作方法：患者取仰卧姿态，使用螺旋CT模拟机，对患者肿瘤部位进行定位。根据图像，对患者靶区进行勾画，GTV为患者并病变范围，向病变范围外进行扩放，在前后左右各向外扩0.4～0.7 cm、再向上外扩3 cm，向下外扩4 cm为CTV，将CTV进行均匀外放0.5 cm称为PTV。患者均使用6MV-X射线行三维适形调强放疗进行放疗，放射剂量为50-64 GY。

1.2.3 观察组 观察组在对照组的基础上联合TP方案治疗。TP治疗方法：在放疗期间进行静脉滴注多西他赛(江苏恒瑞医药股份有限公司，国药准字：H20020543，规格：20毫克/支)，使用剂量75 mg/m2，治疗2 d后，肌肉注射顺铂[齐鲁制药(海南)有限公司，国药准字：H20073652，规格：10毫克/支]，使用剂量20 mg/m2。连续治疗2个疗程(1个疗程为7 d)。

1.2.4 观察指标及判定标准 治疗2个疗程后，观察并比较两组患者临床疗效、不良反应发生率，miR-802、Smad4、食管黏膜组织黏蛋白1表达水平和CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平的变化情况。①临床疗效。依据实体瘤疗效评价标准[8](response evaluation criteria in solid tumors，RECIST)进行评价：完全缓解(complete response，CR)为患者肿瘤部位消失，并且持续4周以上；部分缓解(partial response，PR)为肿瘤比治疗前缩小比例大于30%；客观缓解率(objective response rate， ORR),ORR=(CR+PR)例数/总病例数×100%。②不良反应发生率。治疗2个疗程过程中统计两组脱发、食欲不振、身体乏力、头痛不良反应发生情况。不良反应发生率=发生不良反应例数/总例数×100%。③食管黏膜组织黏蛋白1、Smad4水平。采用酶联免疫实验法检测，试剂盒购自上海美轩生物科技有限公司，操作过程严格按照说明书进行。显色后使用酶标仪比色读数，并计算出食管黏膜组织黏蛋白1、Smad4表达量。④T淋巴细胞亚群指标。采用流式细胞仪对两组患者CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平进行检测。⑤miR-802水平。应用荧光定量PCR法检测miR-802水平，采用Trizol(北京恩硕科技有限公司)提取总RNA，SYBR Green RCR master mix 试剂为北京恩硕科技有限公司。其中miR-802以U6为内参基因，miR-802正向引物：5’-ACCTGAAAGCGAAAGGGAAAC-3’，反向引物：5’-CACCCATCTCCTCCTTCTAGCC-3’；U6正向引物：5’-ATTGGAACGATACAGAGAAGATT-3’，反向引物：5’-GGAACGCTTCACGAATTTG-3’，反应体系共为20 μL，每个样品3个生物学重复，荧光定量PCR仪反应，设定：95 ℃ 1 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 15 s，72 ℃ 15 s，共42个循环，72 ℃延伸10 min。采用2-ΔΔCt算法计算 miR-802的相对表达量。按照反转录试剂盒(北京天根生化科技有限公司)操作步骤，将2 μg RNA反转录为cDNA。

2 结果

2.1 两组患者ORR比较 治疗2个疗程后，观察组患者的ORR高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组患者ORR比较

2.2 两组患者不良反应率比较 治疗后，观察组不良反应总发生率(62.50%)高于对照组(60.00%)，但差异无统计学意义(χ2=0.053,P=0.818)。见表2。

表2 两组患者不良反应发生情况比较(例)

2.3 两组患者肿瘤标志物表达量比较 治疗后，观察组患者的miR-802、Smad4、食管黏膜组织黏蛋白1表达量均高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 两组miR-802、Smad4及食管黏膜组织黏蛋白1表达量比较

2.4 两组患者T淋巴细胞亚群水平比较 观察组患者CD4+、CD4+/CD8+水平均高于对照组，CD8+水平低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 两组患者T淋巴细胞亚群水平比较

3 讨论

食管癌具有发病率高、易转移、易复发、治疗难度大等特点，早期症状不典型，大多数患者就诊时已失去手术机会。对中晚期食管癌，以放疗、化疗为主[9]。放疗作为一种有效治疗本病的方法，其敏感性高，但复发率较高，副作用较强[10]。而采用TP方案联合放疗的疗效要高于单纯放疗[11]，TP具有较高的抗肿瘤的活性，有效发挥干扰细胞生长和分裂等功能，诱导肿瘤细胞死亡。本文探讨TP方案+放射治疗对食管癌患者miR-802、Smad4、食管黏膜组织黏蛋白1表达的影响，旨为该治疗方案有效的可能机制提高参考依据。

本组资料显示，治疗2个疗程后，观察组ORR明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，且两组不良反应率差异无统计学意义(P>0.05)，表明TP联合放射治疗食管癌可显著提高临床疗效，且不增加副作用。与魏磊等[12]研究结果较为一致。

TP方案抗肿瘤活性高,对各种实体瘤具有广泛的细胞毒性作用，能够导致细胞死亡。放疗可以通过激活人体的免疫系统从而达到抵抗肿瘤的作用[13]。miR-802作为一种非编码的小RNA分子，其可通过调控患者下游基因表达，参与肿瘤的形成和代谢，miR-802作为抑癌基因，在食道癌细胞的增殖和迁移过程中miR-802的高表达可以发挥抑制癌细胞的作用[14]。Smad4作为Smad家族蛋白中的一员，在信号传导的过程中起到了重要的作用。Smad4作为一种肿瘤抑制基因，其表达水平与食道癌中癌细胞的发生发展相关，Smad4高表达可以抑制食道癌细胞的发生[15]。而食管黏膜组织黏蛋白1作为患者食管黏膜组织中一类高分子量糖蛋白，能够对细胞组织起到一定的保护作用，参与了信息传导通路的调节功能[16]。食管黏膜组织黏蛋白1蛋白结构主要由MUC-N和MUC-C亚基构成，食管黏膜组织黏蛋白1的过表达可以降低食道癌细胞的粘附作用，抑制癌细胞的侵袭[17]。TP方案联合放疗在抵抗食管癌细胞过程中蛋白信号通路会被激活，miR-802、Smad4、食管黏膜组织黏蛋白1会通过蛋白信号通路参与抑制食管癌细胞的增殖和迁移，从而导致miR-802、Smad4、食管黏膜组织黏蛋白1水平增加[18]。基于此,本研究中对患者的miR-802、Smad4水平进行了检测，研究结果发现，观察组miR-802、Smad4、食管黏膜组织黏蛋白1表达量均显著高于对照组(P<0.05)，表明TP联合放射治疗可提高食管癌患者的miR-802、Smad4、食管黏膜组织黏蛋白1表达量，且效果显著。

CD4+、CD8+、CD4+/CD8+在临床上通常用来诊断患者细胞免疫功能，能够对食管癌患者起到辅助诊断的作用[19]。采用TP方案联合放疗可以促进抗原释放刺激淋巴细胞，进而激活淋巴细胞，使其参与抗癌活动，故能够有效提高T淋巴细胞亚群水平使患者免疫功能得到有效提高。因此，本文研究中对患者CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平进行了检测，发现观察组患者CD4+、CD4+/CD8+水平高于对照组，CD8+水平低于对照组，表明使用TP联合放疗对食管癌患者进行治疗，能够改善患者免疫能力。

综上所述，TP联合放射治疗食管癌疗效显著，该治疗方案能够调控患者体内miR-802、Smad4、食管黏膜组织黏蛋白1表达水平，增强免疫能力。